- आधार
- तैयारी
- अनुप्रयोग
- एंटीबायोग्राम तकनीक
- म्यूलर हिंटन आगर पर रणनीतिक डिस्क प्लेसमेंट
- गलत परिणामों के कारण
- सीमा
- क्यूए
- संदर्भ
मुलर हिंटन Agar चयनात्मक, ठोस पोषक मध्यम, अगर मांस अर्क, peptone एसिड कैसिइन, स्टार्च से बना है और आसुत जल रहा है नहीं है। यह माध्यम सबसे तेजी से बढ़ते बैक्टीरिया के लिए उत्कृष्ट माइक्रोबियल विकास की अनुमति देता है।
यह मूल रूप से जॉन हॉवर्ड म्यूलर और जेन हिंटन द्वारा बनाया गया था ताकि न्यूसेरिया गोनोरिया और नीसेरिया मेनिंगिटिडिस जैसे पोषक तत्वों की मांग को अलग किया जा सके। हालांकि, इसकी विशेषताओं के कारण, यह एंटीबायोटिक दवाओं के लिए संवेदनशीलता के अध्ययन के लिए आदर्श निकला, विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्रदान करता है।
एंटीबायोग्राम्स (मुलर हिल्टन अगर)। स्रोत: डॉ। ग्राहम दाढ़ी en.wikipedia पर
इसलिए, म्यूलर हिंटन आगर किर्बी डिस्क प्रसार विधि द्वारा रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण के प्रदर्शन के लिए क्लिनिकल एंड लेबोरेटरी स्टैंडर्ड इंस्टीट्यूट (सीएलएसआई) और एंटीमाइक्रोबियल संवेदनशीलता परीक्षण पर यूरोपीय समिति द्वारा स्वीकृत संस्कृति माध्यम है। Bauer।
आधार
गैर-चयनात्मक पोषक माध्यम होने के नाते, यह अधिकांश रोगजनक बैक्टीरिया के विकास के लिए उत्कृष्ट है।
दूसरी ओर, इसकी सरल रचना पदार्थों को आसानी से उस पर फैलती है, जो डिस्क प्रसार विधि द्वारा संवेदनशीलता परीक्षण के लिए एक आवश्यक विशेषता है।
इसकी एक और विशेषता यह है कि इसमें कम मात्रा में अवरोधक होते हैं, जो सल्फोनामाइड्स, ट्राइमेथोप्रिम और टेट्रासाइक्लिन को प्रभावी ढंग से मूल्यांकन करने की अनुमति देता है।
हालांकि, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि माध्यम को अपने उचित कामकाज को सुनिश्चित करने के लिए कुछ शर्तों को पूरा करना चाहिए, जिसमें शामिल हैं:
पीएच का समायोजन, अगर की गहराई और थाइमिन, थाइमिडीन, सीए ++, एमजी ++ और जेडएन ++ की उचित एकाग्रता ।
आपको यह भी जानना होगा कि कार्यप्रणाली मानकीकृत है और इसलिए सभी मापदंडों को पूरा किया जाना चाहिए, जैसे:
इनोकुलम की सांद्रता, एंटीबायोटिक डिस्क की एकाग्रता और संरक्षण, अग्र पर डिस्क की उचित संख्या की नियुक्ति, एक डिस्क और दूसरे के बीच की दूरी, कुछ एंटीबायोटिक दवाओं के रणनीतिक प्लेसमेंट, वातावरण, तापमान और डिस्क का समय ऊष्मायन।
तैयारी
निर्जलित म्यूलर हिंटन माध्यम के 37 ग्राम वजन और आसुत जल के 1 लीटर में भंग। भंग करने में सहायता करने के लिए सरगर्मी करते हुए मध्यम गरम करें। 1 मिनट तक उबालें।
15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर बाँझ आटोक्लेव। आटोक्लेव से हटाते समय, फ्लास्क को ठंडा करने के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में रखा जाना चाहिए। बाँझ 10 सेमी व्यास पेट्री डिश में 25 से 30 मिलीलीटर डालो।
