TETRATHIONATE शोरबा: औचित्य, तैयारी और उपयोग करता है - जीवविज्ञान - 2025

Tetrathionate शोरबा या शोरबा टीटी संवर्धन और जीनस साल्मोनेला उपभेदों की वसूली के लिए एक चयनात्मक तरल संस्कृति माध्यम है। यह मुलर द्वारा बनाया गया था और बाद में कॉफ़मैन द्वारा संशोधित किया गया था, यही वजह है कि वहाँ लोग हैं जो इसे मुलर-कॉफ़मैन शोरबा कहते हैं।

मूल माध्यम में प्रोटीओस पेप्टोन, कैल्शियम कार्बोनेट और सोडियम थायोसल्फेट थे। कॉफ़मैन ने पित्त लवण को इसमें जोड़ा और उज्ज्वल हरे रंग के साथ एक और विनय बनाया। ये पदार्थ कोलीफॉर्म की वृद्धि को रोकते हैं, जिससे रोगजनक बैक्टीरिया के विकास के लिए मध्यम मुक्त हो जाता है, इस मामले में साल्मोनेला।

Tetrathionate शोरबा में आयोडीन आयोडीन समाधान जोड़ना। स्रोत: मैनुअल अल्माग्रो रिवस

संशोधन बहुत सफल रहा क्योंकि इसने माध्यम की संवेदनशीलता को काफी बढ़ा दिया। इस कारण से, यह वर्तमान में किसी भी प्रकार के नमूने में साल्मोनेलस की खोज के लिए उपयोगी है, लेकिन विशेष रूप से ठोस या तरल मल और भोजन के लिए।

इसकी तैयारी में दो चरण होते हैं; वाणिज्यिक माध्यम टेट्राथिओनेट शोरबा तैयार करने के लिए एक आधार है, और बाद में, ताकि टेट्राथिओनेट का गठन किया जा सके, माध्यम को पूरा करने के लिए एक आयोडीन युक्त आयोडीन समाधान जोड़ा जाता है।

अमेरिकन पब्लिक हेल्थ एसोसिएशन (एपीएचए) साल्मोनेला के लिए नमूनों के संवर्धन के लिए चमकदार हरे रंग के साथ पूरक टेट्राथियनेट ब्रोथ के उपयोग की सिफारिश करता है, क्योंकि यह टेट्राथिओनेट ब्रोथ और सेलेनाइट ब्रोथ की तुलना में अधिक चयनात्मक है।

सामान्य तौर पर, टेट्राथिओनेट ब्रोथ आदर्श है जब जीनस साल्मोनेला के जीवाणुओं की उपस्थिति कम मात्रा में या जब वे निरोधात्मक पदार्थों के संपर्क में या औद्योगिक प्रक्रियाओं द्वारा उनकी व्यवहार्यता को कम करते हैं, तो उनका दुरुपयोग होता है।

आधार

पेप्टोन कैसिइन के अग्नाशयी पाचन और पशु ऊतक के पेप्टिक पाचन के अनुरूप हैं। ये बैक्टीरिया, नाइट्रोजन, और बैक्टीरिया के विकास के लिए सामान्य पोषक तत्वों का स्रोत प्रदान करते हैं।

अपने हिस्से के लिए, सोडियम थायोसल्फेट टेट्राथिओनेट बनाने के लिए आयोडीन युक्त समाधान के साथ प्रतिक्रिया करता है। यह कोलीफॉर्म की वृद्धि को रोकता है और बैक्टीरिया के विकास का पक्षधर है, जिसमें एंजाइम टेट्राथिओनेट रिडक्टेस होते हैं, उनमें से जीनस साल्मोनेला है, लेकिन प्रोटियस भी।

पित्त लवण भी अधिकांश ग्राम पॉजिटिव और कुछ ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया (कोलीफॉर्म) के लिए एक निरोधात्मक पदार्थ के रूप में कार्य करते हैं।

