रक्त अगर: औचित्य, उपयोग और तैयारी - जीवविज्ञान - 2025

रक्त अगर एक ठोस कल्चर माध्यम अंतर लेकिन गैर-चयनित समृद्ध है। इसका उपयोग नैदानिक ​​नमूनों से या उपसंस्कृतियों के लिए सूक्ष्मजीवों की एक महान विविधता की वसूली और वृद्धि के लिए किया जाता है।

प्रयोगशाला में प्राप्त अधिकांश नैदानिक ​​नमूनों के बीजारोपण के लिए क्लासिक रक्त अगर को शामिल किया जाना चाहिए; स्टूल नमूनों को छोड़कर जहां यह उपयोगी नहीं है, जब तक कि कुछ संशोधनों के साथ तैयार नहीं किया जाता है।

रक्त अगर प्लेट

इस संस्कृति के माध्यम में मूल रूप से एक समृद्ध आधार अगर और 5% रक्त होता है। आगर का आधार जरूरतों के अनुसार अलग-अलग हो सकता है, लेकिन यह मुख्य रूप से पेप्टोन, अमीनो एसिड, विटामिन, मांस के अर्क, सोडियम क्लोराइड, अगर सहित अन्य से बना होगा।

रक्त के लिए, भेड़, खरगोश या घोड़े जैसे जानवरों से रक्त प्राप्त करने के लिए सामान्य रूप से एक जीवित व्यक्ति से संपर्क करना आवश्यक है। हालांकि, यह हमेशा संभव नहीं होता है और कभी-कभी मानव रक्त का उपयोग किया जाता है।

रक्त अगर माध्यम को प्रयोगशाला में तैयार किया जा सकता है या समर्पित कंपनियों से तैयार किया जा सकता है। इस माध्यम की तैयारी सबसे नाजुक में से एक है, इसकी तैयारी में कोई भी लापरवाही एक दूषित बैच के परिणामस्वरूप होगी।

इसीलिए हर संभव सावधानी बरती जानी चाहिए और अंत में तैयार किए गए प्रत्येक 100 के लिए 37 डिग्री सेल्सियस 1 प्लेट पर सेते हुए एक गुणवत्ता नियंत्रण किया जाना चाहिए।

आधार

स्टैफिलोकोकस ऑरियस रक्त एगर पर सुसंस्कृत था। विकिमीडिया कॉमन्स के माध्यम से ट्विटर पर फ़्लिकर नाथन आर। पर नाथन रीडिंग, यह पहले ही उल्लेख किया जा चुका है कि रक्त अगर में समृद्ध, अंतर और गैर-चयनात्मक माध्यम होने की विशेषता है। इनमें से प्रत्येक गुण का आधार नीचे दिया गया है।

रक्त अगर एक समृद्ध माध्यम है क्योंकि इसमें मुख्य आधार के रूप में अगर आधार पर 5-10% रक्त होता है। दोनों यौगिकों में कई पोषक तत्व होते हैं और यह गुण अधिकांश कृषि योग्य बैक्टीरिया को इसमें विकसित करने की अनुमति देता है।

यह वृद्धि प्रतिबंध के बिना होती है; इस कारण से यह गैर-चयनात्मक है। हालांकि, अगर इस माध्यम में ऐसे यौगिक जोड़े जाते हैं जो कुछ सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकते हैं और दूसरों के पक्ष में होते हैं, तो यह चयनात्मक हो जाता है। यह मामला है अगर कुछ प्रकार के एंटीबायोटिक या एंटीफंगल होते हैं।

इसी तरह, रक्त अगार एक अंतर माध्यम है, क्योंकि यह 3 प्रकार के जीवाणुओं को अलग करने की अनुमति देता है: बीटा-हेमोलिटिक, अल्फा-हेमोलिटिक और गामा-हेमोलिटिक।