प्लेटें 4 मिमी (आदर्श) की औसत मोटाई के साथ होनी चाहिए, 3-5 मिमी की सीमा की अनुमति दी जानी चाहिए।
यदि यह आधार के रूप में मुलर हिंटन अगर का उपयोग करके रक्त अगर तैयार करने के लिए वांछित है, तो प्लेटों पर सेवा करने से पहले 5% बाँझ और डिफिब्रेटेड लैम्ब रक्त डालें।
मध्यम का अंतिम पीएच 7.2 से 7.4 के बीच होना चाहिए।
एक रेफ्रिजरेटर में निवेश और स्टोर करें, जब तक उपयोग न करें। उपयोग से पहले प्लेट को कमरे के तापमान पर आने दें।
तैयार माध्यम का रंग हल्का बेज है।
अनुप्रयोग
इसका उपयोग सबसे तेजी से बढ़ते गैर-मांग वाले रोगजनकों के लिए एंटीबायोटिक या एंटीबायोटिक संवेदनशीलता परीक्षण करने के लिए किया जाता है।
यदि अग्र को रक्त से पूरक किया जाता है, तो इसका उपयोग सूक्ष्मजीवों की मांग के एंटीबायोग्राम को करने के लिए किया जाता है जैसे: स्ट्रेप्टोकोकस न्यूमोनिया, हेमोफिलस एसपी, नेइसेरिया मेनिंगिटिडिस, अन्य। यह लीजनेला न्यूमोफिला को अलग करने के लिए भी इस्तेमाल किया गया है।
एंटीबायोग्राम तकनीक
एंटीबायोग्राम करने से पहले, 1.5 x 10 8 कोशिकाओं के बराबर एक जीवाणु समाधान तैयार किया जाना चाहिए ।
इसके लिए, शुद्ध संस्कृति की 3 से 4 कॉलोनियों को सोयाबीन ट्राइप्टिसेज़ शोरबे में या म्यूलर हिंटन शोरबा में निलंबित कर दिया जाता है, 2 से 6 घंटे के लिए ऊष्मायन किया जाता है और एकाग्रता को बाँझ खारा समाधान के साथ समायोजित किया जाता है, इसकी तुलना मैक फ़ारलैंड मानक से की जाती है। 0.5%।
यदि वे सूक्ष्मजीवों की मांग कर रहे हैं, तो कालोनियों को 0.5% मैक फ़ारलैंड की एकाग्रता तक सीधे निलंबित किया जा सकता है। इसके बाद, म्यूलर हिंटन प्लेट तैयार बैक्टीरिया समाधान के साथ संसेचन के साथ अंकुरित होती है।
ऐसा करने के लिए, स्वाब को समाधान में डुबोया जाता है और फिर ट्यूब की दीवारों के खिलाफ दबाकर अतिरिक्त तरल निकाल दिया जाता है। इसके तुरंत बाद, पूरी सतह पर स्वास को पारित कर दिया जाता है, जिससे कोई भी स्थान अछूता नहीं रहता है, फिर प्लेट को थोड़ा घुमाया जाता है और इसे फिर से बीज दिया जाता है। ऑपरेशन को 2 बार दोहराया जाता है।
10 मिनट के लिए खड़े रहने दें और फिर एक बाँझ संदंश के साथ एंटीबायोटिक डिस्क डालें, जिससे उनके बीच 24 मिमी का अंतर हो। प्रत्येक डिस्क को अग्र पर रखने के बाद, प्रत्येक डिस्क को हल्के से दबाकर संदंश के साथ सुनिश्चित करें कि वे अच्छी तरह से पालन करते हैं।
एक बार प्रक्रिया समाप्त हो जाने के बाद, प्लेट को उल्टा कर दिया जाता है और 16 से 18 घंटे के लिए एरोबायोसिस में 35-37 ° C पर ऊष्मायन किया जाता है। यदि यह एक मांग वाला सूक्ष्मजीव है, तो यह माइक्रोएरोफिलिया का गुण हो सकता है और अगर एंटीबायोग्राम में ऑक्सासिलिन डिस्क होती है, तो इसे 24 घंटे के बाद पढ़ा जाना चाहिए।