कैल्शियम कार्बोनेट टेट्राथिओनेट के अपघटन द्वारा उत्पन्न विषाक्त पदार्थों को अवशोषित करता है, जो सल्फ्यूरिक एसिड बनाता है। इस अर्थ में, कैल्शियम कार्बोनेट अम्लता को बेअसर करता है, मध्यम के पीएच को स्थिर रखता है।

चमकीले हरे रंग के रूप के मामले में, यह पदार्थ साल्मोनेला जीनस के अलावा अन्य सूक्ष्मजीवों को रोककर टेट्राथिओनेट शोरबा की चयनात्मक शक्ति को बढ़ाता है।

तैयारी

-टेट्रियोनेट ब्रोथ

आयोडीन आयोडीन समाधान

तौलना:

• 6 ग्राम आयोडीन।
• पोटेशियम आयोडाइड के 5 ग्राम।

पोटेशियम आयोडाइड को बाँझ आसुत जल के लगभग 5 मिलीलीटर में भंग कर दिया जाता है, फिर आयोडीन को थोड़ा-थोड़ा करके जोड़ा जाता है, जब मिश्रण गर्म होता है। पूरी तरह से भंग हो जाने के बाद, 20 मिलीलीटर की अंतिम मात्रा तक पहुंचने तक बाँझ आसुत जल के साथ निशान तक करें।

टेट्राथिओनेट शोरबा के लिए आधार माध्यम

निर्जलित माध्यम का 46 ग्राम वजन और बाँझ आसुत जल के 1 लीटर में निलंबित करें। मिश्रण और गर्मी पूरी तरह से भंग होने तक, यह केवल कुछ मिनटों के लिए एक उबाल ला सकता है। आटोक्लेव मत करो। माध्यम का आधार लगभग 45 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा करने की अनुमति है और उस समय आयोडीन युक्त समाधान के 20 मिलीलीटर को जोड़ा जाता है।

आयोडीन युक्त घोल को माध्यम में मिलाने के बाद इसका तुरंत उपयोग करना चाहिए। यदि आप संपूर्ण मिश्रण का उपयोग नहीं करना चाहते हैं, तो निम्नानुसार आगे बढ़ें:

आधार माध्यम के 10 मिलीलीटर को ट्यूबों में वितरित किया जाता है, और केवल नमूनों के साथ टीका लगाने के लिए आयोडीन युक्त समाधान के 0.2 मिलीलीटर जोड़ा जाता है।

जिनका उपयोग नहीं किया जा रहा है, उन्हें अभी भी रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जा सकता है, हालांकि जैसा कि माध्यम निष्फल नहीं है, आदर्श वह है जो आवश्यक राशि तैयार करता है।

आयोडीन युक्त आयोडीन घोल में डालने से पहले माध्यम का रंग दूधिया सफेद होता है और इसके बाद यह घने वेग के साथ भूरे रंग का होता है। मनाया गया अवक्षेप सामान्य है और कैल्शियम कार्बोनेट से मेल खाता है जो भंग नहीं होता है। माध्यम का अंतिम पीएच 8.4 pH 0.2 है।

चमकीले हरे रंग के साथ टेट्राथिओनेट शोरबा संस्करण

चमकीले हरे रंग के टेट्राथिओनेट शोरबा को तैयार करने के लिए, ऊपर वर्णित सभी चरणों को पूरा किया जाता है, लेकिन इसके अलावा 0.1% पर तैयार उज्ज्वल हरे घोल के 10 मिलीलीटर मिश्रण में जोड़ा जाएगा।

चमकता हुआ हरा

यह समाधान इस प्रकार तैयार किया गया है:

चमकीले हरे रंग का 0.1 ग्राम वजन करें और आसुत जल के 100 मिलीलीटर में निलंबित करें। कुल विघटन को प्राप्त करने के लिए उबलते हुए गर्मी। एम्बर बोतल में स्टोर करें।

