थियोग्लाइकोलेट शोरबा: औचित्य, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

Thioglycollate शोरबा एक मध्यम समृद्ध द्रव निरंतरता है। इसे एफसीएम द्वारा अंग्रेजी फ्लुइड थियोग्लाइकोलेट मीडियम में इसके संक्षिप्त नाम से जाना जाता है। यह ब्रेवर द्वारा बनाया गया था और 1944 में वेरा द्वारा संशोधित किया गया था, जिन्होंने इसमें कैसिइन पेप्टोन जोड़ा।

इस माध्यम में कम ऑक्सीकरण-कटौती की क्षमता होती है, इसलिए इसे सख्त एरोबिक बैक्टीरिया के विकास के लिए अनुशंसित नहीं किया जाता है, लेकिन यह फैक्टिकल एरोबिक, सख्त एनारोबिक और अनैमैंडिंग माइक्रोएरोफिलिक बैक्टीरिया को ठीक करने के लिए आदर्श है।

सूचक के बिना थियोग्लाइकोलेट शोरबा। योनि स्राव दिखाता है। स्रोत: बोबजलिंडो

सूक्ष्मजीवों की एक विस्तृत विविधता के अलगाव और पुनर्प्राप्ति में इस माध्यम के साथ देखे गए उच्च प्रदर्शन ने यूनाइटेड स्टेट्स फार्माकोपिया (यूएसपी), आधिकारिक एसोसिएशन ऑफ एग्रीकल्चर केमिस्ट्स (एओएसी) और यूरोपीय फार्माकोपिया द्वारा स्वीकार कर लिया है (ईपी)।

ये संगठन फार्मास्युटिकल उत्पादों के बाँझपन नियंत्रण परीक्षण और विभिन्न प्रकार के नमूनों के संवर्धन के लिए इसकी सलाह देते हैं।

कैडो थायोग्लाइकोलेट खमीर निकालने, कैसिइन के अग्नाशयी पाचन, निर्जल डेक्सट्रोज, एल-सिस्टीन, सोडियम क्लोराइड, सोडियम थियोग्लिकॉल, रेजाज़ुरिन और एगर से थोड़ी मात्रा में बनता है।

इस माध्यम के कई संस्करण हैं, उनमें से हैं: सूचक के साथ thioglycollate शोरबा, सूचक के बिना thioglycollate शोरबा, सूचक के साथ thioglycollate शोरबा hemin और विटामिन K _{1 के} साथ समृद्ध , और कैल्शियम कार्बोनेट के साथ thioglycollate शोरबा।

विशेष रूप से, हेमिन और विटामिन के के साथ समृद्ध थियोग्लाइकोलेट शोरबा संस्करण फास्टैडियस एनारोबेस के विकास को बढ़ाने के लिए कार्य करता है, और कैल्शियम कार्बोनेट युक्त थियोग्लाइकोलेट शोरबा माइक्रोबियल विकास के दौरान उत्पादित एसिड का मुकाबला करने के लिए उपयोगी है।

आधार

थियोग्लाइकोलेट शोरबा एक गैर-चयनात्मक संवर्धन माध्यम माना जाता है क्योंकि यह सबसे गैर-फास्टिड बैक्टीरिया की वृद्धि की अनुमति देता है। खमीर निकालने, अग्नाशय के पाचन और ग्लूकोज द्वारा पोषण संबंधी आवश्यकताएं प्रदान की जाती हैं।

दूसरी ओर, यह माध्यम, शोरबा होने के बावजूद, इसमें थोड़ी मात्रा में अगर शामिल है; इसका मतलब यह है कि इसमें ऑक्सीकरण-कम करने की क्षमता है, इस तथ्य के कारण कि यह ऑक्सीजन के प्रवेश को धीमा कर देता है, इस तरह से कि ऑक्सीजन कम हो जाती है क्योंकि यह ट्यूब में गहराई तक जाती है।

यही कारण है कि यह माध्यम इन स्थितियों के तहत सेते रहने की आवश्यकता के बिना, बाद के एरोबिक बैक्टीरिया, माइक्रोएरोफिलिक और सख्त अवायवीय बैक्टीरिया के विकास के लिए आदर्श है। वही माध्यम माध्यम के भीतर ऑक्सीजन की मात्रा को नियंत्रित करता है, ट्यूब के नीचे अनुपस्थित और सतह पर पर्याप्त मात्रा में होता है।

इसी तरह, थियोग्लाइकोलेट और एल-सिस्टीन एजेंटों को कम करने के रूप में कार्य करते हैं, जो बैक्टीरिया के विकास के लिए हानिकारक पदार्थों के संचय को रोकने में मदद करते हैं, जैसे पेरोक्साइड। इसके अलावा, इन यौगिकों में सल्फरहाइड्रील समूह (-S-) होते हैं, अन्य भारी धातुओं के बीच पारा डेरिवेटिव, आर्सेनिक के निरोधात्मक प्रभावों को बेअसर करते हैं।