बीटा-हेमोलिटिक्स वे हैं जो कॉलोनियों के चारों ओर एक स्पष्ट प्रभामंडल बनाते हुए, लाल रक्त कोशिकाओं को पूरी तरह से छीलने या तोड़ने की क्षमता रखते हैं, इसलिए वे ß या hem -हेमोलिसिस का उत्पादन करते हैं और सूक्ष्मजीवों को ß-hemolytic कहते हैं।

Re-हेमोलाइटिक बैक्टीरिया के उदाहरण स्ट्रेप्टोकोकस पाइोजेन्स और स्ट्रेप्टोकोकस एग्लैक्टिया हैं।

अल्फा-हेमोलिटिक्स वे हैं जो आंशिक हेमोलिसिस को अंजाम देते हैं, जहां हीमोग्लोबिन को मेथेमोग्लोबिन के लिए ऑक्सीकरण किया जाता है, जिससे कालोनियों के चारों ओर हरा-भरा रंग बनता है। इस घटना को α या α -hemolysis के रूप में जाना जाता है और बैक्टीरिया को α - हेमोलीटिक के रूप में वर्गीकृत किया जाता है।

Α-hemolytic बैक्टीरिया के उदाहरण स्ट्रेप्टोकोकस न्यूमोनिया और विरिडन्स समूह के स्ट्रेप्टोकोकस हैं।

अंत में, तथाकथित गामा-हेमोलिटिक या गैर-हेमोलिटिक बैक्टीरिया हैं। ये उस पर परिवर्तन उत्पन्न किए बिना अगर पर बढ़ते हैं, एक प्रभाव जिसे hem -hemolysis के रूप में जाना जाता है, और सूक्ष्मजीव yt -hemolytic हैं।

Stra-हेमोलाइटिक बैक्टीरिया का उदाहरण: समूह डी स्ट्रेप्टोकोकस (स्ट्रेप्टोकोकस बोविस और एंटरोकोकस फेसेलिस) के कुछ उपभेद।

अनुप्रयोग

रक्त अगर संस्कृति माध्यम माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशाला में सबसे अधिक उपयोग किया जाता है।

रक्त अगर माध्यम पर बढ़ने में सक्षम सूक्ष्मजीवों में से हैं: सख्त एरोबिक, संकाय, माइक्रोएरोफिलिक, अवायवीय, ग्राम सकारात्मक या ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया, तेजी से बढ़ते या धीमी गति से बढ़ते बैक्टीरिया।

कुछ पोषण की मांग या फास्टिड बैक्टीरिया भी बढ़ते हैं, साथ ही साथ कवक और खमीर भी। इसी तरह, यह उपसंस्कृति या उपजी को सक्रिय करने के लिए उपयोगी है जो चयापचय के बहुत कमजोर हैं।

हालांकि, रक्त के प्रकार और आधार की पसंद ठीक होने के संदिग्ध सूक्ष्मजीव के आधार पर अलग-अलग होगी और जिस प्लेट का उपयोग किया जाना है (संस्कृति या एंटीबायोग्राम)।

रक्त प्रकार की पसंद

रक्त भेड़, खरगोश, घोड़े या मानव हो सकता है।

सबसे अधिक अनुशंसित भेड़ के बच्चे का खून है, कुछ अपवादों के साथ। उदाहरण के लिए, हीमोफिलस प्रजातियों को अलग करने के लिए, जहां अनुशंसित रक्त घोड़े या खरगोश का खून है, क्योंकि भेड़ के बच्चे में एंजाइम होते हैं जो कारक V को रोकते हैं।

कम से कम अनुशंसित मानव है, हालांकि यह सबसे अधिक उपयोग किया जाता है, शायद क्योंकि यह प्राप्त करना सबसे आसान है।

किसी भी प्रकार के एडिटिव और स्वस्थ जानवरों से प्राप्त किए गए रक्त को डिफाइब्रिनेट किया जाना चाहिए। मानव रक्त के उपयोग के लिए, कई कारकों को ध्यान में रखा जाना चाहिए:

