हिस्टोकेमिस्ट्री: तर्क, प्रसंस्करण, धुंधला - जीवविज्ञान - 2025

Histochemical ऐसे कार्बोहाइड्रेट, लिपिड और प्रोटीन, दूसरों के बीच, रासायनिक रंगों के रूप में ऊतक घटकों के अपने प्रतिक्रिया सिद्धांत के कारण विभिन्न जैविक ऊतकों (पौधों और जानवरों) की आकृति विज्ञान के अध्ययन में एक उपयोगी उपकरण है।

यह मूल्यवान उपकरण न केवल ऊतकों और कोशिकाओं की संरचना और संरचना की पहचान करने की अनुमति देता है, बल्कि उनमें होने वाली विभिन्न प्रतिक्रियाएं भी। इसी तरह, सूक्ष्मजीवों या अन्य विकृति की उपस्थिति के कारण संभव ऊतक क्षति का सबूत दिया जा सकता है।

हिस्टोकेमिकल दाग। नील वायरस, ग्राम पॉजिटिव और ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया (ग्राम), हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलटम (ग्राकोट), माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस (ज़ीहल नील्सन)। स्रोत: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / डॉ। जॉर्ज पी। कुबिका

पिछली शताब्दियों से हिस्टोकेमिस्ट्री ने महत्वपूर्ण योगदान प्रदान किया है, जैसे पॉल एहर्लिच द्वारा रक्त-मस्तिष्क बाधा के अस्तित्व का प्रदर्शन। यह संभव था क्योंकि एरलिच द्वारा इस्तेमाल किए गए प्रायोगिक जानवर के मस्तिष्क को एनिलिन के साथ दाग नहीं दिया गया था, जो कि एक मूल डाई है।

इससे विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं को दागने के लिए विभिन्न रंगों जैसे कि मेथिलीन ब्लू और इंडोफेनॉल का उपयोग किया गया। इस खोज से उनके विशिष्ट धुंधलापन के अनुसार, एसिडोफिलिक, बेसोफिलिक और न्यूट्रोफिलिक में कोशिकाओं का वर्गीकरण हुआ।

हाल के अध्ययनों ने इस तकनीक को फिनोल सहित विभिन्न यौगिकों, साथ ही कार्बोहाइड्रेट और गैर-संरचनात्मक लिपिड की उपस्थिति दिखाने के लिए लागू किया है, जिसे लिटेसिया ग्लोसेंसेंस प्रजातियों के ऊतकों में, लॉरेल के रूप में जाना जाता है। इन दोनों को खोजने, पत्ती में और लकड़ी में।

इसी तरह, Colares et al, 2016 ने औषधीय रुचि वाले टरनाया ट्रॉस्लेरियाना के पौधे की पहचान की, जिसमें हिस्टोकेमिकल तकनीकों का उपयोग किया गया। इस प्रजाति में स्टार्च, मायोसीन, साथ ही फेनोलिक और लिपोफिलिक यौगिकों की उपस्थिति का सबूत दिया गया था।

आधार

हिस्टोकेमिस्ट्री ऊतकों में मौजूद सेलुलर संरचनाओं या अणुओं के धुंधला होने पर आधारित है, विशिष्ट रंगों के साथ उनकी आत्मीयता के लिए धन्यवाद। इन संरचनाओं या अणुओं के उनके मूल प्रारूप में रंगाई की प्रतिक्रिया, बाद में ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप या इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में कल्पना की जाती है।

धुंधला होने की विशिष्टता कोशिकाओं या ऊतक अणुओं में मौजूद आयन-स्वीकार समूहों की उपस्थिति के कारण है।

अंत में, हिस्टोकेमिकल प्रतिक्रियाओं का उद्देश्य धुंधला के माध्यम से इसे दिखाने में सक्षम होना है। सबसे बड़ी जैविक संरचनाओं से लेकर ऊतकों और कोशिकाओं के सबसे छोटे तक। यह इस तथ्य के लिए धन्यवाद प्राप्त किया जा सकता है कि रंजक ऊतकों, कोशिकाओं या ऑर्गेनेल के अणुओं के साथ रासायनिक रूप से प्रतिक्रिया करते हैं।

अभियोग

हिस्टोकेमिकल प्रतिक्रिया में तकनीक को निष्पादित करने से पहले कदम शामिल हो सकते हैं, जैसे कि ऊतक का निर्धारण, एम्बेड करना और काटना। इसलिए, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि इन चरणों में पहचाने जाने वाले ढांचे को नुकसान हो सकता है, झूठे नकारात्मक परिणामों की उपज, भले ही वह मौजूद हो।