इसके भाग के लिए, रेजेज़ुरिन ऑक्साइड-कमी का एक संकेतक है। ऑक्सीकरण होने पर कम और गुलाबी होने पर यह पदार्थ रंगहीन होता है। संकेतक और गैर-संकेतक थियोग्लिकॉललेट शोरबा संस्करण हैं। इसका उपयोग नमूना के प्रकार और प्रयोगशाला की प्राथमिकता पर निर्भर करेगा।

इस बीच, सोडियम क्लोराइड थायोग्लाइकोलेट शोरबा के आसमाटिक संतुलन को बनाए रखता है और निर्जल रूप में ग्लूकोज का उपयोग निर्जलित माध्यम में अतिरिक्त नमी को रोकता है।

तैयारी

संकेतक के साथ थियोग्लाइकोलेट ब्रोथ

निर्जलित माध्यम के 29.75 ग्राम वजन और आसुत जल के 1 लीटर में भंग। मिश्रण को लगभग 5 मिनट तक खड़े रहने की अनुमति है। गर्मी स्रोत में लाओ और पूरी तरह से भंग होने तक अक्सर हिलाओ।

टेस्ट ट्यूब और 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में मध्यम डालो। उपयोग करने से पहले ठंडा होने दें। इसके संरक्षण के लिए वाणिज्यिक घर की प्रविष्टि की जाँच करें। कुछ एक अंधेरे जगह में कमरे के तापमान पर भंडारण की सलाह देते हैं, और कुछ अन्य प्रकाश से संरक्षित रेफ्रिजरेटर में।

तैयार माध्यम का पीएच 7.1 medium 0.2 है।

निर्जलित माध्यम का रंग हल्का बेज है और तैयार माध्यम कुछ अफीम के साथ हल्का एम्बर है।

सूचक के साथ थियोग्लाइकोलेट शोरबा हेमिन और विटामिन के के साथ समृद्ध

ऐसे वाणिज्यिक मीडिया हैं जिनमें पहले से ही हेमिन और विटामिन के _{1 शामिल हैं}, विशेष रूप से एनारोबेस की खेती के लिए।

यदि आपके पास एनारोबेस के लिए समृद्ध माध्यम नहीं है, तो आप मूल थियोग्लाइकोलेट शोरबा तैयार कर सकते हैं। इसके लिए, मध्यम के प्रत्येक लीटर के लिए 10 मिलीग्राम हेमिन हाइड्रोक्लोराइड और 1 मिलीग्राम विटामिन के _{1 जोड़ा} जाता है। हालांकि, अगर रक्त या सीरम thioglycollate शोरबा में जोड़ा जाता है, तो हेमिन या विटामिन के के अलावा आवश्यक नहीं है।

कैल्शियम कार्बोनेट के साथ थियोग्लाइकोलेट शोरबा

यह व्यावसायिक रूप से आता है और सम्मिलित करने के निर्देशों के बाद तैयार किया जाता है।

सूचक के बिना थियोग्लाइकोलेट शोरबा

इसमें मूल थियोग्लाइकोलेट की एक ही रचना है, लेकिन इसमें रेजेज़्यूरिन नहीं है।

निर्जलित माध्यम का 30 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। बाकी तैयारी वैसी ही है जैसा कि संकेतक के साथ थियोग्लाइकोलेट शोरबा में वर्णित है।

उपयोग

थियोग्लाइकोलेट ब्रोथ नैदानिक ​​नमूनों के संवर्धन के लिए उपयोगी है, विशेष रूप से बाँझ साइटों से। यह गैर-नैदानिक ​​नमूनों, जैसे सौंदर्य प्रसाधन, ड्रग्स आदि के लिए भी उपयोगी है।

तरल नमूनों (जैसे CSF, श्लेष तरल पदार्थ, दूसरों के बीच) के टीकाकरण के लिए, नमूनों को पहले सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और फिर तलछट की 2 बूंदों को लिया जाता है और थियोग्लाइकोलेट शोरबा में रखा जाता है। 24 घंटे के लिए 35 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं। यदि इस समय में कोई वृद्धि (मैलापन) नहीं है, तो यह अधिकतम 7 दिनों तक इनक्यूबेट होता है।

यदि नमूने को एक स्लैब के साथ लिया जाता है, तो संस्कृति मीडिया को पहले प्लेटों में टीका लगाया जाता है और अंत में स्लैब को शोरबा में पेश किया जाता है, प्रोट्रूडिंग भाग को विभाजित किया जाता है और ट्यूब को कैप किया जाता है, जिससे स्वैब को अंदर छोड़ दिया जाता है। 24 घंटे, 7 दिन अधिकतम के लिए 35 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं।