उपयोग

मल के नमूने (स्टूल कल्चर) के लिए प्रोटोकॉल निम्नानुसार है:

तैयार टेट्राथिओनेट शोरबा के 10 मिलीलीटर के साथ एक ट्यूब में ठोस स्टूल के 1 ग्राम या तरल मल के 1 मिलीलीटर का टीकाकरण करें। सख्ती से हिलाएं और 6-24 घंटे के लिए 43 डिग्री सेल्सियस पर एरोबिक रूप से सेते हैं।

इसके बाद, साल्मोनेला के लिए चयनात्मक माध्यम में शोरबा और उपसंस्कृति के 10 से 20 एल एलिकोट लें, जैसे कि एसएस अगर, एक्सएलडी अगर, उज्ज्वल हरा अगर, हेक्टोइन एंटरटेनर।

समानांतर में, साल्मोनेला के लिए चयनात्मक मीडिया को संवर्धन के बिना प्रत्यक्ष नमूना (मल) के साथ टीका लगाया जाना चाहिए। मलाशय झाड़ू नमूनों के लिए, ट्यूब में एकत्रित सामग्री का निर्वहन करें और ऊपर वर्णित अनुसार आगे बढ़ें।

खाद्य नमूनों के लिए, 10 ग्राम ठोस भोजन या 10 मिलीलीटर तरल भोजन का वजन करें और 100 मिलीलीटर रेडी-टू-यूज़ टेट्राथिओनेट शोरबा के साथ एक बोतल को टीका दें। ऊपर वर्णित तरीके से आगे बढ़ें लेकिन 37 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं।

जैसा कि देखा जा सकता है, नमूना और शोरबा के बीच का संबंध हमेशा 1:10 होगा।

क्यूए

ज्ञात नियंत्रण उपभेदों का उपयोग संस्कृति माध्यम का परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है। सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले एटीसीसी प्रमाणित उपभेद हैं।

इस्तेमाल किए जाने वाले उपभेदों में साल्मोनेला टाइफिम्यूरियम एटीसीसी 14028, साल्मोनेला एबोनी डीएसएम 4224, साल्मोनेला एंटरिटिडिस एटीसीसी 13076, एस्चेरिचिया कोलाई एटीसीसी 25922, एंटरोकोकस फेसेलिस एटीसीसी 19433 और स्टेफिलोकोकस ऑरियस एटीसीसी 25923 हैं।

साल्मोनेला उपभेदों के लिए उत्कृष्ट वृद्धि की उम्मीद है, जबकि एस्चेरिचिया कोलाई में कमजोर या नियमित विकास हो सकता है, और ग्राम पॉजिटिव स्ट्रेन (एंटरोकोकस और स्टैफिलोकोकस) आंशिक या पूरी तरह से बाधित होते हैं।

सिफारिशें

-जैसे कि यह माध्यम प्रोटीज के विकास को बाधित नहीं करता है, कुछ प्रयोगशालाएं इस माइक्रोबियल स्ट्रेन के विकास को रोकने के लिए 40 मिलीग्राम / एल नोवोबीसिन का उपयोग करती हैं। एंटीबायोटिक को आयोडीन समाधान से पहले जोड़ा जाना चाहिए।

-आयोडीन आयोडीन सॉल्यूशन सहित माध्यम तैयार करने के बाद 2 घंटे से अधिक समय नहीं लगना चाहिए।

- ट्यूबों में माध्यम को वितरित करते समय, गठित अवक्षेप को फिर से शुरू करने के लिए मिश्रण को लगातार समरूप बनाना चाहिए।

कम दूषित नमूनों में, टेट्राथिओनेट शोरबा 35-37 ° C पर ऊष्मायन किया जाता है, और अत्यधिक दूषित नमूनों में 43 ° C पर ऊष्मायन की सिफारिश की जाती है।

संदर्भ

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