एक शासक का उपयोग प्रत्येक प्रभामंडल के व्यास को मापने के लिए किया जाता है। परिणाम मिमी में दर्ज किए जाने चाहिए। इसके बाद, प्राप्त मूल्यों को वर्तमान सीएलएसआई मैनुअल द्वारा प्रकाशित कटऑफ पॉइंट्स की तालिकाओं के साथ संबद्ध किया जाता है।
अवरोध प्रभामंडल का मापन। स्रोत: USCDCP, Pixnio.com
संवेदनशील (एस), मध्यवर्ती (आई), या प्रतिरोधी (आर) के रूप में रिपोर्ट करें, जैसा कि मामला हो सकता है।
एंटीबायोटिक्स को पृथक सूक्ष्मजीव और संक्रमण के प्रकार के अनुसार चुना जाता है।
कभी-कभी प्रतिरोध के फेनोटाइपिक पैटर्न को प्रकट करने के लिए एंटीबायोटिक दवाओं के रणनीतिक प्लेसमेंट को ध्यान में रखा जाना चाहिए।
म्यूलर हिंटन आगर पर रणनीतिक डिस्क प्लेसमेंट
एंटरोबैक्टीरिया के लिए, क्लैवुलैनीक एसिड डिस्क को तीसरी और चौथी पीढ़ी के सेफलोस्पोरिन के खिलाफ रखा जाना चाहिए। अंडे के आकार का चौड़ीकरण इंगित करता है कि तनाव विस्तारित-स्पेक्ट्रम बीटा-लैक्टामेस (ईएसबीएल) का एक उत्पादक है। इसका मतलब है कि रोगी को किसी भी सेफलोस्पोरिन के साथ इलाज नहीं किया जाना चाहिए।
Escherichia कोलाई तनाव में विस्तारित-स्पेक्ट्रम बीटा-लैक्टामेज (ESBL) उत्पादन की फेनोटाइपिक अभिव्यक्ति। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया फोटो। मारिलेस गिल
स्टैफिलोकोकस में क्लिंडामाइसिन डिस्क (डी-टेस्ट) के सामने एरिथ्रोमाइसिन या एजिथ्रोमाइसिन डिस्क रखना महत्वपूर्ण है।
एरिथ्रोमाइसिन में एक प्रतिरोधी प्रभामंडल और क्लिंडामाइसिन प्रभामंडल में एक चपटेपन से संकेत मिलता है कि तनाव में तनावपूर्ण अवरोधक क्लैमामाइसिन प्रतिरोध (आईसीआर) है। इसका मतलब है कि एक क्लिंडामाइसिन उपचार प्रभावी नहीं होगा।
एंटरोबैक्टीरिया और कुछ गैर-किण्वन ग्राम-नकारात्मक छड़ें, टाज़ोबैक्टैन सीफैज़िडाइम, सेफ़ॉक्सिटिन या पिपेरेसिलिन डिस्क के लिए प्रेरक एएमपी सी उपभेदों की खोज करने के लिए, 27 मिमी की दूरी पर, एक imipenem डिस्क के खिलाफ सामना किया जाता है।
इमीपीनम का सामना कर रहे डिस्क में से एक में एक चपटा प्रभामंडल, इंड्यूशियल एएमपी सी की उपस्थिति को इंगित करता है।
संवैधानिक AMP C की खोज के लिए, 500 illg cloxacillin डिस्क का सामना Ceftazidime (30 (g) और 25 mm की दूरी पर cefotaxime (30)g) के साथ किया जाता है। किसी भी सेफलोस्पोरिन में एक चौड़ा प्रभामंडल सकारात्मकता को इंगित करता है।
Cloxacillin डिस्क को 18 mm की दूरी के साथ फेनिल बोरिक एसिड (400)g) के साथ लगाए गए व्हाटमैन नंबर 6 फिल्टर पेपर के 9 मिमी डिस्क से भी बदला जा सकता है। इसकी व्याख्या पिछले वाले के समान ही है।
अंत में, विशेष रूप से स्यूडोमोनास एरुगिनोसा में मेटलोएब्लेटाक्टामेसिस के उत्पादन की जांच करने के लिए, एक डिस्क जिसे एथिलीनैमिनाएटेट्रासेटिक एसिड (EDTA 750)g) और थायोग्लाइकोलिक एसिड (SMA 300 µg) के 10 productionl के साथ प्रयोग किया जाता है, जिसे इमीने के साथ सामना किया जाता है। की दूरी पर 15 मि.मी.
