लोवेनस्टीन-जेनसेन माध्यम: नींव, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

Löwenstein-जेन्सेन मध्यम अलगाव और इस तरह के माइकोबैक्टीरियम क्षयरोग, एम अवियम, दूसरों के बीच के रूप में जीनस माइकोबैक्टीरियम के बैक्टीरिया, के विकास के लिए एक चयनात्मक ठोस माध्यम, लेप्री प्रजातियों में से अपवाद है, जो कृष्य नहीं है के साथ है।

जीनस माइकोबैक्टीरियम के बैक्टीरिया पारंपरिक संस्कृति मीडिया में नहीं बढ़ते हैं, इसलिए उनके अलगाव के लिए एक विशेष माध्यम डिजाइन करना आवश्यक था। मूल माध्यम लोवेनस्टीन द्वारा बनाया गया था और बाद में जेन्सेन द्वारा संशोधित किया गया था।

मायकेबैक्टेरियम ट्यूबरकुलोसिस की कॉलोनियों के साथ लोवेनस्टीन-जेन्सेन माध्यम। स्रोत: अग्रवाल एट अल / बायोमेड सेंट्रल लिमिटेड, बायोलॉजी इमेज लाइब्रेरी के सौजन्य से

संशोधन कांगो लाल डाई के उन्मूलन में शामिल है, इसे मैलाकाइट ग्रीन की उच्च एकाग्रता के साथ प्रतिस्थापित किया गया है। इसने मैग्नीशियम साइट्रेट और मोनोपोटेशियम फॉस्फेट की सांद्रता को भी बदल दिया।

लोवेनस्टीन-जेन्सेन माध्यम में वर्तमान में आलू का स्टार्च, शतावरी, मैग्नीशियम साइट्रेट, मोनोपोटेशियम फॉस्फेट, मैग्नीशियम सल्फेट, मैलाकाइट ग्रीन, नेलिडिक्लिक एसिड, साइक्लोहेसाइड, लिनकोमाइसिन, पीटा अंडे, ग्लिसरीन, और पानी शामिल हैं।

माइकोबैक्टीरिया सामान्य रूप से उन साइटों से अलग-थलग हैं जो बाँझ नहीं हैं, जैसे कि बलगम, मूत्र, फोड़े, अन्य। इसका मतलब यह है कि अधिकांश नमूनों में क्षेत्र के सामान्य माइक्रोबायोटा, प्लस रोगज़नक़ शामिल होंगे।

यही कारण है कि लोवेनस्टीन-जेन्सेन माध्यम में इसकी संरचना में अवरोधकों की एक श्रृंखला शामिल है, जो मैलाकाइट ग्रीन, एंटीबायोटिक्स और एंटीफंगल द्वारा दर्शाया गया है।

इसके अलावा, गैर-बाँझ साइटों से आने वाले नमूनों को लोवेनस्टीन-जेन्सेन माध्यम में बोने से पहले निर्बाध और बेअसर होना चाहिए।

आधार

लोवेनस्टीन-जेन्सेन माध्यम में अंडे और ग्लिसरीन की उपस्थिति माइकोबैक्टीरिया के विकास को उत्तेजित करती है क्योंकि वे इन सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए आवश्यक फैटी एसिड और प्रोटीन प्रदान करते हैं।

लोवेनस्टीन-जेन्सेन माध्यम में मैलाकाइट ग्रीन होता है, जो कि माइक्रोएबोटा के साथ एक अवरोधक है। लेकिन इसमें नेलेडिक्लिक एसिड (35 mg / mL) भी होता है, जो ग्राम नकारात्मक माइक्रोबायोटा, साइक्लोहेमेसाइड (400 /g / mL) को रोकता है, जो सैप्रोफाइटिक कवक और खमीर और लिनकोमाइसिन (2 µ / mL) को रोकता है, जो ग्राम सकारात्मक माइक्रोबायोटा को रोकता है।

कुछ वाणिज्यिक घर एंटीबायोटिक दवाओं के निम्नलिखित संयोजन को जोड़ना पसंद करते हैं: पॉलीमेक्सिन बी 200,000 यूनिट / एल, एम्फोटेरिसिन बी 10 मिलीग्राम / एल, कार्बेनिसिलिन 50 मिलीग्राम / एल और ट्राइमेथोप्रीम 10 मिलीग्राम / एल।

इस माध्यम में अगर नहीं होता है, इसलिए नसबंदी के दौरान अंडे में मौजूद एल्बुमिन के जमाव के कारण माध्यम का जमना होता है।

तैयारी

600 मिलीलीटर आसुत जल में निर्जलित माध्यम का 37.3 ग्राम वजन जो पहले ग्लिसरॉल के 12 मिलीलीटर जोड़ा गया है। मिश्रण को गरम किया जाता है, पूरी तरह से भंग होने तक अक्सर सरगर्मी। 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर मध्यम आटोक्लेव।

दूसरी ओर, ताजा अंडे के 1000 मिलीलीटर के सजातीय निलंबन को सड़न रोकनेवाला परिस्थितियों में तैयार किया जाना चाहिए। हवा के बुलबुले से बचने के लिए 50 - 60 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर तैयार किए गए माध्यम के 600 मिलीलीटर में अंडे का निलंबन जोड़ें।