यदि रक्त उन व्यक्तियों से आता है जिन्हें जीवाणु संक्रमण हुआ है, तो उनके पास विशिष्ट एंटीबॉडी होंगे। इन स्थितियों के तहत कुछ बैक्टीरिया की वृद्धि बाधित होने की संभावना है।

यदि यह रक्त बैंक से प्राप्त किया जाता है, तो इसमें साइट्रेट होता है और इसकी उपस्थिति में कुछ बैक्टीरिया विकसित नहीं हो सकते हैं। दूसरी ओर, यदि रक्त उन रोगियों से आता है जो एंटीबायोटिक्स ले रहे हैं, तो अतिसंवेदनशील बैक्टीरिया का विकास बाधित हो सकता है।

और अगर रक्त एक मधुमेह व्यक्ति से है, तो अतिरिक्त ग्लूकोज हेमोलिसिस पैटर्न के समुचित विकास में हस्तक्षेप करता है।

आधार अगर प्रकार की पसंद

रक्त अगर की तैयारी के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला आधार एगर बहुत व्यापक हो सकता है। उनमें से हैं: पोषक तत्व अगर, मस्तिष्क हृदय जलसेक अगर, ट्राइप्टिसेज़ सोया अगर, म्यूलर हिंटन अगर, थायर मार्टिन अगर, कोलंबिया अगार, ब्रुसेला अगर, कैंप्लोबैक्टेर अगर आदि।

इसकी तैयारी के लिए उपयोग किए गए आधार माध्यम के अनुसार रक्त अगर का उपयोग

पोषक कृषि

यह आधार कम से कम उपयोग किया जाता है, क्योंकि यह मुख्य रूप से गैर-मांग वाले बैक्टीरिया को विकसित करेगा, जैसे कि एंटिक बेसिली, स्यूडोमोनस एसपी, एस ऑरियस, बेसिलस एसपी, अन्य। स्ट्रेप्टोकोकस को अलग करने की सिफारिश नहीं की जाती है।

ब्रेन हार्ट इन्फ्यूजन अगर (BHI)

यह रक्त अगर के लिए एक आधार के रूप में सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, क्योंकि इसमें स्ट्रेप्टोकोकस एसपी और अन्य मांग वाले बैक्टीरिया सहित अधिकांश बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक पोषक तत्व होते हैं। हालांकि हेमोलिसिस के पैटर्न का निरीक्षण करना उचित नहीं है।

इस आधार के साथ आम तौर पर मेम्ने के रक्त का उपयोग किया जाता है।

रक्त अगर वेरिएंट भी तैयार किए जा सकते हैं, जहां कुछ सूक्ष्मजीवों को अलग करने के लिए अन्य यौगिकों को जोड़ा जाता है। उदाहरण के लिए, ब्रेन हार्ट इन्फ्यूजन आगर को खरगोश के रक्त, सिस्टीन और ग्लूकोज के साथ पूरक किया जाता है, जिसका उपयोग फ्रांसिसैला टुलारेन्सिस को अलग करने के लिए किया जा सकता है।

जबकि, सिस्टीन टेल्यूराइट के साथ यह Corynebacterium diphteriae के अलगाव के लिए उपयोगी है। मानव या मेमने के रक्त का उपयोग किया जा सकता है।

पहले के साथ बीटा-हेमोलिसिस एक संकीर्ण प्रभामंडल के रूप में देखा जाएगा, जबकि दूसरे के साथ प्रभामंडल अधिक व्यापक होगा।

इसी तरह, यह बेस, बैकीट्रैसिन, कॉर्न स्टार्च, हॉर्स ब्लड और अन्य संवर्धन सप्लीमेंट्स (IsoVitaleX) के साथ मिलकर, श्वसन के नमूनों से जीन हेमोफिलस एसपी के अलगाव के लिए उपयोग किया जाता है।

