सीमन्स साइट्रेट अगर यह एक ठोस जैव रासायनिक पहचान परीक्षण सूक्ष्मजीवों, विशेष रूप से ग्राम के रूप में इस्तेमाल माध्यम है - नकारात्मक बेसिली। मूल माध्यम 1923 में कोसर द्वारा बनाया गया था।
कोसर के साइट्रेट माध्यम में सोडियम फास्फेट, अमोनियम फॉस्फेट, मोनोपोटेशियम फॉस्फेट, मैग्नीशियम सल्फेट और सोडियम साइट्रेट युक्त शोरबा होता है।
A. निर्जलित सीमन्स साइट्रेट Agar वाणिज्यिक माध्यम B. तैयार सीमन्स साइट्रेट Agar। स्रोत: ए। फोटो एमएससी द्वारा लिया गया। विकिमीडिया कॉमन्स से मारिएला गिल बी
जैसा कि देखा जा सकता है, माध्यम में कार्बन का एकमात्र स्रोत साइट्रेट है, और नाइट्रोजन अमोनियम फॉस्फेट है, इन तत्वों के स्रोत के रूप में प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट को छोड़ते हैं, वे आमतौर पर अन्य मीडिया में मौजूद होते हैं।
इसलिए, इस माध्यम में डाले गए बैक्टीरिया केवल पुन: उत्पन्न कर सकते हैं यदि यह साइट्रेट से कार्बन लेने में सक्षम है। यदि माध्यम में टर्बिडिटी थी, तो परीक्षण सकारात्मक था, हालांकि इसका नुकसान यह था कि गैर-विशिष्ट टर्बिडिटी हो सकती है।
इस समस्या का समाधान सीमन्स ने ब्रोमोथाइमॉल ब्लू और एगर कोसर के मूल सूत्र में जोड़कर किया। यद्यपि सिद्धांत समान है, इसकी व्याख्या अलग तरह से की जाती है।
आधार
कुछ जीवाणुओं में किण्वन या लैक्टिक एसिड उत्पादन की अनुपस्थिति में जीवित रहने की क्षमता होती है, जिन्हें अन्य सब्सट्रेट्स के उपयोग के माध्यम से ऊर्जा प्राप्त करने की आवश्यकता होती है। इस परीक्षण में केवल प्रस्तुत कार्बन स्रोत साइट्रेट है।
इन परिस्थितियों में जीवित रहने में सक्षम बैक्टीरिया तेजी से पारंपरिक मार्ग के विकल्प में साइट्रेट को मेटाबोलाइज़ करते हैं, ट्राइकारबॉक्सिलिक एसिड चक्र या साइट्रेट किण्वन चक्र का उपयोग करते हैं।
बैक्टीरिया द्वारा साइट्रेट के अपचय को कोनेजाइम ए के हस्तक्षेप के बिना एक एंजाइमैटिक तंत्र शामिल है। यह एंजाइम साइट्रिकस (साइट्रेट ऑक्सालोसेट-लीसेज़) या साइट्रेट डेस्मोलेज़ के नाम से जाना जाता है। प्रतिक्रिया के लिए एक शिष्टता की उपस्थिति की आवश्यकता होती है, जो उस स्थिति में मैग्नीशियम द्वारा आपूर्ति की जाती है।
प्रतिक्रिया से ऑक्सालोसेटेट और पाइरूवेट उत्पन्न होता है, जो फिर नाइट्रोजन के स्रोत के उपयोग से बनने वाले एक क्षारीय पीएच के बीच में कार्बनिक अम्ल को जन्म देता है। इन कार्बनिक अम्लों का उपयोग कार्बन स्रोत और कार्बोनेट्स पैदा करने वाले कार्बन स्रोत के रूप में किया जाता है, जो पर्यावरण को और अधिक सक्रिय करता है।
बुवाई मोड
सीमन्स साइट्रेट माध्यम को सीधे लूप या सुई का उपयोग करके फिशटेल में हल्के ढंग से टीका लगाया जाना चाहिए, और 35-37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया जाना चाहिए। समय के बाद, परिणाम देखे जाते हैं।
बीजाई केवल अगर की सतह पर की जाती है। पंचर न करें।
व्याख्या
यदि माध्यम मूल रंग (हरा) रहता है और कोई दिखाई देने वाला विकास नहीं होता है, तो परीक्षण नकारात्मक है, लेकिन यदि माध्यम नीला हो जाता है, तो यह क्षारीय उत्पादों की उपस्थिति को इंगित करता है, जिसे पीएच संकेतक द्वारा पता लगाया जाता है। इस मामले में परीक्षण सकारात्मक है।
साइट्रेट (+) और (-)। स्रोत: एमएससी मारिलेस गिल
ऐसा इसलिए होता है क्योंकि यदि जीवाणु साइट्रेट के कार्बन का उपयोग करता है, तो यह अमोनियम फॉस्फेट के नाइट्रोजन को लेने में भी सक्षम है, जिसके साथ यह अमोनिया जारी करता है, माध्यम को क्षारीय करता है।
दूसरी ओर, यदि माध्यम में जीवाणुओं की वृद्धि देखी जाती है, लेकिन कोई रंग परिवर्तन नहीं होता है, तो परीक्षण को भी सकारात्मक माना जाना चाहिए, क्योंकि यदि विकास होता है, तो इसका मतलब है कि बैक्टीरिया कार्बन स्रोत के रूप में साइट्रेट का उपयोग करने में सक्षम था, हालांकि फिलहाल पीएच में कोई बदलाव नहीं हुआ है (कभी-कभी इसमें समय भी लग सकता है)।
