EMB अगर एक चयनात्मक और अंतर मध्यम ग्राम नकारात्मक बेसिली की ठोस संस्कृति अलगाव, विशेष रूप से Enterobacteriaceae और अन्य ग्राम नकारात्मक उदार बैक्टीरिया के लिए इस्तेमाल किया है। इसे परिचित EAM द्वारा भी जाना जाता है, जो कि eosin-methylene blue के लिए है।
यह माध्यम 1916 में होल्ट-हैरिस और टीग द्वारा बनाया गया था। इसमें पेप्टोन, लैक्टोज, सूक्रोज, डिपोटेशियम फॉस्फेट, अगर, ईओसिन, मिथाइलीन ब्लू और पानी शामिल हैं। यह MacConkey Agar से काफी मिलता-जुलता है, खासकर तब जब Levine के मॉडिफाइड EMB Agar का उपयोग किया जाता है, जिसमें सुक्रोज नहीं होता है।
ईएमबी आगर पर एस्चेरिचिया कोलाई का धात्विक चमक स्रोत: कारमेन मोरेनो गोंजालेज, मल्टीमीडिया से
वास्तव में, प्रत्येक प्रयोगशाला यह तय करती है कि एक या दूसरे के साथ काम करना है, क्योंकि वे एक ही कार्य को पूरा करते हैं, हालांकि जैव रासायनिक रूप से वे अलग हैं।
यहां तक कि जीनस प्रोटीन द्वारा झुंड के उत्पादन के मामले में भी क्लासिक मैककोनी अगर के रूप में एक ही दोष है। इसलिए, इस घटना से बचने के लिए, अगर एकाग्रता 5% तक बढ़ सकती है।
आधार
चयनात्मक
ईएमबी एगर सूक्ष्म रूप से चयनात्मक है क्योंकि इसमें एनिलिन डाइ (ईओसिन और मेथिलीन ब्लू) होते हैं, जो अवरोधकों के रूप में कार्य करते हैं, अधिकांश ग्राम सकारात्मक बैक्टीरिया और कुछ तेज ग्राम नकारात्मक छड़ के विकास को रोकते हैं।
हालांकि, इस आगर में यह खामी है कि कुछ ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया निरोधात्मक पदार्थों की उपस्थिति का विरोध कर सकते हैं और छोटे रंगहीन पंचर कालोनियों जैसे कि एंटरोकोकस फेसेलिस और कुछ स्टैफिलोकोकस के रूप में विकसित हो सकते हैं।
कुछ यीस्ट भी उग सकते हैं, जैसे कि कैंडिडा अल्बिकंस कॉम्प्लेक्स, जो बहुत छोटी गुलाबी कॉलोनियां देगा। क्लैमाइडोस्पोर्स भी इस खमीर से विकसित हो सकता है अगर नमूना गहरे बीज वाला हो।
अंतर
दूसरी ओर, ईएमबी अगर भी एक अंतर माध्यम है, क्योंकि ये डाई एक साथ (ईओसिन और मिथाइलीन ब्लू) अम्लीय पीएच में एक अवक्षेप बनाने की संपत्ति होती है, इसलिए वे इसके उत्पादन के संकेतक के रूप में काम करते हैं।
इस प्रकार, कमजोर लैक्टोज या सुक्रोज किण्वन बैक्टीरिया 24 से 48 घंटों के भीतर बैंगनी कालोनियों का उत्पादन करते हैं। उदाहरण के लिए जेना क्लेबसिएला, एंटरोबैक्टीरिया और सेराटिया।
वे जीवाणु जो दृढ़ता से लैक्टोज को उत्सर्जित करते हैं, जैसे एस्चेरिचिया कोलाई, या सूक्रोज, जैसे कि येरसिनिया एंटरोकोलिटिका या प्रोटीस पेननेरी, इन प्रजातियों में एक विशिष्ट धात्विक चमक प्रदान करते हुए एक हरे-काले रंग का अवक्षेप बनाते हैं।
यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि अगर ईएमबी लेवाइन माध्यम (सुक्रोज के बिना) का उपयोग किया जाता है, तो येरसिनिया एंटरोकोलिटिका और प्रोटीस पेननेरी स्पष्ट कालोनियों का उत्पादन करेंगे।
बैक्टीरिया जो लैक्टोज या सुक्रोज को किण्वित नहीं करते हैं, वे पेप्टोन की उपस्थिति से पोषित होते हैं, जो बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक अमीनो एसिड और नाइट्रोजन प्रदान करते हैं, और स्पष्ट कालोनियों का उत्पादन करते हैं। उदाहरण के लिए, जेना साल्मोनेला और शिगेला, अन्य।
इसी तरह, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि एसीनोबैक्टीर जीनस लैवेंडर-ब्लू कालोनियों को प्रस्तुत कर सकता है, भले ही यह लैक्टोज किण्वक या सुक्रोज नहीं है, लेकिन इसकी सेल की दीवार पर मेथिलीन ब्लू को ठीक करने की संपत्ति है। यह अन्य ऑक्सीडेटिव बैक्टीरिया के साथ भी हो सकता है।
तैयारी
मूल निर्जलित माध्यम रंग में हल्का बेज है।
इस संस्कृति के माध्यम को तैयार करने के लिए, एक लीटर डिस्टिल्ड वॉटर वाले एक फ्लास्क में 36 ग्राम निर्जलित माध्यम को तौलना और निलंबित करना होगा।
मिश्रण को 5 मिनट के लिए आराम देने के बाद, फ्लास्क को एक ऊष्मा स्रोत पर ले जाएं, इसे लगातार उबालें और तब तक मिलाएं जब तक कि यह पूरी तरह से उबल और घुल न जाए।