इसके बावजूद, ठीक से किए गए ऊतक का पूर्व निर्धारण महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह ऑटोलिसिस या सेल विनाश को रोकता है। इसके लिए, रासायनिक प्रतिक्रियाओं का उपयोग कार्बनिक सॉल्वैंट्स जैसे कि: फॉर्मलाडेहाइड या ग्लूटाराल्डिहाइड के साथ किया जाता है।

कपड़े का समावेश इसलिए किया जाता है ताकि वह काटते समय अपनी दृढ़ता बनाए रखे और इस तरह उसे विकृत होने से बचाता है। अंत में, कट ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी द्वारा नमूनों के अध्ययन के लिए एक माइक्रोटेम के साथ बनाया गया है।

इसके अतिरिक्त, हिस्टोकेमिकल धुंधला के साथ आगे बढ़ने से पहले, परीक्षणों के प्रत्येक बैच में बाहरी या आंतरिक सकारात्मक नियंत्रणों को शामिल करने की सिफारिश की जाती है। साथ ही संरचनाओं का अध्ययन करने के लिए विशिष्ट रंजक का उपयोग किया जाता है।

हिस्टोकेमिकल दाग

हिस्टोकेमिकल तकनीकों के उद्भव से लेकर वर्तमान तक, दागों की एक विस्तृत श्रृंखला का उपयोग किया गया है, जिनमें सबसे अधिक बार उपयोग किया जाता है जैसे कि: आवधिक एसिड शिफ (पीएएस), ग्रोकोट, ज़ेहल-नीलसन और ग्राम।

इसी तरह, अन्य रंजक का उपयोग कम बार किया जाता है जैसे कि भारत स्याही, ऑर्सीन या मेसन के ट्राइक्रोम दाग, अन्य।

समय-समय पर एसिड शिफ (पीएएस)

इस रंगाई के साथ, उच्च कार्बोहाइड्रेट सामग्री वाले अणुओं को देखा जा सकता है, जैसे: ग्लाइकोजन और म्यूसिन। हालांकि, यह सूक्ष्मजीवों जैसे कि कवक और परजीवी की पहचान के लिए भी उपयोगी है। त्वचा और अन्य ऊतकों में कुछ संरचनाओं (तहखाने की झिल्ली) के अलावा।

इस धुंधला होने का आधार यह है कि डाई कार्बन के दो बांडों को पास के हाइड्रॉक्सिल समूहों के बीच ऑक्सीकरण करती है। यह एल्डिहाइड समूह के रिलीज का उत्पादन करता है, और यह शिफ के अभिकर्मक द्वारा पता लगाया जाता है, एक बैंगनी रंग को बंद कर देता है।

शिफ की अभिकर्मक बुनियादी फुकसिन, सोडियम मेटाबिसल्फाइट और हाइड्रोक्लोरिक एसिड से बना है, ये घटक बैंगनी रंग के लिए जिम्मेदार हैं, जब एल्डिहाइड समूह मौजूद हैं। अन्यथा एक बेरंग एसिड उत्पन्न होता है।

रंगाई की तीव्रता मोनोसेकेराइड में मौजूद हाइड्रॉक्सिल समूहों की मात्रा पर निर्भर करेगी। उदाहरण के लिए, कवक, तहखाने की झिल्ली, बलगम और ग्लाइकोजन में, रंग लाल से बैंगनी तक हो सकता है, जबकि नाभिक का रंग नीला होता है।

Grocott

यह पैराफिन-एम्बेडेड ऊतकों में कवक की पहचान में उच्चतम संवेदनशीलता के साथ दाग में से एक है। यह विभिन्न फंगल संरचनाओं की पहचान करने की अनुमति देता है: हाइपहे, बीजाणु, एंडोस्पोरेस, अन्य। इसलिए, यह माइकोसिस के निदान के लिए एक नियमित दाग माना जाता है।

यह विशेष रूप से फुफ्फुसीय मायकोसेस जैसे निमोसिस्टोसिस और एस्परगिलोसिस के निदान में उपयोग किया जाता है, जो क्रमशः जेनो न्यूमोसिस्टिस और एस्परगिलस के कुछ कवक के कारण होता है।

