मानक अगर मनका: तर्क, तैयारी और उपयोग करता है - जीवविज्ञान - 2025

मानक गिनती अगर एक ठोस, गैर चयनात्मक संस्कृति मध्यम, पीने के पानी, अपशिष्ट जल, डेयरी पेय पदार्थ, अन्य खाद्य पदार्थों के बीच के नमूने में एरोबिक माइक्रोबियल लोड की मात्रा के लिए बनाया गया है। इस माध्यम को PCA agar के नाम से भी जाना जाता है, अंग्रेजी प्लेट काउंट आगर में इसके संक्षिप्त रूप के लिए। यह 1953 में बुचबिंदर, बारिस और गोल्डस्टीन द्वारा बनाया गया था।

मानक गणना अगर माध्यम खमीर निकालने, ट्रिप्टीन, ग्लूकोज, अगर और आसुत जल से बना है। इस सूत्रीकरण में बुनियादी पोषण तत्व होते हैं जो वर्तमान एरोबिक माइक्रोबियल लोड के विकास की अनुमति देते हैं, मांग नहीं।

मानक कृषि गणना में CFU की गिनती के लिए दशमलव कमजोर पड़ने। स्रोत: क्वेंटिन गीसमैन

चूंकि माध्यम में अवरोधक नहीं होते हैं, बैक्टीरिया बिना किसी प्रतिबंध के बढ़ सकते हैं, जिससे यह सामान्य कॉलोनी की गिनती के लिए आदर्श बन जाता है। हालांकि, प्लेट की मात्रा का पता लगाने की तकनीक में मौजूद सभी बैक्टीरिया का पता नहीं चलेगा, लेकिन केवल वे ही जो पर्यावरणीय परिस्थितियों में बढ़ने में सक्षम हैं, जिनके लिए सीड स्टैंडर्ड काउंट एगर के अधीन है।

इस अर्थ में, प्लेट परिमाणीकरण तकनीक आम तौर पर एरोबिक मेसोफिलिक प्रकार के बैक्टीरिया की मात्रा निर्धारित करने का प्रयास करती है, अर्थात, जो कि 25 और 40 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान पर बढ़ते हैं, 37 डिग्री सेल्सियस के इष्टतम विकास तापमान के साथ। ।

यह जीवाणु समूह बहुत महत्वपूर्ण है, क्योंकि मनुष्य के लिए अधिकांश रोगजनक बैक्टीरिया वहाँ पाए जाते हैं।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि कभी-कभी भोजन में मौजूद साइकोफिलिक बैक्टीरिया की मात्रा को निर्धारित करना दिलचस्प हो सकता है। ये बैक्टीरिया वे होते हैं जो कम तापमान (<20 ° C) पर बढ़ते हैं और भोजन के तेजी से विघटित होने पर भी भोजन को खराब करने के लिए जिम्मेदार होते हैं।

इसी तरह, थर्मोफिलिक बैक्टीरिया, जो 50 डिग्री सेल्सियस से 80 डिग्री सेल्सियस या उससे अधिक के बीच की सीमा में विकसित होते हैं, कुछ प्रकार के भोजन जैसे डिब्बाबंद खाद्य पदार्थों में महत्वपूर्ण हो सकते हैं।

माइक्रोबियल मात्रा का ठहराव कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) में प्रति ग्राम या नमूने के मिलीलीटर में व्यक्त किया जाता है।

आधार

मानक गणना माध्यम को गैर-फास्टिड एरोबिक बैक्टीरिया को खमीर निकालने, ट्रिप्टिन, और ग्लूकोज के सफल विकास की अनुमति देने के लिए डिज़ाइन किया गया है जो अच्छे माइक्रोबियल विकास के लिए आवश्यक पोषक तत्व प्रदान करते हैं।

दूसरी ओर, मध्यम में एक हल्का रंग और एक पारदर्शी उपस्थिति है, यही वजह है कि यह गहरी बोने की विधि (प्लेट डालने) द्वारा विकसित कालोनियों के दृश्य के लिए आदर्श है।

Drigalski स्पैटुला सतह सीडिंग विधि द्वारा कॉलोनी की गिनती भी संभव है।

जब माइक्रोबियल लोड अधिक होता है, तो अध्ययन नमूने के दशमलव dilutions CFUs को गिनने में सक्षम होना चाहिए।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यह माध्यम अमेरिकन पब्लिक हेल्थ एसोसिएशन (APHA) द्वारा एरोबिक मेसोफाइल की गिनती के लिए अनुशंसित है।

तैयारी

निर्जलित माध्यम का 23.5 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। पूरी तरह से भंग करने के लिए, मिश्रण को उबालने तक अक्सर गरम किया जाना चाहिए। उप-बाद के चरणों का उपयोग करने के लिए सीडिंग तकनीक पर निर्भर करता है।

