यूरिया शोरबा: नींव, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

यूरिया शोरबा एक तरल संस्कृति मध्यम, कुछ सूक्ष्मजीवों में urease एंजाइम की उपस्थिति का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया है। यूज एक माइक्रोबियल एंजाइम है जो एक संवैधानिक तरीके से निर्मित होता है, अर्थात, यह सब्सट्रेट है या नहीं जिस पर यह कार्य करता है, इसकी परवाह किए बिना इसे संश्लेषित किया जाता है।

मूत्र का कार्य कार्बनिक यौगिकों के अपघटन से संबंधित है। सभी सूक्ष्मजीव इस एंजाइम को संश्लेषित करने में सक्षम नहीं हैं, इसलिए प्रयोगशाला में इसका निर्धारण कुछ जीवाणु उपभेदों की पहचान करने और यहां तक ​​कि एक ही जीन की प्रजातियों के बीच अंतर करने की अनुमति देता है।

नकारात्मक और सकारात्मक यूरिया परीक्षण। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया फोटो। मारीलासा गिल।

यूरिया परीक्षण दो प्रकार के होते हैं: स्टुअर्ट और क्रिस्टेंसन। वे रचना और संवेदनशीलता में भिन्न हैं। जीनस प्रोटीन की प्रजातियों द्वारा उत्पादित मूत्र की एक बड़ी मात्रा को दिखाने के लिए पहला विशेष है।

दूसरा अधिक संवेदनशील है और अन्य जीवाणु जननों द्वारा देर से उत्पन्न होने वाली छोटी मात्रा का पता लगा सकता है, जैसे कि क्लेबसिएला, एंटरोबैक्टर, स्टैफिलोकोकस, ब्रुसेला, बोर्डेटेला, बेसिलस, माइक्रोकॉकस, हेलिकोबैक्टर और माइकोबैक्टीरियम।

स्टुअर्ट का यूरिया शोरबा यूरिया, सोडियम क्लोराइड, डिपोटेशियम फॉस्फेट, मोनोपोटेशियम फॉस्फेट, यीस्ट एक्सट्रैक्ट, फिनोल रेड और डिस्टिल्ड वॉटर से बना है।

इस बीच, क्रिस्टेंसेन का यूरिया शोरबा या अगर, पेप्टोन, सोडियम क्लोराइड, मोनोपोटेशियम फॉस्फेट, ग्लूकोज, यूरिया, फिनोल लाल, आसुत जल और अगर-अग्र से बना है। उत्तरार्द्ध केवल अगर यह ठोस माध्यम है।

आधार

एंजाइम कार्बन डाइऑक्साइड, पानी और अमोनिया के दो अणुओं को बनाने के लिए यूरिया को हाइड्रोलाइज करता है। ये यौगिक अमोनियम कार्बोनेट नामक अंतिम उत्पाद बनाने के लिए प्रतिक्रिया करते हैं।

स्टुअर्ट का यूरिया शोरबा

स्टुअर्ट का यूरिया शोरबा 6.8 के पीएच के साथ अधिक बफर है। इसलिए, फिनोल को लाल करने के लिए सूक्ष्मजीव को बड़ी मात्रा में अमोनिया बनाने में सक्षम होना चाहिए। पीएच 8 से ऊपर उठना चाहिए।

इसलिए, स्टुअर्ट का यूरिया शोरबा प्रोटीन प्रजातियों के लिए चयनात्मक है, जो ऊष्मायन के 24 से 48 घंटों के भीतर सकारात्मक परिणाम देता है, और यह उन बैक्टीरिया के लिए प्रभावी नहीं है जो कम मात्रा में यूरिया या धीरे-धीरे यूरिया का उत्पादन करते हैं।

ऐसा इसलिए है क्योंकि प्रोटीन प्रजातियां यूरिया को नाइट्रोजन स्रोत के रूप में उपयोग करने में सक्षम हैं। इसके बजाय, अन्य मूत्र-उत्पादक बैक्टीरिया को एक अतिरिक्त स्रोत की आवश्यकता होती है।

हालांकि, पेरेज़ एट अल। (2002) ने निर्धारित किया कि स्टुअर्ट का यूरिया शोरबा क्रिस्टीना के यूरिया अगर के रूप में जेनेरा कैंडिडा, क्रिप्टोकोकस, रोडोटरुला, ट्राइकोस्पोरन और सैक्रोमाइसेस के खमीर उपभेदों में निर्धारण के लिए कुशल था।

अध्ययन लेखकों का दावा है कि 24 और 48 घंटों के लिए इनक्यूबेट करते समय दोनों मीडिया (स्टुअर्ट और क्रिस्टेंसन) के साथ 100% समझौता किया है; इस अपवाद के साथ कि मीडिया को एक मजबूत गुलाबी-फुकिया रंग में बदलने में कामयाब होने वाले उपभेदों को सकारात्मक रूप में लिया गया।