इसके अलावा, अगर एंटीबायोटिक दवाओं के संयोजन chloramphenicol - gentamicin या पेनिसिलिन - घोड़े के खून के साथ स्ट्रेप्टोमाइसिन को जोड़ा जाता है, तो साबुदुर ग्लूकोज अगर की अधिक उपज के साथ, रोगजनक कवक के अलगाव के लिए आदर्श है। यह हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलैटम के अलगाव में विशेष रूप से उपयोगी है।

ट्रायप्टिसेज़ सोया अगर

यह आधार हेमोलिसिस पैटर्न के बेहतर अवलोकन के लिए और ऑप्टोक्वाइन टैक्सा और बैकीट्रैसिन जैसे नैदानिक ​​परीक्षणों के प्रदर्शन के लिए सबसे अधिक अनुशंसित है। यह क्लासिक रक्त अगर है जो नियमित रूप से उपयोग किया जाता है।

इस आधार के साथ आप Corynebacterium diphteriae के लिए सिस्टीन टेलराइट और मेमने के रक्त के साथ विशेष रक्त अगर तैयार कर सकते हैं ।

इसी तरह, मेमने के रक्त के साथ इस अगर का संयोजन, प्लस केनामाइसिन-वैनकोमाइसिन एनारोबेस के विकास के लिए आदर्श है, विशेष रूप से बैक्टेरॉइड्स एसपी।

मुलर हिंटन आगर

रक्त के साथ पूरक इस आधार का उपयोग स्ट्रेप्टोकोकस एसपी जैसे तेज सूक्ष्मजीवों के एंटीबायोग्राम को करने के लिए किया जाता है।

यह बैक्टीरिया के अलगाव के लिए भी उपयोगी है जैसे कि लीजिओनेला न्यूमोफिला।

थायर मार्टिन आगर

यह माध्यम रक्त एगर के लिए एक आधार के रूप में आदर्श है जब निसेरिया जीनस पर संदेह किया जाता है, विशेष रूप से नेइसेरिया मेनिंगिटिडिस, चूंकि एन। गोनोरिया रक्त एगर पर नहीं बढ़ता है।

इसका उपयोग नीसेरिया मेनिंगिटिडिस के लिए संवेदनशीलता के परीक्षण के लिए भी किया जाता है।

कोलंबिया आगर

यह आधार हेलिकोबैक्टर पाइलोरी के लिए गैस्ट्रिक बायोप्सी नमूनों को बोने के लिए उत्कृष्ट है।

अन्य प्रकार के जीवाणुओं के विकास को रोकने के लिए एंटीबायोटिक दवाओं (वैनकोमाइसिन, ट्राइमेथोप्रिम, एम्फोटेरिसिन बी और सेफ़्सुलोडिन) के साथ 7% मेमने के रक्त को मिश्रित करके माध्यम तैयार किया जाता है।

यह वही आधार मानव या भेड़ के बच्चे के रक्त के साथ पूरक है, नेलडिक्लिक एसिड और कोलिस्टिन गार्डनरैला योनि को अलग करने के लिए उपयोगी है। यह एक ही सूक्ष्मजीव के एंटीबायोटिक दवाओं के लिए रोगाणुरोधी संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए भी आदर्श है।

इसके अलावा, इसका उपयोग एनेरोब्स की खेती के लिए रक्त अगर की तैयारी के लिए किया जाता है, एमिनोग्लाइकोसाइड्स और वैनकोमाइसिन को जोड़ने के लिए।

यह आधार हेमोलिसिस पैटर्न के उचित अवलोकन के लिए अनुमति देता है।

ब्रुसेला अगर

विटामिन के के साथ मिलकर रक्त अगर के लिए एक आधार के रूप में इस्तेमाल किया जाने वाला यह माध्यम एनारोबिक बैक्टीरिया की खेती के लिए आदर्श है। इस मामले में, भेड़ के बच्चे के खून का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