आटोक्लेव में नसबंदी के बाद एंटीबायोटिक समाधान भी जोड़ा जाता है।

बाँझ पेंच-कैप्ड टेस्ट ट्यूब में मध्यम डालो। एक झुकाव स्थिति में 45 मिनट के लिए 85 डिग्री सेल्सियस पर ट्यूबों को गर्म करें।

तैयार माध्यम का रंग एक्वामरीन हरा होता है और अंडे की लिपिड की उपस्थिति के कारण सफेद धब्बे हो सकता है।

माध्यम का पीएच 7.2। 0.2 होना चाहिए

एक फ्रिज में ट्यूबों को स्टोर करें और उपयोग करने तक सीधी रोशनी से सुरक्षित रखें। बुवाई से पहले तापमान।

माध्यम का एक संशोधन है जिसे "लोवेनस्टीन जेन्सेन का ग्रुफ्ट संशोधन" कहा जाता है। इसमें क्लासिक माध्यम के समान यौगिक होते हैं लेकिन RNA-5mg / 100 mL मिलाया जाता है, और अवरोधकों के रूप में इसमें मैलाकाइट हरा 0.025 ग्राम / 100 एमएल, पेनिसिलिन 50 यू / एमएल और नेलेडिक्लिक एसिड 35 / एमएल होता है।

अनुप्रयोग

लोवेनस्टीन-जेनसेन माध्यम का उपयोग विभिन्न प्रकार के नमूनों से माइकोबैक्टीरिया के अलगाव के लिए किया जाता है। किसी भी नमूने के लिए ज़ीहल-नीलसेन दाग की सिफारिश की जाती है जिसमें मायकोबैक्टीरिया की उपस्थिति का संदेह होता है।

कुछ नमूने बाँझ साइटों से आते हैं लेकिन अन्य नहीं होते हैं। गैर-बाँझ नमूनों को उचित रूप में अलग किया जाना चाहिए:

थूक

थूक के नमूनों को निम्नानुसार निर्घारित किया जाना चाहिए: मिलीलीटर में थूक के नमूने की मात्रा निर्धारित करें और नमूने में 4% NaOH की समान मात्रा जोड़ें और 37 ° C पर सेते हैं।

30 मिनट के भीतर मिश्रण को बार-बार हिलाएं। बाद में 30 मिनट के लिए 3000 RPM पर अपकेंद्रित्र।

एक फेनोलिक कीटाणुनाशक समाधान पर सतह पर तैरनेवाला त्यागें। बुवाई के लिए तलछट का उपयोग करें, लेकिन पहले पीएच को बेअसर होना चाहिए।

तलछट को बेअसर करने के लिए, फिनोल लाल संकेतक की उपस्थिति में 5% एच ₂ एसओ ₄ का उपयोग किया जाता है जब तक कि यह एक तटस्थ पीएच तक नहीं पहुंचता है जो एक सामन रंग का कारण बनता है।

गैस्ट्रिक लैवेज, ब्रोन्कियल लैवेज और ब्रोन्कियल एस्पिरेट

इस मामले में, नमूना को 30 मिनट के लिए 3000 RPM पर सेंट्रीफ्यूज किया जाना चाहिए। सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया जाता है और गोली का उपयोग किया जाता है। तलछट को नष्ट करने के लिए, 4% NaOH के 3 मिलीलीटर जोड़ें और आधे घंटे की अवधि के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर अक्सर हलचल करें।

फिर से अपकेंद्रित्र, सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया जाता है और गोली का उपयोग किया जाता है। थूक के नमूने में बताया गया उत्तरार्द्ध निष्प्रभावी होना चाहिए।

मूत्र

नमूना को 24 घंटे के लिए रेफ्रिजरेटर में व्यवस्थित करने की अनुमति दें। सतह पर तैरनेवाला अलग। शेष गोली को 3000 आरएमपी पर 30 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूग किया जाना चाहिए। फिर से सतह पर तैरनेवाला त्यागें और बाँझ शारीरिक समाधान के 3 मिलीलीटर के साथ गोली पुनर्गठन।

4% NaOH के 3 मिलीलीटर जोड़ें और पहले से वर्णित के रूप में परिशोधन और बेअसर करने के लिए आगे बढ़ें।

जलोदर द्रव, फुफ्फुस द्रव, मस्तिष्कमेरु द्रव

इस प्रकार के नमूने में इसे अपकेंद्रित किया जाता है और सतह पर तैरनेवाला छोड़ दिया जाता है। तलछट पर एक ग्राम प्रदर्शन करें या माइक्रोस्कोप के नीचे सीधे निरीक्षण करें; यदि बैक्टीरिया नहीं देखे जाते हैं, तो परिशोधन कदम आवश्यक नहीं है, न ही बेअसर करने वाला कदम है।

इस मामले में नमूना सीधे तलछट का उपयोग करके बोया जा सकता है। यदि बैक्टीरिया होते हैं, तो ऊपर वर्णित के अनुसार निर्बाध और बेअसर करने के लिए आगे बढ़ें।

