थायर मार्टिन अगर: नींव, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

थायर मार्टिन अगर यह नेइसेरिया meningitidis और नेइसेरिया gonorrhoeae के अलगाव के लिए एक बेहद पौष्टिक और ठोस चयनात्मक माध्यम है; दोनों को रोगजनक या चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण निसेरिया के रूप में जाना जाता है।

थायर मार्टिन आगर की सबसे महत्वपूर्ण विशेष विशेषताओं में से एक इसकी उच्च पोषण सामग्री है। यह संपत्ति आवश्यक है, क्योंकि न्यूसिसर्स पोषण के दृष्टिकोण से सूक्ष्मजीवों की बहुत मांग कर रहे हैं और इसलिए आम मीडिया में विकसित नहीं होते हैं।

थायर मार्टिन / आगर थायर मार्टिन व्यापार माध्यम। स्रोत चित्र 1: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया। मारिएला गिल, छवि 2. पिक्सिनियो.कॉम बैक्टीरियोकोलाइज़्ड, संशोधित, थायर, मार्टिन, अगर।

दूसरी ओर, चूंकि ये सूक्ष्मजीव सामान्य रूप से गैर-बाँझ क्षेत्रों में पाए जाते हैं, इसलिए निएसेरिया जीनस के विकास को प्रभावित किए बिना, साथ के वनस्पतियों के विकास को रोकने के लिए अवरोधकों को जोड़ना आवश्यक है।

यह एगर जीसी बेस एगर, हीमोग्लोबिन, अतिरिक्त पोषण की खुराक और निरोधात्मक पदार्थों (एंटीबायोटिक्स और एंटीफंगल) के एक परिसर से बना है। वाणिज्यिक घराने प्रत्येक पूरक को अलग से बेचते हैं।

इस माध्यम में बोया जाने वाला नमूना उस सूक्ष्मजीव पर निर्भर करेगा जो मांगा जा रहा है। नीसेरिया गोनोरिया के लिए आदर्श नमूने योनि और मूत्रमार्ग के स्राव हैं। जबकि निएसेरिया मेनिंगिटिडिस के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले नमूने सीएसएफ, ग्रसनी और नासोफेरींजल एक्सटेलेट हैं।

आधार

Neisserias कष्टप्रद के रूप में वर्गीकृत सूक्ष्मजीव हैं और इसलिए उनका अलगाव मुश्किल है। इसलिए, थायर मार्टिन एक जटिल माध्यम है और इसके प्रत्येक घटक एक फ़ंक्शन को पूरा करते हैं जिसे नीचे समझाया गया है:

जीसी आधार अगर

जीसी अगर में पेप्टोन प्रोटोज, कॉर्नस्टार्च, सोडियम क्लोराइड, डिपोटेशियम फॉस्फेट, मोनोपोटेशियम फॉस्फेट और अगर-एगर शामिल हैं। इसके घटक माइक्रोबियल विकास के लिए बुनियादी पोषक तत्व प्रदान करते हैं, विषाक्त फैटी एसिड को बेअसर करते हैं, आसमाटिक संतुलन बनाए रखने में मदद करते हैं, पीएच को परिभाषित करते हैं और मध्यम को ठोस स्थिरता प्रदान करते हैं।

हीमोग्लोबिन

हीमोग्लोबिन कारकों वी और एक्स (निकोटिनामाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड एनएडी और हेमिन क्रमशः) प्रदान करता है। इस कारण से, इस माध्यम में हीमोफिलस प्रजाति भी विकसित होती है। हीमोग्लोबिन को व्यावसायिक रूप से निर्जलित रूप में प्राप्त किया जा सकता है या मध्यम में ताजा डीफिब्रिनेटेड गोजातीय रक्त जोड़ा जा सकता है।

संवर्धन पूरक

दूसरी ओर, थायर-मार्टिन माध्यम में एक संवर्धन पूरक को भी जोड़ा जाना चाहिए, क्योंकि आधार अगर में निहित पोषक तत्व नीसेरिया जीनस की आवश्यकताओं के लिए पर्याप्त नहीं हैं।

सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला संवर्धन पूरक को आइसोवाइटलेक्स कहा जाता है। इसमें ग्लूटामाइन, एडेनिन, एनएडी, कोकारबॉक्साइलेज, ग्वानिन, फेरिक नाइट्रेट, पी-एमिनो बेंजोइक एसिड, विटामिन बी 12, थायमिन और ग्लूकोज शामिल हैं। ये सभी यौगिक रोगजनक नीसेरिया के समुचित विकास के लिए आवश्यक हैं।

इनहिबिटर्स

जैसा कि यह एक अत्यधिक पौष्टिक माध्यम है, अवरोधकों का उपयोग किया जाना चाहिए जो कि क्षेत्र के सामान्य वनस्पतियों से सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकते हैं और इस प्रकार नीसेरिया जीनस के अलगाव का पक्ष लेते हैं।

इनहिबिटर कॉम्प्लेक्स वैनकोमाइसिन, कोलिस्टिन और निस्टैटिन से बना है। वैनकोमाइसिन ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया के विकास को रोकता है, कोलिस्टिन ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया जैसे स्यूडोमोनास और कुछ सैप्रोफाइटिक नीसेरिएस के विकास को रोकता है, और कैंडिडा एल्बीकैंस जैसे यीस्ट पर नेस्टैटिन काम करता है।

हालाँकि, बाद में थायर मार्टिन आगर को संशोधित किया गया; परिवर्तन में ट्राइमेथोप्रिम के अलावा, अगर की मात्रा में वृद्धि और अतिरिक्त ग्लूकोज को शामिल किया गया। इन परिवर्तनों ने निसेरिया गोनोरिया प्रजातियों की वसूली में काफी सुधार किया।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि ट्राइमेथोप्रिम जीनस प्रोटीस की वृद्धि और इसके परिणामस्वरूप सूजन गठन को रोकता है। इस अर्थ में, यह एंटीबायोटिक्स है जो थायर मार्टिन माध्यम को चयनात्मक चरित्र प्रदान करते हैं।

तैयारी

मूल थायर मार्टिन मार्टिन

-जीसी आगर

निर्जलित जीसी माध्यम के 8.2 ग्राम वजन और 100 मिलीलीटर में निलंबित। पूरी तरह से भंग करने के लिए लगातार सरगर्मी के साथ 1 मिनट के लिए मिलाएं और उबाल लें। 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में मिश्रण बाँझ।

- 2% हीमोग्लोबिन

एक समान मिश्रण बनने तक 2 या 3 मिलीलीटर गर्म आसुत जल में 2 ग्राम निर्जलित हीमोग्लोबिन को निलंबित करें। 100 मिलीलीटर की एक मात्रा को पूरा करने के लिए थोड़ा अधिक पानी से थोड़ा जोड़ें। स्टरलाइज़ करने से पहले निलंबन सजातीय होना चाहिए।

15 मिनट के लिए आटोक्लेव में बाँझ।

-संचालन पूरक

एक ही वाणिज्यिक कंपनी द्वारा प्रदान की गई मंदता के साथ वाणिज्यिक शीशी का पुनर्निर्माण करें। अच्छी तरह मिलाएं। किट के निर्देशों में उपयोग करने के लिए मंदक की मात्रा निर्दिष्ट की जाएगी।

-VCN निषेध पूरक (वैनकोमाइसिन, कोलिस्टिन, निस्टैटिन)

वाणिज्यिक कंपनी द्वारा प्रदान की गई मंदता के साथ शीशी का पुनर्निर्माण करें। अच्छी तरह मिलाएं। किट के निर्देशों में उपयोग करने के लिए मंदक की मात्रा निर्दिष्ट की जाएगी।

-तैयार

हर 100 मिलीलीटर जीसी अगर के लिए आगे बढ़ते हैं:

