आगर मर्स: नींव, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

अगर श्रीमती विशेष रूप से जीनस लैक्टोबैसिलस की एक चयनात्मक ठोस माध्यम अलगाव और लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गणना के लिए इस्तेमाल किया संस्कृति है। इस आगर को 1960 में मैन, रोगोसा और शार्प ने एक ही नाम के साथ बनाया था, लेकिन इसकी जटिलता के कारण, संक्षिप्त नाम MRS का उपयोग अक्सर किया जाता है।

यह प्रोटीज पेप्टोन, मीट एक्सट्रैक्ट, यीस्ट एक्सट्रैक्ट, ग्लूकोज, सोर्बिटोन मोनोलिएट, डिपोटेशियम फॉस्फेट, सोडियम एसीटेट, अमोनियम साइट्रेट, मैग्नीशियम सल्फेट, मैंगनीज सल्फेट और अगर से बना है।

मैन रोजोसा और शार्प अगर (MRS) लैक्टोबैसिलस सपा के साथ बोए गए। स्रोत: लेखकों द्वारा इस लेख के लिए दान की गई तस्वीर: Báez E, González G, Hernández G, López E, मेगा M. ।

यह संरचना नैदानिक ​​नमूनों, जैसे कि मल, योनि स्राव, मौखिक नमूनों और स्तन के दूध के साथ-साथ डेयरी और मांस खाद्य पदार्थों से लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया के समुचित विकास की अनुमति देती है।

यह नैदानिक ​​प्रयोगशालाओं में नियमित रूप से उपयोग नहीं किया जाता है, क्योंकि लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया शायद ही कभी रोग प्रक्रियाओं में शामिल होते हैं। हालांकि, खाद्य सूक्ष्म जीव विज्ञान के क्षेत्र में, एमआरएस अगर का उपयोग अधिक बार होता है।

दूसरी ओर, इस माध्यम का उपयोग कुछ अनुसंधान केंद्रों द्वारा किया जाता है जिनका उद्देश्य लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का अध्ययन है।

आधार

मैन, रोगोसा और शार्प एगर की काफी जटिल रचना है। इसके प्रत्येक घटक के कार्य को तोड़कर, इसकी नींव को समझाया जा सकता है।

प्रोटीन पेप्टोन, मांस का अर्क, खमीर निकालने और ग्लूकोज पोषक तत्व हैं जो बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक कार्बन, नाइट्रोजन, विटामिन और खनिजों का स्रोत प्रदान करते हैं। इसके अलावा, ग्लूकोज सार्वभौमिक ऊर्जा स्रोत है जिसका उपयोग अधिकांश संस्कृति मीडिया में किया जाता है।

दूसरी ओर, लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की वृद्धि का पक्ष लेने के लिए, लैक्टोबैसिलस और संबंधित बैक्टीरिया के चयापचय में आवश्यक cofactors (cations) की उपस्थिति आवश्यक है; ये यौगिक सोडियम, मैग्नीशियम और मैंगनीज लवण हैं।

इसी तरह, सॉर्बिटान मोनोलिएट या पॉलीसॉर्बेट 80 फैटी एसिड का एक महत्वपूर्ण स्रोत हैं क्योंकि वे पोषक तत्वों के रूप में अवशोषित होते हैं।

इसके अलावा, सोर्बिटोन मोनोलिएट और अमोनियम साइट्रेट, साथ-साथ वनस्पतियों के विकास को रोककर, विशेष रूप से ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया, इस अगर के चयनात्मक चरित्र को प्रदान करते हैं।

अंत में, अगर-अग्र वह है जो माध्यम को ठोस स्थिरता प्रदान करता है।

मैन रोगोसा शार्प अगर के अन्य रूप हैं; उनमें से एक सिस्टीन (एमआरएससी) के साथ पूरक है, अन्य सूक्ष्मजीवों के बीच बिफीडोबैक्टीरिया के अलगाव के लिए बहुत उपयोगी है। दूसरी ओर, डेयरी उत्पादों में बिफीडोबैक्टीरिया की चयनात्मक गिनती के लिए विशेष रूप से नोमाइसिन, पेरोमोमाइसिन, नेलेडिक्लिक एसिड और लिथियम क्लोराइड के साथ पूरक एमआरएस माध्यम है।

तैयारी

निर्जलित माध्यम का 68.25 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। 5 मिनट तक खड़े रहने दें। पूरी तरह से भंग करने के लिए, गर्मी स्रोत को चालू करें, अक्सर सरगर्मी करें, और 1 से 2 मिनट के लिए उबाल लें। 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ।

आटोक्लेव छोड़ते समय, कुछ मिनटों के लिए खड़े होने की अनुमति दें और बाँझ पेट्री डिश में गर्म रहते हुए वितरित करें।

