बीजाणु धुंधला: औचित्य, तकनीक और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

बीजाणु धुंधला प्रतिरोध संरचनाओं जो जब प्रतिकूल परिस्थितियों में कुछ बैक्टीरियल पीढ़ी के रूप में रंग करने के लिए इस्तेमाल किया पद्धति है; ये संरचनाएं जीवित रहने के रूप में मेल खाती हैं।

ऐसे कई जेनेरा हैं जो बीजाणुओं का निर्माण करते हैं; हालाँकि, मुख्य बेसिलस और क्लोस्ट्रीडियम हैं। इन पीढ़ी को अधिक प्रासंगिक माना जाता है क्योंकि उनके पास मनुष्यों के लिए रोगजनक प्रजातियां हैं।

शेफ़र द्वारा बीजाणु धुंधला - फुल्टन या विर्ट्ज़-कॉंकलिन विधि। और Tambe (मूल अपलोडर), विकिमीडिया कॉमन्स से

प्रत्येक बेसिलस एक बीजाणु को जन्म दे सकता है। तैयारी को धुंधला करने के समय, बीजाणु को बैसिलस (एंडोस्पोर) के भीतर या इसके बाहर (एक्सोस्पोर) पाया जा सकता है। बैक्टीरिया के लिए पारंपरिक धुंधला तकनीकों के साथ - जैसे कि ग्राम दाग - बीजाणु बेरंग रहते हैं।

वर्तमान में, कई धुंधला विधियां हैं जो इसे रंगाने के लिए बीजाणु की मोटी संरचना को भेदने में सक्षम हैं। ये कार्यप्रणाली बहुत विविध हैं; इनमें डोर्नर तकनीक, मोलर स्टेन और शेफ़र - फुल्टन पद्धति शामिल है, जिसे विर्त्ज़-कोंक्लिन भी कहा जाता है।

उल्लिखित सभी तकनीकों में से, Shaffffer-Fulton कार्यप्रणाली सबसे अधिक व्यापक रूप से नियमित प्रयोगशालाओं में उपयोग की जाती है। इसका नाम दो माइक्रोबायोलॉजिस्टों के नाम पर रखा गया है, जिन्होंने 1930 में एलिसिया शेफ़र और मैकडॉनल्ड फुल्टन को बनाया था। हालांकि, 1900 के दशक के दो बैक्टीरियोलॉजिस्ट के बाद तकनीक को कभी-कभी विर्त्ज़-कॉंकलिन नाम दिया गया।

आधार

बीजाणु पारंपरिक दाग के साथ नहीं दागते हैं क्योंकि उनके पास बहुत मोटी दीवार होती है। बीजाणुओं की जटिल रचना अधिकांश colorants के प्रवेश को रोकती है।

यदि बीजाणु का बाहर से अध्ययन किया जाता है, तो निम्न परतें देखी जाती हैं: सबसे पहले, एक्सोस्पोरियम है, जो ग्लाइकोप्रोटीन द्वारा बनाई गई सबसे पतली और बाहरी परत है।

इसके बाद क्यूटिकल आता है, जो उच्च तापमान को प्रतिरोध प्रदान करता है, इसके बाद पेप्टिडोग्लाइकेन से बना कोर्टेक्स होता है। बाद में आधार की दीवार है जो प्रोटोप्लास्ट की रक्षा करती है।

बीजाणु एक निर्जलित संरचना है जिसमें 15% कैल्शियम और डिपिकोलिनिक एसिड होता है। इसलिए, अधिकांश बीजाणु धुंधला तकनीक गर्मी के आवेदन पर भरोसा करते हैं ताकि डाई मोटी संरचना में प्रवेश कर सके।

एक बार बीजाणु के दाग लग जाने के बाद, यह डाई को हटा नहीं सकता है। शेफ़र में - फुल्टन तकनीक, मैलाकाइट ग्रीन वनस्पति कोशिकाओं में प्रवेश करती है और, जब गर्मी लागू होती है, तो एन्डोस्पोर के साथ-साथ एक्सोस्पोर्स में भी प्रवेश करती है।