जब जीसी अगर आटोक्लेव छोड़ देता है, तो इसे लगभग 50 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ठंडा करने के लिए और तैयार हीमोग्लोबिन समाधान के 2 मिलीलीटर, संवर्धन पूरक के 2 मिलीलीटर (isobitalex या britalex), और निषेध के 2 मिलीलीटर जोड़ें। बाँझ पेट्री डिश में मिलाएं और परोसें।

उपयोग करने तक फ्रिज में जमने दें और स्टोर करें।

तैयार माध्यम का रंग चेरी लाल है। माध्यम का अंतिम पीएच 7.2 medium 0.2 है

संशोधित थायर मार्टिन आगर

निर्जलित जीसी माध्यम के 8.2 ग्राम वजन और 100 मिलीलीटर में निलंबित। अगर-अगर में 1 ग्राम और ग्लूकोज की 0.3 ग्राम जोड़ें। पूरी तरह से भंग करने के लिए लगातार सरगर्मी के साथ 1 मिनट के लिए मिलाएं और उबाल लें। 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में मिश्रण बाँझ।

पहले वर्णित के रूप में हीमोग्लोबिन और संवर्धन पूरक तैयार करें।

दमन पूरक का उपयोग किया जाता है VCNT (वैनकोमाइसिन, कोलिस्टिन, निस्टैटिन, ट्राइमेथोप्रिम)।

-तैयार

मूल थायर मार्टिन आगर के लिए वर्णित के रूप में आगे बढ़ें।

उपयोग

नमूनों को लकीर खींचने से पहले थायर मार्टिन आगर को गर्म करने की अनुमति दी जानी चाहिए। आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले नमूने ग्रसनी स्वाब, नाक की सूजन, योनि, मूत्रमार्ग और / या मलाशय निर्वहन, और CSF हैं।

ताजा नमूनों का उपयोग करें और अगर पर मजबूत inoculums बनाते हैं। नमूनों को सीधे सामग्री के निर्वहन द्वारा सींचा जाता है और फिर सतह पर थकावट होती है।

प्लेटों को माइक्रोएरोफिलिक जार (5% सीओ ₂) में 24 से 48 घंटों के लिए 35-37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है । ऊष्मायन समय के अंत में, प्लेटों की जांच छोटे, ग्रे और कभी-कभी म्यूकोइड-दिखने वाली कॉलोनियों के लिए की जाती है।

संदिग्ध कॉलोनियों पर ग्राम और पुष्टिकरण जैव रासायनिक परीक्षण करें।

क्यूए

थायर मार्टिन आगर की गुणवत्ता नियंत्रण के लिए निम्नलिखित माइक्रोबियल उपभेदों का उपयोग किया जा सकता है।

निसेरिया गोनोरिया एटीसीसी 49226 और निसेरिया मेनिंगिटिडिस एटीसीसी 13090; दोनों उपभेदों में संतोषजनक विकास अपेक्षित है।

निम्नलिखित उपभेदों को भी शामिल किया जाना चाहिए: स्टैफिलोकोकस एपिडर्मिडिस एटीसीसी 14990, एस्चेरिचिया कोलाई एटीसीसी 25922, प्रोटीज मिराबिलिस एटीसीसी 43071 और कैंडिडा अल्बिकन्स एटीसीसी 23231। इन सभी में, इस माध्यम में कुल या आंशिक निषेध अपेक्षित है।

सीमाएं

-हमें यह ध्यान रखना चाहिए कि उपयोग किए जाने वाले अवरोधकों के लिए प्रतिरोधी बैक्टीरिया मध्यम में विकसित हो सकते हैं।

-निसेरिया गोनोरिया के ऐसे उपभेद हैं जो इस्तेमाल की गई वैनकोमाइसिन की सांद्रता के प्रति संवेदनशील हो सकते हैं। इस कारण से, यह आइसोवैटेलेक्स के साथ पूरक चॉकलेट अगर का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, लेकिन अवरोधकों के बिना।

-निस्टैटिन के लिए खमीर प्रतिरोधी के उपभेद हैं जो इस माध्यम में बढ़ सकते हैं और रोगजनक नीसेरिएसिस के अलगाव के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं, विशेष रूप से गोनोकोकी।

संदर्भ

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