कैम्पिलोबैक्टर अगर

5% भेड़ के खून और 5 एंटीबायोटिक्स (सेफलोथिन, एम्फोटेरिसिन बी, ट्राइमेथोप्रिम, पॉलीमैक्सीन बी और वैनकोमाइसिन) के साथ पूरक कैम्पीलोबैक्टर अगर, स्टूल नमूनों में कैम्पिलोबैक्टर जेजुनी को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला माध्यम है।

तैयारी

प्रत्येक वाणिज्यिक घर कंटेनर के पीछे एक संस्कृति माध्यम तैयार करने के निर्देश लाता है। चयनित आधार के आधार पर वांछित राशि तैयार करने के लिए पत्राचार गणना की जा सकती है।

वज़न और भंग

बेस एगर निर्जलित (पाउडर) है, इसलिए इसे पीएच 7.3 में समायोजित आसुत जल में भंग किया जाना चाहिए।

चुने हुए आधार अगर द्वारा इंगित की गई मात्रा को एक फ्लास्क में पानी की इसी मात्रा में तौला और भंग किया जाता है, फिर मध्यम गर्मी पर गर्म किया जाता है और रोटरी आंदोलनों के साथ मिश्रित किया जाता है जब तक कि सभी पाउडर भंग न हो जाए।

जीवाणुरहित

एक बार भंग, 20 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ।

रक्त समुच्चय

आटोक्लेव छोड़ते समय, फ्लास्क को तब तक ठंडा होने दिया जाता है जब तक तापमान 40 से 50 डिग्री सेल्सियस के बीच न हो जाए; यह एक तापमान है जो मानव त्वचा का समर्थन करता है और एक ही समय में अगर अभी तक ठोस नहीं हुआ है।

ऐसा करने के लिए, शीशी को हाथ से छुआ जाता है और अगर गर्मी सहन करने योग्य होती है, तो यह डीफ़्रिबिनेटेड रक्त (प्रत्येक लीटर अगर के लिए 50 मिलीलीटर) की समान मात्रा को जोड़ने के लिए आदर्श तापमान है। समरूपता के लिए धीरे से मिलाएं।

रक्त एकत्रीकरण का मार्ग महत्वपूर्ण है, क्योंकि यदि यह तब किया जाता है जब मध्यम बहुत गर्म होता है तो लाल रक्त कोशिकाएं टूट जाती हैं और माध्यम का उपयोग हेमोलिसिस के निरीक्षण के लिए नहीं किया जाएगा।

यदि इसे बहुत ठंडा जोड़ा जाता है, तो यह अकड़ जाएगा और उचित स्कोरिंग की अनुमति देने के लिए मध्यम की सतह चिकनी नहीं होगी।

पेट्री डिश में डालो

रक्त को समरूप करने के तुरंत बाद बाँझ पेट्री डिश में परोसें। प्रत्येक पेट्री डिश में लगभग 20 मिलीलीटर डाला जाता है। इस प्रक्रिया को एक लामिना का प्रवाह हुड में या बर्नर के पास किया जाता है।

पेट्री डिश में रक्त अगर को परोसते समय, प्लेट की सतह पर कोई हवाई बुलबुले नहीं रहना चाहिए। यदि ऐसा होता है, तो बूनसेन बर्नर की लौ उन्हें खत्म करने के लिए प्लेट पर जल्दी से पारित हो जाती है।

प्लेटों को जमने और एक रेफ्रिजरेटर (2-8 डिग्री सेल्सियस) में संग्रहीत करने की अनुमति दी जाती है जब तक उपयोग न किया जाए। रक्त अगर प्लेटों का उपयोग करने से पहले, उन्हें सीड होने के लिए टेम्पर्ड (कमरे के तापमान तक पहुंचने की अनुमति) होना चाहिए।

तैयार प्लेटें लगभग 1 सप्ताह तक चलती हैं।

संदर्भ

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