यदि अंतिम रंग की व्याख्या में कोई संदेह है, तो इसकी तुलना एक गैर-इनकोलेटेड साइट्रेट ट्यूब से की जा सकती है।
तैयारी
एक लीटर पानी के लिए निर्जलित माध्यम का 24.2 ग्राम वजन। मिक्स करें और इसे लगभग 5 मिनट तक आराम दें। 1 या दो मिनट के लिए गर्म करके माध्यम को भंग करना समाप्त करें, अक्सर मिलाते हुए।
15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर टेस्ट ट्यूब और आटोक्लेव में 4 मिलीलीटर डालो। आटोक्लेव को छोड़ते समय, इस तरह से एक समर्थन की मदद से झुकना चाहिए ताकि अगरर थोड़ा ब्लॉक या नीचे और अधिक बेवल के साथ एक बांसुरी चोंच के आकार में जम जाए।
साइट्रेट माध्यम का अंतिम पीएच 6.9 (हरा रंग) है। पीएच में बदलाव के लिए यह माध्यम बहुत संवेदनशील है।
पीएच 6 या उससे नीचे, मध्यम पीला हो जाता है। बैक्टीरिया के परीक्षण में यह रंग नहीं देखा गया है।
और पीएच 7.6 या उससे ऊपर, मध्यम गहरा प्रशिया नीला हो जाता है।
उपयोग
सीमन्स साइट्रेट अगार का उपयोग कुछ सूक्ष्मजीवों की पहचान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से एंटरोबैक्टीरिया परिवार से संबंधित बेसिली और अन्य गैर-ग्लूकोज किण्वन बेसिली।
स्रोत: कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।
अंतिम विचार
सीमन्स साइट्रेट माध्यम एक बहुत ही नाजुक परीक्षा है, क्योंकि कुछ गलतियां होने पर झूठी सकारात्मकता प्राप्त की जा सकती है।
ध्यान रखा जाना चाहिए कि निम्नलिखित हैं:
inoculum
बहुत मोटी या भरी हुई बैक्टीरियल इनोकुलम नहीं बनाई जानी चाहिए, क्योंकि यह बुवाई के स्थान पर तांबे के पीले रंग को विकसित करने का कारण बन सकता है, बाकी के माध्यम को प्रभावित किए बिना, लेकिन यह विश्वास कर सकता है कि विकास है। इसका अर्थ परीक्षण की सकारात्मकता नहीं है।
इसके अलावा, एक मोटी inoculum एक झूठी सकारात्मक उत्पन्न कर सकता है, क्योंकि मरने वाले बैक्टीरिया की कोशिका भित्ति के भीतर मौजूद कार्बनिक यौगिक पीएच संकेतक को चालू करने के लिए पर्याप्त कार्बन और नाइट्रोजन छोड़ सकते हैं।
इसलिए, आदर्श है कि प्लेटिनम हैंडल के बजाय सुई का उपयोग करके, अतिरिक्त सामग्री लेने से बचें।
बोया
दूसरी ओर, जब प्रश्न में सूक्ष्मजीव की पहचान के लिए जैव रासायनिक परीक्षणों की बैटरी को सीड किया जा रहा है, तो यह महत्वपूर्ण है कि साइट्रेट टेस्ट सबसे पहले इनोक्युलेटेड है, दूसरे माध्यम से प्रोटीन या कार्बोहाइड्रेट के कैरी ओवर से बचने के लिए।
इस परिस्थिति में एक झूठी सकारात्मक प्राप्त करना संभव है, क्योंकि इनमें से कोई भी पदार्थ जो गलती से पेश किया जाता है, उसे चयापचय किया जाएगा और पीएच में बदलाव का कारण होगा।
पदार्थों के कैरी-ओवर से बचने का एक और तरीका है कि लूप को अच्छी तरह से जलाया जाए और एक परीक्षण और दूसरे के बीच एक नया इनोक्यूलम लिया जाए।
उपनिवेश प्रदर्शन करने के लिए कॉलोनी को छूते समय देखभाल भी की जानी चाहिए, क्योंकि यह उस संस्कृति से आगार के हिस्से को खींचने से बचा जाना चाहिए जहां से बैक्टीरिया आते हैं, ऊपर वर्णित के कारण।
इस अर्थ में, मत्स्यन, शेरिस और ब्रैनसन अन्य कार्बन स्रोतों के हस्तांतरण से बचने के लिए साइट्रेट परीक्षण का टीका लगाने से पहले शारीरिक समाधान में इनोकुलम को पतला करने की सलाह देते हैं।
रंग की तीव्रता
यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि परीक्षण सकारात्मक होने पर उत्पादित रंग की तीव्रता वाणिज्यिक घर के अनुसार भिन्न हो सकती है।
इसके अलावा, ऐसे सूक्ष्मजीव हैं जो 24 घंटों में सकारात्मक परीक्षण करते हैं, लेकिन ऐसे अन्य उपभेद हैं जिन्हें पीएच में बदलाव का उत्पादन करने के लिए 48 घंटे या उससे अधिक की आवश्यकता होती है।
संदर्भ
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