डालना-प्लेट तकनीक के लिए

12 से 15 मिलीलीटर टेस्ट ट्यूब में फैलाकर वितरित करें। इसके बाद, 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ। किसी खंड के आकार में लंबवत जमने दें। उपयोग करने तक फ्रिज में स्टोर करें।

जब आप इसका उपयोग करने जा रहे हों तब प्लग को पिघलाएं। एक बार पिघलने के बाद, इसे 44-47 ° C पर पानी के स्नान में रखें, जबकि नमूने तैयार किए जाते हैं।

सतह बुवाई के लिए

121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में मध्यम बाँझ और फिर बाँझ पेट्री डिश में 20 मिलीलीटर वितरित। उपयोग करने तक फ्रिज में जमने, पलटने और स्टोर करने दें।

उपयोग करने से पहले टेम्पर प्लेट। माध्यम का पीएच 7.0 should 0.2 होना चाहिए।

उपयोग

पानी और भोजन के सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण के दौरान एरोबिक मेसोफिलिक गिनती तकनीक में स्टैंडर्ड काउंट एगर का उपयोग किया जाता है। एरोबिक मेसोफाइल की गिनती आवश्यक है, क्योंकि यह अध्ययन के तहत नमूने की स्वच्छता गुणवत्ता निर्धारित करता है।

इस तकनीक के अनुप्रयोग (इस माध्यम का उपयोग करके) अपने काल-निर्धारण के लिए पृथक कालोनियों के स्थूल दृश्य की अनुमति देता है।

प्लेट डालना तकनीक (गहराई से बोना)

-Process

तकनीक में निम्नलिखित शामिल हैं:

1) उपस्थित बैक्टीरिया को फिर से विभाजित करने के लिए नमूना को होमोजिनाइज करें।

2) एक प्रारंभिक निलंबन 90 मिलीलीटर मंदक (10 ^-1) में 10 जीआर या 10 मिलीलीटर नमूने के अनुपात का सम्मान करते हुए, एक बाँझ बोतल या बैग में बनाया जाता है ।

3) प्रारंभिक निलंबन से, प्रासंगिक दशमलव dilutions नमूने के प्रकार के आधार पर बनाया जाता है। Ex: (10 ^-2, 10 ^-3, 10 ^-4)। पेप्टोन पानी या फॉस्फेट बफर के साथ पतला किया जाता है।

ऐसा करने के लिए प्रारंभिक निलंबन के 1 मिलीलीटर लेने के लिए और मंदक के 9 मिलीलीटर में रखें, यदि आवश्यक हो dilutions, जारी रखने के लिए अब 10 1 मिलीलीटर लेने ^-2 कमजोर पड़ने पर और इतने।

4) प्रत्येक कमजोर पड़ने पर 1 मिलीलीटर लें और खाली बाँझ पेट्री डिश में रखें।

5) प्रत्येक प्लेट में 12 से 15 मिली स्टैण्डर्ड काउंट अगर पहले पिघले और 44 - 47 ° C पर बसा।

6) धीरे से समान रूप से नमूना वितरित करने के लिए प्लेटों को घुमाएं और इसे जमने दें।

7) प्लेटों को पलटना और 24 से 48 घंटों के लिए एरोबायोसिस में 37 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं।

8) समय के अंत में, प्लेटों की जांच की जाती है और कालोनियों को गिना जाता है जो इसे अनुमति देता है। जिन प्लेटों में 30 से 300 सीएफयू होते हैं, उन्हें गिनती के लिए चुना जाता है।

गिनती मैन्युअल रूप से की जा सकती है या आप कॉलोनी काउंटर उपकरण का उपयोग कर सकते हैं।

नमूने के प्रति मिलीलीटर की अनुमति दिए गए मान उन नियमों के आधार पर एक देश से दूसरे देश में भिन्न हो सकते हैं जिनके द्वारा वे शासित हैं।

-यूएफसी का मूल्यांकन

सामान्य गणना निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके की जाती है:

सीएफयू की मात्रा का सामान्य गणना के लिए सूत्र। स्रोत: दवाओं, खाद्य और चिकित्सा प्रौद्योगिकी (ANMAT) के राष्ट्रीय प्रशासन। भोजन के माइक्रोबायोलॉजिकल विश्लेषण, आधिकारिक विश्लेषणात्मक पद्धति, संकेतक सूक्ष्मजीव। 2014 वॉल्यूम 3. उपलब्ध: amat.gov.ar पर

परिणामों को 1 या 2 अंकों में व्यक्त करें, उचित आधार 10 से गुणा करें। उदाहरण: यदि परिणाम 16,545 है, तो इसे तीसरे अंक के आधार पर 17,000 तक राउंड किया जाता है और इसे निम्नानुसार व्यक्त किया जाएगा: 1.7 x 10 ⁴ । अब, यदि परिणाम 16,436 था, तो इसे 16,000 पर गोल करें और 1.6 x 10 ^{4 को} व्यक्त करें ।