इस घोल में सिल्वर नाइट्रेट और क्रोमिक एसिड होता है, जो बाद में एक सुधारात्मक और रंगीन होता है। तर्क यह है कि यह एसिड कवक संरचनाओं में मौजूद म्यूकोपॉलीसेराइड्स द्वारा हाइड्रॉक्सिल समूहों के ऑक्सीकरण का निर्माण करता है, उदाहरण के लिए कवक की कोशिका भित्ति में।

अंत में, घोल में मौजूद चांदी को एल्डीहाइड्स द्वारा ऑक्सीकृत किया जाता है, जिससे एक काला रंग बनता है, जिसे एरेन्जाइफाइड प्रतिक्रिया कहा जाता है। कॉन्ट्रास्ट डाइज़ जैसे कि हल्के हरे रंग का भी इस्तेमाल किया जा सकता है और इस तरह फंगल स्ट्रक्चर्स को हल्के हरे रंग की पृष्ठभूमि के साथ काले रंग में मनाया जाएगा।

Ziehl-नील्सन

यह धुंधला एसिड-अल्कोहल प्रतिरोध की आंशिक रूप से या पूरी तरह से, कुछ सूक्ष्मजीवों जैसे कि नोकार्डिया, लेगियोनेला और माइकोबैक्टीरियम जेन की उपस्थिति पर आधारित है।

इस दाग के उपयोग की सिफारिश की जाती है, क्योंकि पहले उल्लिखित सूक्ष्मजीवों की कोशिका भित्ति में जटिल लिपिड होते हैं जो रंजक के प्रवेश में बाधा डालते हैं। विशेष रूप से श्वसन पथ से नमूनों में।

इसमें, कार्बोल फुकसिन (मूल रंगरहित) जैसे मजबूत रंगों का उपयोग किया जाता है और गर्मी लागू की जाती है ताकि सूक्ष्मजीव रंगकर्मी को बनाए रख सके और यह एसिड और अल्कोहल के साथ संपर्क नहीं करता है। अंत में, एक मैथिलीन नीला घोल उन संरचनाओं को रंगने के लिए लगाया जाता है, जो फीकी पड़ गई हैं।

एसिड-अल्कोहल प्रतिरोध की उपस्थिति लाल रंग के दाग वाली संरचनाओं में देखी जाती है, जबकि ऐसी संरचनाएं जो लुप्त होती का विरोध नहीं करती हैं, वे नीले रंग की हैं।

ग्राम और चीनी स्याही

बैक्टीरिया और फंगल संक्रमण के निदान में ग्राम एक बहुत उपयोगी दाग ​​है। यह धुंधला ग्राम सकारात्मक और ग्राम नकारात्मक सूक्ष्मजीवों के बीच अंतर करने की अनुमति देता है, स्पष्ट रूप से कोशिका दीवार की संरचना में मौजूद मतभेदों को दर्शाता है।

जबकि भारत स्याही एक ऐसा दाग है जिसका उपयोग ऐसी संरचनाओं के विपरीत किया जाता है जिनमें पॉलीसेकेराइड (कैप्सूल) होता है। ऐसा इसलिए है क्योंकि Cryptococcus neoformans में संभव होने के नाते, एक अंगूठी पर्यावरण में बनती है।

Orcein

इस धुंधला के साथ, विभिन्न कोशिकाओं के लोचदार फाइबर और गुणसूत्र रंगीन होते हैं, जिससे उत्तरार्द्ध की परिपक्वता प्रक्रिया का मूल्यांकन होता है। इस कारण से, यह साइटोजेनेटिक अध्ययनों में बहुत उपयोगी रहा है।

यह डीएनए के अणुओं के ऋणात्मक आवेश द्वारा डाई के उत्थान पर आधारित है, जो विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के नाभिक में मौजूद है। तो ये नीले से गहरे बैंगनी रंग के होते हैं।

मस्सों का त्रिचक्र

इस दाग का उपयोग कुछ सूक्ष्मजीवों या सामग्रियों की पहचान करने के लिए किया जाता है जिनमें मेलेनिक वर्णक होते हैं। यह मायकोसेस का मामला है, जो डीमैटीयोसियस कवक, फीयोफोमाइकोसिस और काले अनाज यूमाइसेटोमा के कारण होता है।

अंतिम विचार

हाल के वर्षों में नई नैदानिक ​​तकनीकों के निर्माण में कई प्रगति हुई हैं, जहां हिस्टोकेमिस्ट्री शामिल है लेकिन अन्य मूल सिद्धांतों या सिद्धांतों से जुड़ी हुई है। इन तकनीकों का एक अलग उद्देश्य है, जैसा कि इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री या एंजाइमोहिस्टोकेमिस्ट्री के मामले में है।

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