ठोस नमूनों के लिए, शारीरिक खारा समाधान (SSF) में समरूपता और फिर निलंबन के 2 बूंदों के साथ थियोगिलकोलेट शोरबा को टीका लगाना।

यह कभी-कभी नमूने के लिए परिवहन माध्यम के रूप में उपयोग किया जा सकता है जहां सख्त एनारोब का संदेह होता है या बैकअप संवर्धन शोरबा के रूप में।

कैल्शियम कार्बोनेट के साथ thioglycollate शोरबा संस्करण का उपयोग लंबे समय तक नियंत्रण उपभेदों के रखरखाव के लिए किया जाता है, क्योंकि इसमें ग्लूकोज के उपयोग द्वारा उत्पादित एसिड को बेअसर करने की क्षमता होती है; ये एसिड कुछ बैक्टीरिया के लिए विषाक्त हैं।

थियोग्लाइकोलेट शोरबा में वृद्धि मध्यम की मैलापन से देखी जाएगी। नमूना के प्रकार और सूक्ष्मजीवों के संदिग्ध होने के आधार पर, गैर-चयनात्मक और चयनात्मक मीडिया में ग्राम दाग और बाद में उपसंस्कृति प्रदर्शन करने की सिफारिश की जाती है।

क्यूए

बाँझपन नियंत्रण के लिए यह टीका के बिना एक या दो शोरबा सेते हैं। अपेक्षित परिणाम एक स्पष्ट शोरबा है, जिसमें कोई रंग परिवर्तन नहीं है, हालांकि ट्यूब की सतह पर हल्का गुलाबी रंग देखना सामान्य है।

गुणवत्ता नियंत्रण के लिए, प्रमाणित नियंत्रण उपभेदों के 10 - 100 CFU के बीच, जैसे कि स्टैफिलोकोकस ऑरियस ATCC 6538, माइक्रोकॉकस ल्यूटस ATCC 9341, बेसिलस सबटिलोस INCC 6633, स्यूडोमोनस एरुगिनोसा ATCC 9027, क्लोस्ट्रीडियम स्पोरोजेन जैसे ATCC 1919 में इनकोक्युलेट किया जाना चाहिए। बैक्टेरॉइड्स वल्गेटस एटीसीसी 8482।

30-35 डिग्री सेल्सियस पर एरोबायोसिस में 24 घंटे के लिए अधिकतम 3 दिनों तक सेते हैं, क्योंकि ये सूक्ष्मजीव तेजी से बढ़ रहे हैं।

माइक्रोकॉकस ल्यूटस और बेसिलस सबटिलिस को छोड़कर सभी मामलों में अच्छे विकास की उम्मीद की जाती है, जहां मध्यम विकास हो सकता है।

हीमिन और विटामिन K _{1 से} समृद्ध थायोग्लाइकोलेट शोरबा की गुणवत्ता नियंत्रण के लिए, नियंत्रण उपभेदों बैक्टेरॉइड्स वल्गाटस एटीसीसी 8482, क्लोस्ट्रीडियम इत्र एटीसीसी 13124 और बैक्टिराइड्स फ्रेगिलिस एटीसीसी 25285 का उपयोग किया जा सकता है। अपेक्षित परिणाम संतोषजनक वृद्धि है।

सिफारिशें

-आमतौर पर यह देखा जा सकता है कि इंडिकेटर के साथ थिओग्लीकोलेट शोरबा की सतह गुलाबी हो जाती है; यह माध्यम के ऑक्सीकरण के कारण है। यदि गुलाबी रंग कुल शोरबा का 30% या अधिक कवर करता है, तो इसे पानी के स्नान में 5 मिनट के लिए गर्म किया जा सकता है, फिर से ठंडा किया जा सकता है और उपयोग किया जा सकता है।

यह अवशोषित ऑक्सीजन को हटा देगा, मध्यम को उसके मूल रंग में लौटा देगा। यह प्रक्रिया केवल एक बार ही की जा सकती है।

-एरोबिक बैक्टीरिया के विकास को बेहतर बनाने के लिए, ढक्कन को थोड़ा ढीला छोड़ दें। हालांकि, इस उद्देश्य के लिए उपयोग करना बेहतर होता है कि सख्त एरोबेस के समुचित विकास के लिए एक ब्रेन हार्ट इनफ्यूजन ब्रोथ या ट्रायप्टिसेज़ सोया शोरबा।

-मॉडल को गर्म करने या ज्यादा गर्म करने से बचना चाहिए, क्योंकि दोनों ही स्थितियां मीडियम को नुकसान पहुंचाती हैं।

-डायरेक्ट लाइट संस्कृति माध्यम को नुकसान पहुंचाती है, इसे प्रकाश से संरक्षित किया जाना चाहिए।

संदर्भ

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2. Chios Sas Laboratories। 2019. थियोग्लाइकोलेट शोरबा। पर उपलब्ध: quios.com.co
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