यदि EDTA / SMA डिस्क की ओर imipenem या meropenem halos का चौड़ीकरण है, तो परीक्षण सकारात्मक है। इस परिणाम की पुष्टि संशोधित हॉज परीक्षण द्वारा की जानी चाहिए।
इस विधि में म्यूलर हिंटन प्लेट पर एक एस्चेरिचिया कोलाई एटीसीसी 25922 तनाव टीका लगाया जाता है। एक imipenem डिस्क को प्लेट के केंद्र में रखा जाता है और फिर डिस्क से परिधि तक संदिग्ध P. aeruginosa स्ट्रेन के साथ बनाया जाता है। प्रति प्लेट तक 4 उपभेदों का परीक्षण किया जा सकता है।
यदि स्ट्रेच मार्क के आस-पास इमिपेनम हेलो के विरूपण का एक क्षेत्र है, तो परीक्षण सकारात्मक होगा।
गलत परिणामों के कारण
- खराब संरक्षित एंटीबायोटिक डिस्क झूठी प्रतिरोध का उत्पादन कर सकती है। उदाहरण के लिए, ऑक्सीसिलिन डिस्क तापमान में परिवर्तन के लिए बहुत कमजोर है।
नीचे दिए गए माध्यम का एक पीएच (अम्लीय) अमीनोग्लाइकोसाइड और मैक्रोलाइड्स (झूठे प्रतिरोध का जोखिम) में छोटा हैलोसन करता है, और पेनिसिलिन, टेट्रासाइक्लिन और नोवोबोसिन (झूठी संवेदनशीलता का जोखिम) में बड़ा होता है।
-यदि पीएच ऊपर है कि संकेत दिया (क्षारीय) ऊपर वर्णित प्रभाव उलट हैं।
उच्च थाइमिन और थाइमिडाइन सांद्रता के साथ माइडिया में एक प्रभाव होता है, जो सल्फोनामाइड्स और ट्राइमेथोप्रिम के निषेध अवरोध को कम करता है।
कैल्शियम और मैग्नीशियम की उच्च सांद्रता स्यूडोमोनस एरुगिनोसा के उपभेदों के खिलाफ एमिनोग्लाइकोसाइड्स, पॉलीमीक्सिन बी और टेट्रासाइक्लिन के झूठे प्रतिरोध का उत्पादन करती है।
कैल्शियम और मैग्नीशियम के कम सांद्रता स्यूडोमोनास एरुगिनोसा के उपभेदों के खिलाफ एमिनोग्लाइकोसाइड्स, पॉलीमायक्सिन बी और टेट्रासाइक्लिन की झूठी संवेदनशीलता पैदा करते हैं।
-जंक की उपस्थिति कार्बापेनम डिस्क (इमिपेनेम, मेरोपेनेम और ertapenem) के परिणामों को प्रभावित करती है।
3 मिमी से नीचे के माध्यम की मोटाई में झूठी संवेदनशीलता के परिणाम होंगे, जबकि 5 से ऊपर की मोटाई झूठी प्रतिरोध का उत्पादन करेगी।
-एंटीबायोटिक्स में डिस्क का जमाव विकृत रूप देगा, क्योंकि एंटीबायोटिक्स का डिस्चार्ज तत्काल होता है।
- बहुत कमजोर इनोकुलम परिणामों को प्रभावित करते हैं, क्योंकि अगर में एक समान या संगम वृद्धि नहीं होगी, तो एक आवश्यक शर्त इस तथ्य के अलावा कि अवरोधक को मापने में सक्षम हो सकता है, जो कि हॉगल सामान्य से बड़ा दे सकता है।
