BHI AGAR: नींव, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

BHI अगर या ब्रेन हार्ट आसव मध्यम अगर एक पोषक ठोस संस्कृति है। स्पेनिश में हम इसे ब्रेन हार्ट इनफ्यूजन एगर के रूप में संदर्भित करते हैं। यह एक गैर-चयनात्मक संस्कृति माध्यम है, जिसका अर्थ है कि सभी प्रकार के ग्राम सकारात्मक और ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया विकसित हो सकते हैं, साथ ही साथ कुछ खमीर और फिलामेंटस कवक भी हो सकते हैं।

यह बछड़े के मस्तिष्क और हृदय के जलसेक से बना है, जानवरों के ऊतकों से पेप्टिक हाइड्रोलाइजेट, कैसिइन के अग्नाशयी हाइड्रोलाइजेट, सोडियम क्लोराइड, ग्लूकोज, डिसोडियम फॉस्फेट और अगर।

BHI प्लेटें। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया फोटो। मारीलासा गिल।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि BHI अगर जीवाणु विज्ञान प्रयोगशालाओं में सबसे अधिक बार उपयोग किए जाने वाले संस्कृति मीडिया में से एक है। इसे प्राथमिक संस्कृति के रूप में पूरक के बिना इस्तेमाल किया जा सकता है, अन्य चयनात्मक मीडिया पर प्राप्त कालोनियों की उपसंस्कृति या प्रयोगशाला में उपभेदों के रखरखाव के लिए।

दूसरी ओर, यह समृद्ध मीडिया की तैयारी में एक आधार के रूप में इस्तेमाल किया जाने वाला एक आदर्श माध्यम है, जैसे कि रक्त अगर और चॉकलेट पवार। दोनों सूक्ष्मजीवों को पोषण के दृष्टिकोण से अलग करने के लिए आदर्श हैं। हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि चूंकि इसमें ग्लूकोज होता है इसलिए यह हेमोलिसिस पैटर्न को देखने के लिए उपयुक्त नहीं है।

इसी तरह, BHI agar का उपयोग आम मीडिया में कठिन-से-बढ़ने वाले रोगजनक सूक्ष्मजीवों के अलगाव के लिए विशेष मीडिया की तैयारी के लिए किया जा सकता है: उनमें से हीमोफिलस एसपी, फ्रांसिसैला टुलरेन्सिस, कोरियोरबैक्टेरियम डिप्थीरिया और हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलटम।

एंटीबायोटिक एडिटिव के साथ, बीएचआई एगर कवक के अलगाव के लिए एक चयनात्मक माध्यम बन जाता है।

आधार

यह सूक्ष्मजीवों की मांग को अलग-थलग करने के लिए एक पौष्टिक संस्कृति माध्यम है, और इसके संवर्धन को रक्त और अन्य पोषक तत्वों की खुराक के साथ बढ़ाया जा सकता है।

यह एक गैर-चयनात्मक संस्कृति माध्यम है, इसलिए यह अधिकांश ग्राम सकारात्मक और ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया, साथ ही साथ कुछ कवक के विकास की अनुमति देता है। हालांकि, इसे एंटीबायोटिक दवाओं के अतिरिक्त के साथ चयनात्मक बनाया जा सकता है।

इस माध्यम में बछड़े के मस्तिष्क और हृदय के जलसेक, जानवरों के ऊतकों के पेप्टिक हाइड्रोलाइज़ेट और कैसिइन के अग्नाशयी हाइड्रोलाइज़ेट शामिल हैं; ये सभी यौगिक विटामिन, अमीनो एसिड, नाइट्रोजन और कार्बन के स्रोतों के रूप में कार्य करते हैं।

ग्लूकोज एक ऐसा कार्बोहाइड्रेट है जो सूक्ष्मजीवों को ऊर्जा प्रदान करता है जब वे इसे किण्वित करते हैं। इस बीच, सोडियम क्लोराइड और Disodium फॉस्फेट आसमाटिक संतुलन बनाए रखते हैं और तटस्थता के लिए एक पीएच प्रदान करते हैं। अंत में, अग्र मध्यम ठोस स्थिरता देता है।