इसके बाद, पहले से ही भंग संस्कृति माध्यम को 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव का उपयोग करके निष्फल किया जाना चाहिए।
समय के अंत में, इसे आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और थोड़ी देर खड़े रहने के लिए छोड़ दिया जाता है। फिर, अभी भी गर्म (45-50 डिग्री सेल्सियस), 15-20 मिलीलीटर अगर प्रत्येक बाँझ पेट्री डिश में परोसा जाता है। मध्यम लिटमस नीला होना चाहिए।
प्लेटों को परोसने के बाद थोड़ा खुला छोड़ दिया जाता है जब तक कि आगर थोड़ा ठंडा न हो जाए। फिर उन्हें ढंक दिया जाता है और पूरी तरह से जमने दिया जाता है। बाद में, उन्हें उल्टे प्लेट धारकों में व्यवस्थित किया जाता है और उपयोग करने तक रेफ्रिजरेटर (8 डिग्री सेल्सियस) में संग्रहीत किया जाता है।
यह प्रक्रिया अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह हुड में या संदूषण से बचने के लिए बेंसन बर्नर के सामने किया जाता है।
यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि प्रत्येक वाणिज्यिक घर संस्कृति माध्यम को तैयार करने के लिए तौला जाने वाली राशि का संकेत देगा।
मध्यम का अंतिम पीएच 7.2 pH 0.2 होना चाहिए
अनुप्रयोग
इस माध्यम का उपयोग मूत्र और मल या किसी भी प्रकार के नैदानिक नमूने को बोने के लिए किया जाता है, खासकर अगर गैर-फास्टिड ग्राम नकारात्मक बैसिली की उपस्थिति पर संदेह किया जाता है, जैसे कि एंटरोबैक्टीरिया परिवार से संबंधित बेसिली, जो इस माध्यम पर बहुत अच्छी तरह से बढ़ता है।
शिगेला और साल्मोनेला पीढ़ी के एंटरोपैथोजेनिक बैक्टीरिया उनके रंगहीन या थोड़ा एम्बर कालोनियों द्वारा प्रतिष्ठित हैं।
अन्य गैर-लैक्टोज फर्मेंटिंग बेसिली जैसे कि एरोमोनस, स्यूडोमोनस, एसिनोबैक्टीर, अन्य के साथ भी विकसित होते हैं।
इसी तरह, यह माध्यम भोजन और पानी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण में बहुत उपयोगी है, क्योंकि यह कोलीफॉर्म के निर्धारण के पूर्ण पुष्टिकरण चरण के लिए आदर्श है, अर्थात्, टर्बाइन ईसी शोरबा से ई। कोलाई की उपस्थिति को रोकने के लिए। सबसे संभावित संख्या तकनीक (MPN) की।
क्यूए
यह सत्यापित करने के लिए कि ताजा तैयार संस्कृति माध्यम अच्छी तरह से काम कर रहा है, उपनिवेशों की विशेषताओं का निरीक्षण करने के लिए नियंत्रण उपभेदों को लगाया जा सकता है और सत्यापित करें कि वे अपेक्षित रूप से देते हैं।
इसके लिए, ई। कोलाई के ATCC उपभेदों या अच्छी तरह से पहचाने गए उपभेदों, एंटरोबैक्टर एरोजेन, क्लेबसिएला एसपी, साल्मोनेला टाइफिम्यूरियम, शिगेला फ्लेक्सनेरी, स्यूडोमोनस एरुगिनोसा और कुछ ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया जैसे एस ऑरियस का उपयोग किया जा सकता है।
ई। कोलाई को हरे धात्विक चमक के साथ अच्छी तरह से विकसित नीली-काली कालोनियों के निर्माण की उम्मीद है। जबकि, एंटरोबैक्टर एरोजेन और क्लेबसिएला एसपी को अच्छी तरह से विकसित नीली-काली श्लेष्म कालोनियों को देना चाहिए।
दूसरी ओर, साल्मोनेला टाइफिम्यूरियम और शिगेला फ्लेक्सनेरी, बड़ी कॉलोनियों को रंगहीन या मामूली एम्बर रंग के साथ विकसित करना चाहिए।
अंत में जीनस स्यूडोमोनस एरुगिनोसा अनियमित आकार के रंगहीन कालोनियों के रूप में बढ़ता है, जबकि ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया पूरी तरह से हिचकते हैं या बहुत छोटे उपनिवेशों के साथ बड़े होते हैं।
अंतिम विचार
कभी-कभी नसबंदी के कारण मेथिलीन नीला कम हो जाता है, जो एक मध्यम नारंगी रंग दिखाता है। बैंगनी रंग के ऑक्सीकरण और पुनर्प्राप्त करने के लिए मेथिलीन नीले रंग के लिए, इसे धीरे से मिलाया जाना चाहिए जब तक कि रंग बरामद न हो जाए।
इसके अलावा, स्टरलाइज़ेशन के बाद डाई अवक्षेपित हो सकती है, इसलिए पेट्री डिश को परोसने से पहले इसे अच्छी तरह मिला लेना चाहिए।
संदर्भ
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