सरफेस सीडिंग तकनीक

-Process

-एक नमूना के 0.1 मिलीलीटर के साथ कोशिकीय, अगर यह तरल है, तो प्रारंभिक निलंबन 10 ^-1 या लगातार dilutions 10 ^-2, 10 ^-3 आदि, एक मानक गिनती अगर प्लेट के केंद्र में।

समान रूप से एक Drigalski स्पैटुला या एक एल के आकार का ग्लास रॉड के साथ नमूना वितरित करें। इसे 10 मिनट के लिए आराम दें।

प्लेटों को पलटना और 24 से 48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एरोबिक रूप से सेते हैं।

कालोनियों की गणना करने के लिए आगे बढ़ें, उन प्लेटों को चुनें जो 20 - 250 सीएफयू के बीच की सीमा में हैं।

-यूएफसी का मूल्यांकन

गणना के लिए, कमजोर पड़ने वाले कारक को लागू किया जाता है, जो कि व्युत्क्रम है। संख्या 2 महत्वपूर्ण अंकों (तीसरे अंक के अनुसार गोलाई) के लिए गोल है और आधार 10 की शक्ति में व्यक्त की जाती है। उदाहरण के लिए, यदि 224 CFU को बिना कमजोर पड़ने के नमूने में गिना जाता है (10 ^-1), 22 x 10 ¹ CFU रिपोर्ट किया गया है, लेकिन यदि आंकड़ा 225 था, तो 23 x 10 ¹ CFU बताया गया है।

अब, यदि 10 ^-3 कमजोर पड़ने पर 199 CFU को गिना जाता है, तो 20 x 10 ⁴ CFU की सूचना दी जाएगी, लेकिन यदि 153 CFU को उसी कमजोर पड़ने में गिना जाता है, तो 15 x 10 ⁴ CFU की सूचना दी जाएगी।

क्यूए

मानक गणना संस्कृति माध्यम को ज्ञात प्रमाणित उपभेदों का उपयोग करके मूल्यांकन किया जा सकता है, जैसे: एस्चेरिचिया कोलाई एटीसीसी 8739, स्टैफिलोकोकस ऑरियस एटीसीसी 6538, बेसिलस सबटिलिस एटीसीसी 6633, लैक्टासिलस फेरमेंटम एटीसीसी 9338, स्टेफिलोकोकस एपिडर्मिडिस एटीसीसी 12228, 12228।

यदि संस्कृति का माध्यम इष्टतम परिस्थितियों में है, तो एल। किण्वक को छोड़कर सभी मामलों में संतोषजनक वृद्धि की उम्मीद की जाती है, जिसमें नियमित रूप से उपज हो सकती है।

संस्कृति माध्यम की बाँझपन का मूल्यांकन करने के लिए, प्रत्येक तैयार बैच (टीका के बिना) की एक या दो प्लेटें 24 घंटे के लिए एरोबायोसिस में 37 ° C पर इनक्यूबेट की जानी चाहिए। इस समय के बाद, माध्यम में कोई वृद्धि या रंग परिवर्तन नहीं देखा जाना चाहिए।

सीमाएं

-अगर एक से अधिक बार पिघला नहीं।

-तला हुआ माध्यम 3 महीने तक रह सकता है जब तक कि इसे रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है और प्रकाश से संरक्षित किया जाता है।

-यह माध्यम मांग या अवायवीय सूक्ष्मजीवों के लिए उपयुक्त नहीं है।

संदर्भ

1. दवाओं, खाद्य और चिकित्सा प्रौद्योगिकी (ANMAT) के राष्ट्रीय प्रशासन। भोजन के माइक्रोबायोलॉजिकल विश्लेषण, आधिकारिक विश्लेषणात्मक पद्धति, संकेतक सूक्ष्मजीव। 2014 वॉल्यूम 3. उपलब्ध: amat.gov.ar पर
2. लेबोरेटोरियोस डिफेंको फ्रांसिस्को सोरिया मेलगुइजो, एसए प्लेट काउंट आगर। 2009.Available पर:
3. कोना प्रादेदिसा प्रयोगशालाएँ। APHA और ISO 4833 के अनुसार मानक विधि Agar (PCA)। यहाँ उपलब्ध है: condalab.com
4. ब्रिटानिया प्रयोगशालाओं। आगर प्लेट की गिनती। 2015.Available पर: britanialab.com
5. कैमाचो ए, जाइल्स एम, ऑर्टेगॉन ए, पलाओ एम, सेरानो बी और वेल्ज़्केज़ ओ। 2009। माइक्रोबायोलॉजिकल विश्लेषण ऑफ़ फूड्स के लिए तकनीक। दूसरा संस्करण। रसायन विज्ञान संकाय, यूएनएएम। मेक्सिको। पर उपलब्ध: depa.fquim.unam