तैयारी

निर्जलित माध्यम का 52 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। उबालने तक मिश्रण को गर्मी स्रोत में ले आओ, विघटन प्रक्रिया के दौरान अक्सर सरगर्मी करें।

BHI अगर प्लेटें या वेज बिना एडिटिव्स के तैयार की जा सकती हैं।

Wedges

वेजेज की तैयारी के लिए, प्रत्येक ट्यूब का आधा भरा होने तक तैयारी परोसें, 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में कवर करें और स्टरलाइज़ करें, जब छोड़ते हैं, तब तक एक आधार पर रखना जब तक वे जम न जाएं। बाद में उपयोग करने तक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें।

बीएचआई बैक्टीरियोटेका के लिए वेजेज करता है। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया फोटो। मारीलासा गिल।

प्लेट्स

भंग किए गए मिश्रण को 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव किया जाता है, इसे छोड़ने पर, इसे 50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा करने की अनुमति दी जाती है और मध्यम 20 मिलीलीटर बाँझ पेट्री डिश में परोसा जाता है। उन्हें जमने दिया जाता है, उलटा किया जाता है और उपयोग होने तक रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जाता है। बीज बोने से पहले प्लेटों को कमरे के तापमान पर आने दें।

मध्यम का पीएच 7.4 of 0.2 पर रहना चाहिए।

कच्चा माध्यम रंग में बेज होता है और तैयार माध्यम रंग में हल्का एम्बर होता है।

रक्त अगर की तैयारी

मध्यम स्टरलाइज़ करने के बाद, लगभग 45 से 50 डिग्री सेल्सियस के तापमान तक ठंडा करें, फिर रक्त (50 मिलीलीटर) जोड़ें, धीरे से समरूपता में मिलाएं, और प्रत्येक पेट्री डिश में 20 मिलीलीटर की सेवा करें। यदि प्लेट पर बुलबुले बनते हैं, तो उन्हें खत्म करने के लिए बुलबुले के ऊपर से हल्की लौ को जल्दी से पारित किया जाना चाहिए।

इसी तरह, मिश्रण के 45 से 50 डिग्री सेल्सियस के तापमान तक पहुंचने पर संबंधित एडिटिव्स को जोड़कर विशेष मीडिया तैयार किया जा सकता है।

माध्यम चेरी लाल रहता है।

अनुप्रयोग

सप्लीमेंट के बिना उपयोग करें

बिना एडिटिव्स के BHI Agar एक प्राथमिक संस्कृति के रूप में उपयोगी है और उनकी बाद की पहचान के लिए सूक्ष्मजीवों की मांग वाले कम या मध्यम शुद्ध उपभेदों को बोने के लिए।

जैसा कि यह एक हल्के रंग का माध्यम है, यह पिगमेंट का निरीक्षण करने के लिए आदर्श है और, क्योंकि इसमें हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ नहीं होते हैं, कुछ जैव रासायनिक परीक्षण, जैसे ऑक्सीडेज और केटेस, इस पर किए जा सकते हैं, या अन्य जैव रासायनिक परीक्षण इस से कॉलोनियों में लगाए जा सकते हैं। अगर।

इसी तरह, BHI agar wedges प्रयोगशाला में एक निश्चित समय के लिए उपभेदों के रखरखाव के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है (बैक्टीरियोटेकस)।

बैक्टीरियल उपभेदों के साथ सतह के आधार पर लगाए गए प्लेट या वेडेज को 24 से 48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। इस बीच, कवक में तापमान और ऊष्मायन समय उस कवक के प्रकार पर निर्भर करेगा जो मांगा जा रहा है।

अन्य मीडिया की तैयारी के लिए आधार अगर के रूप में

इस आधार के साथ, समृद्ध और चयनात्मक मीडिया तैयार किया जा सकता है।

समृद्ध

इसका मुख्य कार्य माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशालाओं में नियमित उपयोग के लिए रक्त अगर की तैयारी के लिए एक आधार के रूप में सेवा करना है। विशेष रूप से, बीएचआई आधार स्ट्रेप्टोकोकस एसपी के अलगाव के लिए अनुकूल है। हालांकि, यह हेमोलिसिस पैटर्न का पालन करने के लिए उपयुक्त नहीं होने का दोष है क्योंकि इसमें ग्लूकोज होता है।

