- आधार
- तैयारी
- पित्त एस्कुलिन अगर की घर की तैयारी
- एक वाणिज्यिक माध्यम से पित्त एस्कुलिन अगर तैयार करना
- अनुप्रयोग
- बोया
- व्याख्या
- क्यूए
- सीमाएं
- संदर्भ
पित्त esculin अगर एक चयनात्मक और अंतर मध्यम ठोस संस्कृति है। यह एक निश्चित सूक्ष्मजीव की पित्त से युक्त माध्यम में विकसित करने और एस्कुलेटिन और ग्लूकोज में ग्लूकोसाइड एस्कुलिन को तोड़ने के लिए निर्धारित करने के लिए एक नैदानिक परीक्षण के रूप में उपयोग किया जाता है।
इस नैदानिक परीक्षण का उपयोग स्ट्रेप्टोकोकस के अन्य समूहों से समूह डी (पित्त एसकुलिन पॉजिटिव) से संबंधित जीनस स्ट्रेप्टोकोकस की प्रजातियों को अलग करने के लिए किया जाता है, जो इस परीक्षण के लिए नकारात्मक प्रतिक्रिया करते हैं।
पित्त esculin अगर प्लेट, एक Enterococcus तनाव (परीक्षण सकारात्मक) के साथ वरीयता प्राप्त। स्रोत: कोई मशीन-पठनीय लेखक प्रदान नहीं किया गया। फिलिपिंजल ने ग्रहण किया (कॉपीराइट दावों के आधार पर)।
यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि वर्जिन समूह के कुछ स्ट्रेप्टोकोकस एस्कुलिन को हाइड्रोलाइज कर सकते हैं, लेकिन 40% की एकाग्रता में पित्त की उपस्थिति में बढ़ने में सक्षम नहीं हैं, इसलिए, इस माध्यम में इस समूह के लिए प्रतिक्रिया नकारात्मक है।
दूसरी ओर, पित्त एस्कुलिन माध्यम भी लिस्टेरिया मोनोसाइटोजेन्स या एरोकोकस एसपी प्रजातियों के निदान के लिए उपयोगी है, क्योंकि ये सूक्ष्मजीव पित्त एसकुलिन पॉजिटिव हैं।
Esculin Bile Agar पेप्टोन, मांस के अर्क, बैल पित्त, एसकुलिन, लौह साइट्रेट, अगर और आसुत जल से बना है। कुछ वाणिज्यिक घरों में माध्यम की संरचना के भीतर सोडियम एज़ाइड शामिल है।
माध्यम को प्रयोगशाला में तैयार किया जा सकता है यदि आपके पास सभी यौगिक अलग-अलग हैं या इसे वाणिज्यिक निर्जलित माध्यम से तैयार किया जा सकता है।
आधार
पित्त एस्कुलिन माध्यम में पेप्टोन और मांस का अर्क होता है, दोनों यौगिक सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए आवश्यक पोषक तत्व प्रदान करते हैं।
इसमें एस्कुलिन भी शामिल है; यह यौगिक एक ग्लाइकोसाइड है जो एक साधारण मोनोसैकराइड (ग्लूकोज) के मिलन से बनता है, जिसमें 6,7-डायहाइड्रोक्सीकोयूमिन या एस्क्यूलेटिन (एग्लूकोन) नामक यौगिक होता है, जो एक एसिटल या ग्लूकोसिडिक बंधन से जुड़ा होता है।
परीक्षण यह दिखाने पर आधारित है कि बैक्टीरिया एस्कुलिन को हाइड्रोलाइजिंग करने में सक्षम है या नहीं। यदि ऐसा होता है, तो एस्कुलिन एस्कुलेटिन और ग्लूकोज में टूट जाता है। एस्कुलेटिना माध्यम में मौजूद लोहे के साथ प्रतिक्रिया करता है, एक गहरे भूरे, लगभग काले यौगिक का निर्माण करता है।
इसका मतलब यह है कि फेरिक साइट्रेट प्रतिक्रिया डेवलपर के रूप में कार्य करता है। यह विशेषता Bile Esculin Agar को एक अंतर माध्यम बनाती है।
इसके भाग के लिए, पित्त एक अवरोधक है जो कुछ सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकता है, इसलिए, एस्कुलिन को विभाजित करने से पहले जीवाणु, पित्त की उपस्थिति में बढ़ने में सक्षम होना चाहिए। इसलिए, इस माध्यम को चयनात्मक माना जाता है।
इस वातावरण में विकसित होने वाले जीवाणु मुख्य रूप से वे होते हैं जो आंतों के वातावरण में रहते हैं।
इस अर्थ में, कुछ व्यावसायिक कंपनियां एंटरिक ग्राम निगेटिव बेसिली के विकास को बाधित करने के लिए माध्यम में सोडियम एजाइड जोड़ते हैं, स्ट्रेप्टोकोकस के विकास के लिए माध्यम की चयनात्मकता को बढ़ाते हैं।
अंत में, अग्र माध्यम को ठोस स्थिरता देता है और पानी यौगिकों का विलायक है।
तैयारी
पित्त एस्कुलिन अगर की घर की तैयारी
तौलना:
5 ग्राम पेप्टोन
मांस निकालने के 3 ग्राम
40 ग्राम बीफ़ पित्त
1 ग्राम एस्कुलिन
लोहे के साइट्रेट का 0.5 ग्राम
15 ग्राम अगर
आसुत जल के 1000 मिली
सोडियम एज़ाइड जोड़ने के मामले में, 0.25 ग्राम / लीटर वजन और मिश्रण में जोड़ा जाता है।