पानी से धोने से, वनस्पति कोशिका से डाई को हटा दिया जाता है। यह तब होता है क्योंकि मैलाकाइट ग्रीन डाई थोड़ी बुनियादी होती है, इसलिए यह वनस्पति कोशिका में कमजोर रूप से बंध जाती है।

इसके बजाय, यह बीजाणु से बाहर नहीं निकल सकता है और अंततः बैसिलस को सेफ्रेनिन के साथ उलट दिया जाता है। यह नींव बाकी तकनीकों के लिए मान्य है, जिसमें कुछ ऐसा ही होता है।

धुंधला तकनीकें

बीजाणु धुंधला हो जाने के लिए, अध्ययन किए जाने वाले संदिग्ध तनाव की एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त की जानी चाहिए।

24 घंटे के लिए संस्कृति को अत्यधिक तापमान के अधीन किया जाता है ताकि सूक्ष्मजीवों को फैलाने के लिए उत्तेजित किया जा सके। इसके लिए, संस्कृति को ओवन में 44 ° C पर या रेफ्रिजरेटर (8 ° C) में 24 या 48 घंटों के लिए रखा जा सकता है।

यदि उल्लिखित तापमान पर बहुत लंबे समय तक छोड़ दिया जाता है, तो केवल एक्सोस्पोर देखे जाएंगे, क्योंकि सभी एंडोस्पोर्स पहले से ही बेसिलस से बाहर निकल चुके होंगे।

समय के अंत में, बाँझ शारीरिक समाधान की कुछ बूंदों को एक साफ स्लाइड पर रखा जाना चाहिए। फिर संस्कृति का एक छोटा सा हिस्सा लिया जाता है और एक अच्छा प्रसार किया जाता है।

बाद में, इसे सूखने के लिए छोड़ दिया जाता है, गर्मी में तय किया जाता है और नीचे दी गई तकनीकों में से एक के साथ रंगाई की जाती है:

डॉर्नर तकनीक

1- डिस्टिल्ड वाटर में स्पोर्युलेटेड माइक्रोऑर्गेनिज्म का एक कंसंट्रेटेड सस्पेंशन टेस्ट ट्यूब में तैयार करें और फिल्टर्ड किन्नौं कार्बॉल फुकसिन की बराबर मात्रा मिलाएं।

2- ट्यूब को नहाने के पानी में 5 से 10 मिनट तक रखें।

3- एक साफ स्लाइड पर, 10% जलीय नाइग्रोसिन समाधान की एक बूंद के साथ पिछले निलंबन की एक बूंद को मिलाएं, उबला हुआ और फ़िल्टर किया गया।

4- कोमल गर्मी के साथ जल्दी से फैलाएं और सूखें।

5- 100X उद्देश्य (विसर्जन) के साथ परीक्षा।

बीजाणु दाग ​​लाल और जीवाणु कोशिकाएं गहरे भूरे रंग की पृष्ठभूमि के खिलाफ लगभग रंगहीन दिखाई देती हैं।

संशोधित डोर्नर तकनीक

1- स्पोर्युलेटेड माइक्रोऑर्गेनिज्म का एक सस्पेंशन स्लाइड पर फैलता है और हीट में तय होता है।

2- नमूने को एक फिल्टर पेपर स्ट्रिप से ढका जाता है, जिसमें कार्बोलिक फ्यूचिन जोड़ा जाता है। बंसेन बर्नर की लौ के साथ 5 से 7 मिनट के लिए colorant गरम किया जाता है जब तक वाष्प का विकास नहीं होता है। फिर कागज को हटा दिया जाता है।

3- तैयारी को पानी से धोया जाता है और फिर शोषक कागज के साथ सुखाया जाता है।

4- निगारोसिन या एक सुई को फैलाने के लिए दूसरी स्लाइड का उपयोग करके, स्मीयर को 10% निग्रोसिन की पतली फिल्म से ढकें।