हेमोफिलस सपा के अलगाव के लिए खरगोश या घोड़े के रक्त अगर की तैयारी में भी इसका उपयोग किया जाता है। सर्वोत्तम परिणामों के लिए, एक संवर्धन पूरक (IsoVitaleX) जोड़ा जा सकता है।

यदि नमूने श्वसन पथ से आते हैं, तो बैक्ट्रासीन को अगार के साथ वनस्पतियों को बाधित करने और हेमोफिलस एसपी की वसूली की संभावना में वृद्धि करने के लिए जोड़ा जा सकता है।

वैकल्पिक रूप से, सिस्टीन टेलूराइट के साथ रक्त अगर (मेमना या मानव) Corynebacterium diphtheriae को अलग करने के लिए तैयार किया जा सकता है। इसी तरह, यह फ्रांसिसैला ट्यूलेंसिस के अलगाव के लिए सिस्टीन और ग्लूकोज को मिलाकर, खरगोश के रक्त अगर को तैयार करने के लिए उपयोगी है।

रक्त अगर प्लेटों का बीजारोपण थकावट द्वारा किया जाता है और उन्हें माइक्रोएरोफिलिसिस (5-10% सीओ ₂) में 24-48 घंटों के लिए 35-37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है ।

चयनात्मक

एंटीबायोटिक दवाओं के अतिरिक्त के साथ यह माध्यम कवक के अलगाव के लिए साबुर्ड अगर की जगह ले सकता है।

क्लोरैमफेनिकॉल के साथ बीएचआई अगर का संयोजन - जेंटामाइसिन या पेनिसिलिन -, स्ट्रेप्टोमाइसिन और घोड़े का खून हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलैटम के अलगाव के लिए आदर्श है।

सूक्ष्मजीव को अलग-थलग करने के लिए, 35-37 डिग्री सेल्सियस पर या एयरोबायोसिस में कमरे के तापमान पर ऊष्मायन की सिफारिश की जाती है। कभी-कभी दोनों तापमान रेंज में ऊष्मायन आवश्यक होता है, इसके लिए 2 प्लेटों का उपयोग किया जाता है।

कुछ फफूंद जैसे कि ट्राइकोफाइटन मेन्ताग्रोफाइट्स को 7 दिनों तक कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करना चाहिए।

क्यूए

तैयार किए गए प्रत्येक बैच से, 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 प्लेट या पच्चर को उकसाने की सिफारिश की जाती है और सत्यापित करें कि कोई विकास नहीं है; रक्त अगर तैयार करते समय यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह एक आसानी से दूषित माध्यम है।

दूसरी ओर, माध्यम की गुणवत्ता का मूल्यांकन ज्ञात या प्रमाणित मानक उपभेदों के टीकाकरण और उनके विकास को देखकर किया जा सकता है।

इस अर्थ में, एडिटिविया कोलाई ATCC 25922, स्टैफिलोकोकस ऑरियस ATCC 25923 या कैंडिडा अल्बिकन्स ATCC 10231 के बिना एडिटिव्स के BHI अगर का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इन्हें 24 से 48 घंटों के लिए एरोबियोसिस में 37 ° C पर ऊष्मायन किया जाता है। सभी मामलों में, संतोषजनक वृद्धि की उम्मीद है।

स्ट्रेप्टोकोकस pyogenes के उपभेदों ATCC 19615, स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया ATCC 6305, या Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 रक्त एग्रो प्लेटों का मूल्यांकन करने के लिए बीजित किया जा सकता है।

बैक्टीरियल उपभेदों को 24 घंटे के लिए माइक्रोएरोफिलिसिटी में 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है, जबकि कवक को 7 दिनों तक नम कक्ष में कमरे के तापमान पर लगाया जाता है। सभी मामलों में संतोषजनक वृद्धि की उम्मीद है।

संदर्भ

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