आसुत जल के लीटर में घटकों को भंग करें, जब तक यौगिक पूरी तरह से भंग नहीं हो जाते तब तक गर्म करें। 16 x 125 मिमी स्क्रू कैप टेस्ट ट्यूबों में 5 मिलीलीटर वितरित करें। आटोक्लेव 121 डिग्री सेल्सियस, 15 मिनट के लिए 15 पाउंड दबाव।
आटोक्लेव से निकालें और एक समर्थन पर ट्यूबों को झुकाएं, ताकि अग्र एक व्यापक बांसुरी की चोंच में जम जाए।
उपयोग करने तक एक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें। बुवाई से पहले कमरे के तापमान पर लाएं।
पित्त एस्कुलिन अगर प्लेटें भी तैयार की जा सकती हैं; इस मामले में, पूरे मिश्रण को एक फ्लास्क में रखा जाता है और बाद में बाँझ पेट्री डिश में वितरित किया जाता है। उन्हें जमने दें और फ्रिज में स्टोर करें।
मध्यम का पीएच 6.6। 0.2 होना चाहिए।
एक वाणिज्यिक माध्यम से पित्त एस्कुलिन अगर तैयार करना
सम्मिलित द्वारा निर्दिष्ट राशि का वजन करें। यह एक व्यवसायिक घर से दूसरे में भिन्न हो सकता है। इसके बाद, ऊपर बताई गई प्रक्रिया के अनुसार आगे बढ़ें।
मध्यम का पीएच 6.6। 0.2 होना चाहिए। निर्जलित माध्यम का रंग हल्का बेज है और तैयार माध्यम गहरे रंग का एम्बर है।
वाणिज्यिक पित्त esculin मध्यम। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया फोटो। मारीलासा गिल।
अनुप्रयोग
पित्त एस्कुलिन माध्यम का उपयोग मुख्य रूप से ग्रुप डी स्ट्रेप्टोकोकस (पित्त एसकुलिन पॉजिटिव) को अलग करने के लिए किया जाता है, बाकी स्ट्रेप्टोकोकस समूहों (पित्त एस्कुलिन नकारात्मक) से।
पित्त एस्कुलिन परीक्षण के साथ हाइपरसैलेटेड शोरबा विकास परीक्षण को मिलाकर ग्रुप डी स्ट्रेप्टोकोकस के एक विशेष समूह को एंटरोकोकस कहा जा सकता है।
स्ट्रेप्टोकोकस का यह विशेष समूह पूर्वोक्त जीनस के समूह डी के अंतर्गत आता है और वे पित्त की उपस्थिति में एस्कुलिन को हाइड्रोलाइजिंग करने में सक्षम होते हैं, जैसा कि समूह डी के बाकी सदस्य करते हैं, लेकिन वे एक हाइपरसैलेटेड माध्यम में विकसित करने में भी सक्षम हैं (क्लोराइड के साथ बीएचआई) 6.5% सोडियम), एक संपत्ति जो अंतर बनाती है।
इसलिए, स्ट्रेप्टोकोकी कि हाइड्रोक्लीज़ एस्कुलिन पित्त को बढ़ाता है लेकिन हाइपरस्पेक्टेड शोरबा में नहीं बढ़ता है, इसे गैर-एंटरोकोसी ग्रुप डी स्ट्रेप्टोकोकी कहा जाता है।
बोया
एक शुद्ध टोड-हेविट 24 घंटे शोरबा से अधिमानतः मध्यम टीका लगाएं।
एक पाश्चर विंदुक के साथ मध्यम की सतह पर 2 बूंदें जोड़ें और मध्यम में एक प्लैटिनम लूप के साथ फैलाएं।
48 घंटे के लिए 35 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं, जबकि ऊष्मायन समय पूरा होता है, यह देखने के लिए निगरानी की जा सकती है कि क्या सकारात्मक प्रतिक्रिया है। यदि समय के अंत में प्रतिक्रिया नकारात्मक रहती है, तो इसे 72 घंटों तक ऊष्मायन किया जा सकता है।
व्याख्या
सकारात्मक प्रतिक्रिया: एक गहरे भूरे रंग की उपस्थिति, बांसुरी की चोंच में लगभग काला रंग (ट्यूब परीक्षण के मामले में) या कालोनियों के आसपास अगर (प्लेट परीक्षण के मामले में) का काला पड़ना।
नकारात्मक प्रतिक्रिया: माध्यम का कोई कालापन नहीं होता है या ऊष्मायन के 72 घंटों के बाद आधे से भी कम समय में एक काली उपस्थिति होती है। दूसरी ओर, काले रंग की उपस्थिति के बिना माध्यम में बैक्टीरिया का विकास एक नकारात्मक परीक्षण माना जाना चाहिए।
क्यूए
माध्यम की गुणवत्ता का मूल्यांकन करने के लिए, एक एंटरोकोकस फेसेलिस एटीसीसी 29212 तनाव को एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपलब्ध होना चाहिए और स्ट्रेप्टोकोकस तनाव एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में समूह डी से संबंधित नहीं है।
सीमाएं
-Media जिसमें सोडियम एज़ाइड नहीं होता है, एंटरिक ग्राम नकारात्मक बेसिली के विकास की अनुमति देते हैं। उनमें से कुछ बीच को काला कर सकते हैं।
- कुछ वाणिज्यिक घर पित्त (10%) की कम सांद्रता को जोड़ते हैं और इस कारण से कुछ स्ट्रेप्टोकोकस जो समूह डी से संबंधित नहीं होते हैं, वे मध्यम और हाइड्रोलाइज़ एस्कुलिन में विकसित हो सकते हैं, जो व्याख्या में त्रुटियां उत्पन्न कर सकते हैं।
संदर्भ
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