बीजाणुओं और जीवाणुओं द्वारा लिया गया रंगांकन वही है जो पूर्व कला में वर्णित है।

शेफ़र - फुल्टन या विर्त्ज़-कॉंकलिन तकनीक

1- एक स्लाइड पर स्पोराइलेटेड सूक्ष्मजीव के निलंबन के साथ एक अच्छा स्मीयर बनाएं और गर्मी को ठीक करें।

2- स्लाइड को 5% मैलाकाइट ग्रीन जलीय घोल से ढकें (आप स्लाइड पर एक फिल्टर पेपर लगा सकते हैं)।

3- बापसेन बर्नर की आंच पर गर्म करें जिससे वाष्प निकल जाए और आंच को हटा दें। 6 से 10 मिनट के लिए ऑपरेशन दोहराएं। यदि प्रक्रिया के दौरान मैलाकाइट ग्रीन समाधान बहुत अधिक वाष्पित हो जाता है, तो अधिक जोड़ा जा सकता है।

4- फिल्टर पेपर निकालें (यदि स्थापित है) और पानी से धो लें।

5- 30 सेकंड के लिए 0.5% जलीय सफारी के साथ स्लाइड को कवर करें (तकनीक के कुछ वेरिएंट 0.1% जलीय सफारी का उपयोग करते हैं और इसे 3 मिनट के लिए छोड़ देते हैं)।

इस तकनीक के साथ, बीजाणु हरे और बेसिली लाल दिखाई देते हैं।

इसका नुकसान यह है कि युवा संस्कृतियों के एंडोस्पोर्स अच्छी तरह से दाग नहीं देते हैं, क्योंकि वे बेहद स्पष्ट या बेरंग दिखाई देते हैं। इससे बचने के लिए, 48 घंटे के ऊष्मायन की संस्कृतियों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

मोलर तकनीक

1- स्मीयर को 2 मिनट के लिए क्लोरोफॉर्म से ढक दें।

2- क्लोरोफॉर्म का त्याग करें।

3 - 5 मिनट के लिए 5% क्रोमिक एसिड के साथ कवर करें।

4- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं

5- शीट को कार्बोल फुकसिन-फेनिडाडा से ढक दिया जाता है और वाष्प के उत्सर्जन तक बन्सेन बर्नर की लौ के सामने आ जाता है; फिर इसे कुछ क्षणों के लिए लौ से निकाल दिया जाता है। 10 मिनट पूरा होने तक ऑपरेशन दोहराया जाता है।

6- पानी से धो लें।

7- डिसक्लोराइड करने के लिए अम्लीय इथेनॉल (हाइड्रोक्लोरिक अल्कोहल) का उपयोग करें। इसे 20 या 30 सेकंड के लिए छोड़ दिया जाता है।

8- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।

9- शीट को 5 मिनट के लिए मैथिलीन नीले रंग से ढंक कर कंट्रास्ट करें।

10- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।

11- इसे सूखने दें और नमूना को माइक्रोस्कोप में ले जाया जाए।

बीजाणु लाल और बेसिली नीले दिखाई देते हैं। वाष्पों में साँस नहीं लेना महत्वपूर्ण है, क्योंकि वे विषाक्त हैं और लंबे समय में कार्सिनोजेनिक हो सकते हैं।

गर्मी के बिना संशोधित मोलर तकनीक

2007 में हयामा और उनके सहयोगियों ने मोलर तकनीक का एक संशोधन बनाया। उन्होंने डाई को गर्म करने के चरण को समाप्त कर दिया और इसे हर 10 मिलीलीटर कार्बोक्ल फ्यूचिन-कार्बॉल के घोल में सर्फैक्टेंट टरजीटोल 7 की 2 बूंदें डालकर बदल दिया। वही परिणाम प्राप्त हुए।

अनुप्रयोग

बीजाणुओं की पहचान रोगज़नक़ की पहचान के लिए बहुत मूल्यवान और उपयोगी जानकारी प्रदान करती है, क्योंकि इसकी उपस्थिति, इसका आकार, बेसिलस के भीतर का स्थान और वनस्पति कोशिका को विकृत करने की क्षमता या नहीं, वे डेटा हैं जो प्रजातियों का मार्गदर्शन कर सकते हैं एक निश्चित शैली के भीतर शामिल।