यह स्पष्टीकरण आवश्यक है, क्योंकि लॉडर (1970) ने कहा कि लगभग सभी यीस्ट क्रिस्टीनसन के यूरिया अगर को गुलाबी करने के लिए बेवल को चालू करने का प्रबंधन करते हैं। यह इस तथ्य के कारण है कि वे यूरिया को कम से कम मात्रा में हाइड्रोलाइज कर सकते हैं, और सतह पर अमीनो एसिड के ऑक्सीडेटिव डिकार्बोजाइलेशन द्वारा अमीन्स का निर्माण होता है। इसे सकारात्मक नहीं माना जाना चाहिए।

क्रिस्टेंसन की यूरिया अगर या शोरबा

क्रिस्टेंसन के यूरिया शोरबा या अगर में कम बफर है, अमोनिया की थोड़ी मात्रा का पता लगाने में सक्षम है। इसके अलावा, यह माध्यम पेप्टोन और ग्लूकोज से समृद्ध है। इन यौगिकों के कारण अन्य मूत्र-उत्पादक सूक्ष्मजीव विकसित होते हैं जो स्टुअर्ट शोरबा में नहीं बढ़ते हैं।

इसी तरह, क्रिस्टेंसन यूरिया परीक्षण तेजी से परिणाम प्रदान करता है, विशेष रूप से प्रोटियस के लिए, न्यूनतम समय के रूप में केवल 30 मिनट में और अधिकतम समय के रूप में 6 घंटे तक जोरदार सकारात्मक देने में सक्षम है।

बाकी मूत्र पैदा करने वाले सूक्ष्मजीव 6 घंटे के बाद माध्यम के रंग को थोड़ा मोड़ने का प्रबंधन करते हैं, और दृढ़ता से 24, 48, 72 घंटे या उससे अधिक के बाद, और यहां तक ​​कि कुछ उपभेद भी 5 या 6 दिनों के बाद कमजोर प्रतिक्रिया दे सकते हैं।

दोनों मीडिया (स्टुअर्ट और क्रिस्टेंसन) की व्याख्या

माध्यम मूल रूप से पीले-नारंगी रंग का है और एक सकारात्मक प्रतिक्रिया मध्यम रंग को गुलाबी-फुकिया में बदल देगी। रंग की तीव्रता सीधे उत्पादित अमोनिया की मात्रा के लिए आनुपातिक है।

एक नकारात्मक प्रतिक्रिया खमीर के अपवाद के साथ मूल रंग का माध्यम छोड़ देगी, जो क्रिस्टेंसन के यूरिया आगर माध्यम पर पीला गुलाबी हो सकती है।

तैयारी

स्टुअर्ट का यूरिया शोरबा

वाणिज्यिक कंपनी के संकेतों के अनुसार आवश्यक ग्राम वजन। अधिमानतः बाँझ आसुत जल में भंग। गर्मी को भंग करने के लिए उपयोग न करें, क्योंकि यूरिया गर्मी के प्रति संवेदनशील है।

झिल्ली छानने का काम बाँझ बनाने के लिए किया जाता है। इसके लिए, 0.45 used व्यास वाले छिद्रों के साथ एक मिलिपोर फिल्टर का उपयोग किया जाता है। एक आटोक्लेव का उपयोग न करें। एक बार समाधान को फ़िल्टर करने के बाद, इसे बाँझ ट्यूबों में वितरित किया जाता है। विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए, इसे 1.5 मिलीलीटर न्यूनतम मात्रा के रूप में और 3 मिलीलीटर प्रति ट्यूब अधिकतम मात्रा के रूप में स्थानांतरित किया जाना चाहिए।

उपयोग करने से पहले एक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें और गर्म करें।

यदि निस्पंदन विधि उपलब्ध नहीं है, तो विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए माध्यम का तुरंत उपयोग किया जाना चाहिए।

स्टुअर्ट के यूरिया शोरबा तैयार करने का एक और तरीका इस प्रकार है:

कुछ वाणिज्यिक घर यूरिया परीक्षण के लिए आधार माध्यम बेचते हैं, यूरिया सहित नहीं।

वाणिज्यिक कंपनी द्वारा इंगित की गई मात्रा का वजन किया जाता है। यह आसुत जल में भंग किया जाता है और 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में निष्फल होता है। इसे थोड़ा आराम करने के लिए छोड़ दिया जाता है और मध्यम गर्म होने पर, यूरिया के 100 मिलीलीटर घोल को 20% पर तैयार किया जाता है और छानकर निष्फल किया जाता है।

यह बाँझ ट्यूबों में वितरित किया जाता है, जैसा कि पहले वर्णित है।

क्रिस्टेंसन की यूरिया अगर या शोरबा

यूरिया के घोल का लेप

निर्जलित यूरिया के 29 ग्राम वजन और आसुत जल के 100 मिलीलीटर में भंग। स्टरलाइज़ करने के लिए निस्पंदन विधि का उपयोग करें। आटोक्लेव मत करो।