-कभी-कभी भरी हुई इनोकुला हैलोज को सामान्य से छोटा कर सकती है।
-नहीं डिस्क के बीच की दूरी का सम्मान करने के लिए एक प्रभामंडल दूसरे के साथ ओवरलैप होता है और वे सही ढंग से पढ़ा नहीं जा सकता।
सीओ 2 के साथ इनक्यूबेट टेट्रासाइक्लिन और मेथिसिलिन डिस्क के आकार के आकार को बढ़ाता है।
-35 डिग्री सेल्सियस से नीचे के तापमान पर इनक्यूबेट बड़ा हलो उत्पन्न करता है।
-खून के जुड़ने से सल्फा हेलो का आकार घट जाता है।
सीमा
एक सूक्ष्मजीव (इन विट्रो में) के खिलाफ एंटीबायोग्राम में प्रदर्शित एंटीबायोटिक की संवेदनशीलता की गारंटी नहीं है कि यह विवो में काम करेगा।
क्यूए
यह जानने के लिए कि क्या माध्यम में पर्याप्त मात्रा में थाइमिन है, एंटरोकोकस फेसेलिस एटीसीसी 29212 का एक स्ट्रेन लगाया जाना चाहिए और ट्राइमेथोप्रिम सल्फेमेथोक्साज़ोल (एसएक्सटी) के लिए संवेदनशीलता परीक्षण किया जाना चाहिए, यह संतोषजनक होने के लिए या> 20 मिमी के बराबर एक हेलो देना होगा।
संदर्भ
- "मुलर-हिंटन अगार।" विकिपीडिया, एक निशुल्क विश्वकोश। 16 नवंबर 2018, 12:23 यूटीसी। 27 जनवरी 2019, 04:22
- फोर्ब्स बी, साहम डी, वीसफेल्ड ए (2009)। बेली एंड स्कॉट माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 12 एड। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।
- Cona E. Agar diffusion test द्वारा एक अच्छी संवेदनशीलता अध्ययन के लिए शर्तें। रेव चिल इफेक्ट, 2002; 19 (2): 77-81
- डीम्को फ्रांसिस्को सोरिया मेलगुइज़ो प्रयोगशाला। 5% भेड़ के खून से म्यूलर हिंटन अगर। 2009.Available पर:
- बीडी मुलर हिंटन द्वितीय आगर प्रयोगशाला। 2017। उपलब्ध नहीं है:.bd.com
- ब्रिटानिया प्रयोगशालाओं। मुलर हिंटन आगर। 2015.Available पर: britanialab.com
- कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।
- Martínez-Rojas D. AmpC-type betalactamases: फेनोटाइपिक डिटेक्शन के लिए सामान्यता और विधियाँ। रेव। सोक। वें। Microbiol। 2009; 29 (2): 78-83। पर उपलब्ध: scielo.org।
- पेरोज़ो ए, कैस्टेलानो एम, लिंग ई, अराइज़ एन। फेनोटाइपिक डिटेक्शन ऑफ मेटलोलबेटेलेक्टामेस को स्यूडोमोनस एरुगिनोसा के नैदानिक आइसोलेट्स में। कसमार, 2012; 40 (2): 113-121। पर उपलब्ध: scielo.org।