प्लेटों को जमने और पलटने की अनुमति दें, प्लेट रैक और उपयोग तक ठंडा करें। उपयोग करने से पहले प्लेटों को कमरे के तापमान पर गर्म होने दें।

मध्यम का पीएच 6.4। 0.2 होना चाहिए। कुछ वाणिज्यिक घर 5.5 से 5.9 के बीच पीएच की सलाह देते हैं।

निर्जलित माध्यम रंग में बेज है और तैयार अंधेरे एम्बर है।

निर्जलित माध्यम और तैयार प्लेट दोनों को 2-8 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जाना चाहिए।

अनुप्रयोग

एमआरएस अगर प्लेट प्लेटें सीडेड (थकावट या ड्रिगल्स्की स्पैटुला) हो सकती हैं। इसे गहराई से भी बोया जा सकता है। 24 से 72 घंटों के लिए माइक्रोएरोफिलिसिटी (4% O ₂ और 5-10% CO ₂) में 37 ° C पर प्लेट्स को ऊष्मायन किया जाना चाहिए ।

बुवाई की विधि का पालन किए गए उद्देश्य (अलगाव या गिनती) के अनुसार किया जाता है।

उपनिवेशों की विशेषताएँ

लैक्टोबैसिलस के प्रकल्पित उपनिवेश रंग में सफेद हो जाते हैं और इस अग्र पर एक श्लेष्म या मलाईदार उपस्थिति होती है। उन्हें बाद में पहचाना जाना चाहिए।

लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का अलगाव

इसके लिए, सतह सीडिंग का उपयोग किया जाता है। बोए जाने वाले नमूनों को पिछली प्रक्रिया की आवश्यकता होती है।

स्तन के दूध के नमूनों के मामले में, फैटी परत को हटाने के लिए, 10 मिनट के लिए 14,000 आरपीएम पर नमूने के 1 मिलीलीटर को अपकेंद्रित्र करने की सिफारिश की जाती है। 900 µl को छोड़ दिया जाता है, और शेष 100 sedl में तलछट को निलंबित कर दिया जाता है और इसे MRS agar की सतह पर डाला जाता है। इसे तब Drigalski स्पैटुला के साथ समान रूप से वितरित किया जाना चाहिए।

मल के नमूनों के मामले में, 1 (1) ग्राम स्टूल तौला जाता है और 0.1% बाँझ पेप्टोन पानी के 9 एमएल में एक 1/10 कमजोर पड़ने के अनुरूप होता है। तब सीरियल dilutions बनाये जाते हैं, जब तक कि 10 ^{-4 का} अंतिम कमजोर ^{पड़ना प्राप्त न हो जाए} ।

अंत में, 10 ^-2, 10 ^-3 और 10 ^-4 dilutions के 100 μl लिया जाता है और प्रत्येक कमजोर पड़ने MRS agar पर वरीयता प्राप्त है, एक Drigalski स्पैटुला के साथ समान रूप से वितरित।

लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया गिनती

इस मामले में बुआई गहराई से की जाती है।

स्तन के दूध के नमूनों के लिए, 1 एमएल लिया जाता है और एक बाँझ शंक्वाकार प्लास्टिक ट्यूब में रखा जाता है। MRS agar को 40 ° C के अनुमानित तापमान पर 25 mL की अंतिम मात्रा में मिलाया जाता है, एक सजातीय मिश्रण प्राप्त होता है। इसके बाद, इसे एक समान तरीके से बाँझ पेट्री डिश में डाला जाता है और पोलीमराइजेशन तक खड़े होने की अनुमति दी जाती है।

मल के नमूनों के लिए, पतला किया जाता है, जैसा कि पहले वर्णित है। प्रत्येक कमजोर पड़ने के 1 एमएल लें और इसे बाँझ शंक्वाकार प्लास्टिक ट्यूबों में रखें। पिघला हुआ एमआरएस अगर 25 एमएल की मात्रा में मिलाया जाता है।

प्रत्येक कमजोर पड़ने का मिश्रण समान रूप से बाँझ पेट्री डिश में डाला जाता है। अंत में, इसे पोलीमराइजेशन तक आराम करने के लिए छोड़ दिया जाता है।

मैन रोजोसा और शार्प (MRS) आगर पर कॉलोनी की गिनती। स्रोत: इस लेख के लिए दान किया गया फोटो लेखक: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. फोटो जो रिसर्च के हकदार हैं: स्तन दूध और शिशु मल में प्रोबायोटिक क्षमता के साथ लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया और बिफीडोबैक्टीरिया का मूल्यांकन।

अनुसंधान स्तर

हर दिन लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का अध्ययन अधिक रुचि प्राप्त कर रहा है; शोधकर्ता विशेष रूप से अन्य उपयोगों के साथ डेयरी उत्पादों के निर्माण में मानकीकरण के लिए स्टार्टर किण्वकों के रूप में नई उपभेदों और उनकी क्षमता के बारे में जानना चाहते हैं।