बायोप्सी

इस प्रकार के नमूने के लिए, आसुत जल के 5 मिलीलीटर को 10 मिनट के लिए 1500 RPM पर बाद में अपकेंद्रित्र में जोड़ा जाना चाहिए। सतह पर तैरनेवाला त्यागें और 30 मिनट के लिए 3500 RPM पर गोली को पुनः अपकेंद्रित्र करें। संस्कृति के माध्यम से बोने के लिए तलछट का उपयोग करें।

स्वरयंत्र की सूजन

स्वाब को एक बाँझ ट्यूब में रखा जाना चाहिए जिसमें समान भाग आसुत जल और 4% NaOH हो। स्वाब को ट्यूब की दीवारों के खिलाफ दबाया जाना चाहिए ताकि नमूना तरल में पतला हो। अपकेंद्रित्र और तलछट का उपयोग करें। पहले से ही वर्णित तलछट को बेअसर करें।

बोया

Löwenstein-Jensen माध्यम की सतह पर नमूना के 0.5 मिलीलीटर जोड़कर टीका लगाया जाता है। पूरे माध्यम में नमूना वितरित करने के लिए ट्यूब घुमाएँ। प्लैटिनम हैंडल का उपयोग न करें।

स्टोनब्रिंक माध्यम वाली दूसरी ट्यूब को माइकोबैक्टीरियम बोविस और अन्य प्रजातियों को अलग करने के लिए बोया जा सकता है जो लोवेनस्टीन-जेन्सेन माध्यम पर नहीं बढ़ती हैं।

ऊष्मायन

Inoculated ट्यूब 37 डिग्री सेल्सियस पर एरोबिक रूप से ऊष्मायन कर रहे हैं, टोपी थोड़ा ढीला और लगभग 5 डिग्री पर झुका हुआ है और प्रकाश से सुरक्षित है। पर्यावरण को 5-10% कार्बन डाइऑक्साइड से समृद्ध किया जा सकता है। एक सप्ताह में दो बार संस्कृतियों की जांच करें जब तक कि कॉलोनियां दिखाई न दें।

जब नमूना अवशोषित हो गया है, तो कैप कड़ा हो गया है। अधिकतम ऊष्मायन समय 8 सप्ताह है, अगर इस समय के बाद कोई विकास नहीं होता है, तो इसे नकारात्मक के रूप में सूचित किया जाता है।

क्यूए

निम्नलिखित उपभेदों का उपयोग गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में किया जा सकता है:

माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस एटीसीसी 27294, माइकोबैक्टीरियम कंसासि एटीसीसी 12478, माइकोबैक्टीरियम एवियम एटीसीसी 19291, माइकोबैक्टीरियम बोविस एटीसीसी 19219, माइकोबैक्टीरियम फोर्टुइटम एटीसीसी 6841, एस्चेरिसिया कोली एटीसीसी 25922, स्ट्रेप्टोकोकोसिस, एक्टोपियोस्कोपिक कैंसर

एम। फोर्टिटम की वृद्धि अच्छी होनी चाहिए, जबकि पहले तीन प्रजातियों के लिए उत्कृष्ट विकास की उम्मीद की जाती है, जबकि एम। बोविस के लिए बहुत कम या कोई वृद्धि अपेक्षित नहीं है। इस बीच, जीनस माइकोबैक्टीरियम के अलावा अन्य प्रजातियों को पूरी तरह से रोकना चाहिए।

सीमाएं

तैयार किए गए माध्यम को प्रकाश से संरक्षित किया जाना चाहिए, लंबे समय तक प्रकाश के संपर्क में रहने से माध्यम हरे से नीले रंग में बदल जाता है, इस मामले में माध्यम का उपयोग नहीं किया जा सकता है। इसका कारण यह है कि मैलाकाइट ग्रीन प्रकाश संश्लेषक है।

मध्यम, जैसे कि इसमें अंडे होते हैं, आसानी से दूषित हो सकते हैं यदि इसे असमान रूप से संभाला नहीं जाता है। यह भंग हो सकता है अगर यह प्रोटियोलिटिक बैक्टीरिया से दूषित हो जाता है।

जीनस माइकोबैक्टीरियम के जीवाणुओं की खेती और हैंडलिंग के लिए योग्य कर्मियों की आवश्यकता होती है, जो जैव सुरक्षा उपायों के बारे में जानते हैं जिन्हें दूसरों को दूषित या दूषित होने से बचाने के लिए पालन करना चाहिए।

सोडियम क्लोराइड के गठन के कारण एचसीएल को बेअसर करने वाले कदम में इस्तेमाल नहीं किया जाना चाहिए, जो कोच के बेसिलस के लिए विषाक्त हो सकता है।

संसाधित नहीं होने पर नमूनों को प्रशीतित और प्रकाश से संरक्षित रखा जाना चाहिए।

संदर्भ

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4. "लोवेनस्टीन-जेनसेन माध्यम।" विकिपीडिया, एक निशुल्क विश्वकोश। 20 नवंबर 2018, 15:15 यूटीसी। 24 अप्रैल 2019, 18:34। wikipedia.org
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