इस संदर्भ में, यह कहने योग्य है कि बीजाणु गोल या अंडाकार हो सकते हैं, वे केंद्र में या एक पैरासेन्ट्रल, सबमिनल या टर्मिनल स्थिति में भी स्थित हो सकते हैं।

एंडोस्पोर्स और एक्सोस्पोर्स की आकृति और स्थिति का आरेख

उदाहरण

- क्लोस्ट्रीडियम डिफिसाइल एक टर्मिनल स्थिति में एक अंडाकार बीजाणु बनाता है जो बेसिलस को विकृत करता है।

- क्लोस्ट्रीडियम टर्शियम का बीजाणु अंडाकार होता है, जो बैसिलस को ख़राब नहीं करता है और टर्मिनल स्तर पर स्थित होता है।

- क्लोस्ट्रीडियम टेटानी का एंडोस्पोर टर्मिनल है और ड्रमस्ट की उपस्थिति को देखते हुए बेसिलस को ख़राब करता है।

- क्लोस्ट्रीडियम बोटुलिनम, सी। हिस्टोलिटिकम, सी। नोवी और सी। सेप्टिकम के बीजाणु गोल या अंडाकार सबटर्मिनल होते हैं और बैसिलस को ख़राब करते हैं।

- क्लोस्ट्रीडियम सॉर्डेली का एंडोस्पोर, केंद्रीय स्थिति में थोड़ी विकृति के साथ स्थित है।

कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। (5 वां संस्करण)। अर्जेंटीना, संपादकीय पानामेरिकाना एसए

संदर्भ

1. हयामा एम, ओना के, कोजाकाई टी, उम्मेदा एस, फुजिमोटो जे, ओटा एच, कावाकामी वाई। गर्मी लागू करने के बिना बैक्टीरिया के बीजाणु को धुंधला करने के लिए एक सरल तकनीक का प्रस्ताव - मोइल की विधि का सफल संशोधन। यूर जे मेड रेस 2007; 16 12 (8): 356-9।
2. विकिपीडिया योगदानकर्ता। मोलर दाग। विकिपीडिया, एक निशुल्क विश्वकोश। 3 नवंबर, 2018, 03:28 यूटीसी। पर उपलब्ध: en.wikipedia.org
3. पेरेज़ आर, जुआरेज़ एम, रोड्रिग्ज़ (2011)। माइक्रोबायोलॉजिकल तकनीक प्रयोगशाला मैनुअल। डिपार्टमेंट ऑफ बेसिक साइंसेज एकेडमी ऑफ माइक्रोबायोलॉजी। राष्ट्रीय पॉलिटेक्निक संस्थान।
4. "Endospore।" विकिपीडिया, एक निशुल्क विश्वकोश। 25 फरवरी 2018, 10:20 यूटीसी। 10 जनवरी 2019, 02:42: en.wikipedia.org
5. सिल्वा एल, सिल्वा सी, फर्नांडीज एन, ब्यूनो सी, टोरेस जे, रिको एम, मैकियास जे और सहयोगी। (2006)। एक्स्ट्रामादुरा के स्वायत्त समुदाय के श्रम कार्मिक। विशिष्ट एजेंडा वॉल्यूम IV। संपादकीय MAD। सेविले-स्पेन, पीपी 211-212।
6. सिल्वा एम, गार्सिया एम, कॉर्लेस जे, पोंस ई। (2006)। विशेषज्ञ प्रयोगशाला तकनीशियन, गैलिशियन हेल्थ सर्विस (SERGAS)। विशिष्ट विषय एजेंडा मात्रा 2. संपादकीय एमएडी। सेविले-स्पेन, पीपी 79-80।
7. कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। (5 वां संस्करण)। अर्जेंटीना, संपादकीय पानामेरिकाना एसए
8. फोर्ब्स बी, साहम डी, वीसफेल्ड ए। 2009. बेली एंड स्कॉट माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 12 एड। अर्जेंटीना। संपादकीय पानामेरिकाना एसए