इस अर्थ में, अल्वाराडो एट अल। (2007) ने एक अध्ययन को अंजाम देने के लिए MRS agar का उपयोग किया जिसमें उन्होंने एक कारीगर Andean स्मोक्ड वेनेजुएला पनीर में मौजूद लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया को अलग, पहचाना और पहचाना।

पनीर में उन्होंने लैक्टोकोकस और लैक्टोबैसिलस जेनेरा के जीवाणुओं की उपस्थिति को पाया, और निष्कर्ष निकाला कि अलग-अलग उपभेदों का मिश्रण पास्चुरीकृत दूध से चीज के निर्माण में स्टार्टर उपभेदों के रूप में उपयुक्त है।

दूसरी ओर, सैंचेज़ एट अल। (2017) ने पिगलेट के पाचन तंत्र में लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की उपस्थिति की जांच करने के लिए एमआरएस अगर का उपयोग किया, ताकि उनका उपयोग देशी प्रोबायोटिक्स के रूप में किया जा सके जो स्वस्थ पिगलेट की उत्पादकता को बढ़ाते हैं।

इस माध्यम के साथ वे चार प्रजातियों को अलग करने में कामयाब रहे: लैक्टोबैसिलस जॉनसन, लैक्टोबैसिलस ब्रेविस, एंटरोकॉकस हिरे और पेडियोकोकस पेंटोसैसस।

इसी तरह, बाज एट अल। (2019) स्तन दूध और शिशु मल में प्रोबायोटिक क्षमता के साथ लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया (एलएबी) और बिफीडोबैक्टीरिया का मूल्यांकन करने के लिए एमआरएस अगर का उपयोग किया।

वे स्तन के दूध में 11 BAL और 3 Bifidobacteria sp को अलग करने में कामयाब रहे, और 8 BAL और 2 Bifidobacteria sp। मल में। सभी कुछ निश्चित मापदंडों को पूरा करते हैं जो उन्हें प्रोबायोटिक गतिविधि के साथ बैक्टीरिया के रूप में साबित करते हैं।

लेखकों ने निष्कर्ष निकाला कि स्तन दूध और मल दोनों विशेष रूप से स्तनपान शिशुओं से प्रोबायोटिक बैक्टीरिया के प्राकृतिक स्रोतों के रूप में काम करते हैं।

क्यूए

एमआरएस अगर की गुणवत्ता का मूल्यांकन करने के लिए, जैसे उपभेदों को नियंत्रित करें:

लैक्टोबैसिलस फेरमेंटम एटीसीसी 9338, लैक्टोबैसिलस केसी एटीसीसी 393, बिफीडोबैक्टीरियम बिफिडम एटीसीसी 11863, लैक्टोबैसिलस प्लांटरम एमकेटीए 8014, लैक्टोबैसिलस लैक्टिस एमकेटीए 19435, पेडियोकोकस डेमोनस एमजीसीए एमटीई 29335

अपेक्षित परिणाम पहले 6 बैक्टीरिया के लिए संतोषजनक वृद्धि है, जबकि ई कोलाई और बेसिलस सेरेस को पूरी तरह से रोकना चाहिए।

संदर्भ

1. वेनेज़ुएला स्मोक्ड एंडियन आर्टिसन चीज़ की लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की पहचान, अल्वाराडो सी, चाकोन जेड, ओटनियल जे, गुएरेरो बी, लॉपेज़ जी अलगाव, पहचान और विशेषता। स्टार्टर कल्चर के रूप में इसका उपयोग। Cient। (मारकाइबो) 2007; 17 (3): 301-308। पर उपलब्ध: scielo.org।
2. पैंलेट के डाइजेस्टिव ट्रैक्ट से सेंचेज एच, फैबियान एफ, ओचोआ जी, अल्फारो अलगाव लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का। निवेश। पशु चिकित्सक। पेरू 2017; 28 (3): 730-736। पर उपलब्ध: scielo.org।
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, मेगा एम। लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का मूल्यांकन और Bifidobacteria स्तन दूध में प्रोबायोटिक क्षमता और Acevedo नगर पालिका, मिरांडा 2017 में शिशुओं के मल के साथ। स्नातक की डिग्री प्राप्त करने के लिए स्नातक की डिग्री प्राप्त करने के लिए स्नातक कार्य। Bioanalysis। यूनिवर्सिटी ऑफ काराबोबो, वेनेजुएला।
4. ब्रिटानिया प्रयोगशाला। एमआरएस अगर। 2015.Available पर: britanialab.com
5. विकिपीडिया योगदानकर्ता। एमआरएस अगर। विकिपीडिया, एक निशुल्क विश्वकोश। 10 जनवरी, 2018, 19:44 यूटीसी। पर उपलब्ध है: wikipedia.org 17 फरवरी, 2019 तक पहुँचा।
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