-उपयोग बेस अगार

आसुत जल के 950 मिलीलीटर में निर्जलित आधार अगर के 24 ग्राम को भंग करें। 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में बाँझ। इसे तब तक आराम करने दें जब तक कि यह 50 डिग्री सेल्सियस के तापमान तक नहीं पहुंच जाता है और पहले से तैयार यूरिया को असमान रूप से जोड़ देता है।

बाँझ ट्यूबों में 4-5 मिलीलीटर डालो और ठोस तक झुकाव। लंबी बांसुरी वाली चोंच होनी चाहिए।

इस माध्यम को तरल रूप में भी तैयार किया जा सकता है।

अनुप्रयोग

यूरिया परीक्षण, फैमिली एंटरोबैक्टीरिया में जीनस प्रोटेक्टस को अन्य जेनेरा से अलग करने में बेहद प्रभावी है, जिसे प्रोटियस द्वारा प्रदान की गई तीव्र प्रतिक्रिया दी गई है।

क्रिस्टेंसन रचना का उपयोग करना, परीक्षण एक ही जीन की प्रजातियों के बीच अंतर करने में मदद करता है। उदाहरण के लिए, एस। हैमोलिटिकस और एस। वार्नेरी कोगुलेज़-नेगेटिव और बीटा-हेमोलिटिक स्टैफिलोकोकस हैं, लेकिन इस बात में भिन्न है कि एस। हेमोलीटिकस यूरिया नेगेटिव है और एस। वॉनेरी यूरिया पॉजिटिव है।

दूसरी ओर, McNulty ने गैस्ट्रिक म्यूकोसा (अंतः क्षेत्र) से ली गई बायोप्सी नमूनों में हेलिकोबैक्टर पाइलोरी की उपस्थिति का अध्ययन करने के लिए क्रिस्टेंसन के 2% यूरिया शोरबा का सफलतापूर्वक उपयोग किया।

एक सकारात्मक यूरिया परीक्षण द्वारा एच। पाइलोरी की उपस्थिति का सबूत है। परिणामों का निरीक्षण करने की अवधि वर्तमान सूक्ष्मजीवों की मात्रा के सीधे आनुपातिक है।

जैसा कि देखा जा सकता है, गैस्ट्रिक बायोप्सी में हेलिकोबैक्टर पाइलोरी के निदान के लिए यह एक सरल विधि है।

अंत में, यह परीक्षण जेनेरा ब्रुसेला, बोर्डेटेला, बैसिलस, माइक्रोकॉकस और माइकोबैक्टीरिया से अलग प्रजातियों के लिए भी उपयोगी है।

यूरिया टेस्ट बुवाई

परिणामों को अनुकूलित करने के लिए दोनों तरीकों को एक मजबूत माइक्रोबियल इनोकुलम की आवश्यकता होती है। बैक्टीरियल कालोनियों को अधिमानतः कुछ अपवादों के साथ, सबौरड आगर से रक्त अगर और खमीर से लिया जाता है। तरल माध्यम में इनोकुलम का उत्सर्जन होता है।

स्टुअर्ट के यूरिया शोरबा के लिए, 24 से 48 घंटों के लिए 37 24C पर सेते हैं, यह जानते हुए कि आप केवल प्रोटीन की तलाश कर रहे हैं जब तनाव एक जीवाणु है। खमीर के लिए, यह ऊष्मायन के 24 से 48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस या कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया जा सकता है।

क्रिस्टेंसन के यूरिया शोरबा के मामले में, यह 24 घंटे के लिए 37 ºC पर ऊष्मायन किया जाता है। यदि परीक्षण नकारात्मक है, तो इसे 6 दिनों तक ऊष्मायन किया जा सकता है। यदि परीक्षण 6 घंटे से पहले सकारात्मक है, तो यह इंगित करता है कि यह जीनस प्रोटीन का एक तनाव है।

क्रिस्टेंसन के यूरिया एगर के मामले में, एवर बेवल को दृढ़ता से बिना छिद्रित किया जाता है। शोरबा ऊष्मायन और उसी तरह व्याख्या की जाती है।

क्यूए

माध्यम का परीक्षण करने के लिए प्रोटीज मिराबिलिस एटीसीसी 43071, क्लेबसिएला न्यूमोनिया एटीसीसी 7006003, एस्चेरिचिया कोलाई एटीसीसी 25922 और साल्मोनेला टाइफिम्यूरियम जैसे नियंत्रण उपभेदों का उपयोग किया जा सकता है। पहले दो को सकारात्मक परिणाम और अंतिम दो नकारात्मक परिणाम देने चाहिए।

स्रोत: कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।

संदर्भ

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