GIEMSA दाग: औचित्य, सामग्री, तकनीक और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

Giemsa दाग नैदानिक नमूने रंग, एसिड और बुनियादी रंगों के मिश्रण के आधार पर का एक प्रकार है। इसका निर्माण रोमनोवस्की द्वारा किए गए काम से प्रेरित था, जहां मूल रूप से जर्मनी के एक रसायनज्ञ और जीवाणुविज्ञानी गुस्ताव गेमेसा ने यौगिकों को स्थिर करने के लिए ग्लिसरॉल जोड़कर इसे पूरा किया था।

मूल रोमानोव्स्की तकनीक से उत्पन्न परिवर्तनों को सूक्ष्म टिप्पणियों में काफी सुधार करने की अनुमति दी गई थी, इसलिए तकनीक को गिएमेसा दाग के नाम से बपतिस्मा दिया गया था।

विभिन्न नमूने Giemsa दाग के साथ दाग। ए परिधीय रक्त में ट्रिपैनोसोमा इवान्सी। B. सामान्य रक्त कोशिकाएं। परिधीय रक्त में सी। बोरेलिया दलेरी। डी। बर्किट की लिंफोमा।

क्योंकि यह प्रदर्शन करने के लिए एक सरल तकनीक है, अत्यधिक कार्यात्मक और किफायती है, वर्तमान में इसका उपयोग हेमेटोलॉजिकल स्मीयर, अस्थि मज्जा के नमूनों और ऊतक वर्गों के लिए नैदानिक ​​प्रयोगशाला में व्यापक रूप से किया जाता है।

Giemsa धुंधला तकनीक साइटोलॉजिकल अध्ययन के लिए बहुत उपयोगी है, क्योंकि यह विशिष्ट कोशिका संरचनाओं के अवलोकन की अनुमति देता है। यह तकनीक कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म, नाभिक, न्यूक्लियोली, रिक्तिका और कणिकाओं को दागती है, जो क्रोमेटिन के ठीक निशान को भी भेदने में सक्षम है।

इसके अलावा, नाभिक के आकार, आकार या रंग में महत्वपूर्ण परिवर्तन का पता लगाया जा सकता है, जहां नाभिक-साइटोप्लाज्म संबंध के नुकसान की कल्पना करना संभव है।

दूसरी ओर, यह अस्थि मज्जा और परिधीय रक्त में अपरिपक्व कोशिकाओं की पहचान करने की अनुमति देता है, जो ल्यूकेमिया जैसी गंभीर बीमारियों के निदान के लिए महत्वपूर्ण है। हेमोपारासाइट्स, अतिरिक्त और इंट्रासेल्युलर बैक्टीरिया, कवक, अन्य लोगों का पता लगाना भी संभव है।

साइटोजेनेटिक्स में इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, क्योंकि कोशिकाओं के माइटोसिस का अध्ययन करना संभव है।

बेसिन ऑफ़ गिम्समा धुंधला

रोमानोव्स्की-प्रकार के रंग क्रमशः मूल और एसिड संरचनाओं को प्राप्त करने के लिए, अम्लीय और मूल रंगों के बीच एक विपरीत का उपयोग करने पर आधारित हैं। जैसा कि देखा जा सकता है, बुनियादी संरचनाओं को दागने के लिए और इसके विपरीत एसिड रंजक का एक संबंध है।

उपयोग की जाने वाली मूल डाई मेथिलीन ब्लू और इसके ऑक्सीडाइज्ड डेरिवेटिव (एज़्योर ए और एज़्योर बी) है, जबकि एसिड डाई ईोसिन है।

कोशिकाओं की एसिड संरचना में न्यूक्लिक एसिड होते हैं, खंडित बेसोफिल्स के कणिकाओं, दूसरों के बीच में, इसलिए उन्हें मेथिलीन नीले रंग के साथ दाग दिया जाएगा।

इसी अर्थ में, कोशिकाओं की मूल संरचना हीमोग्लोबिन और कुछ कणिकाएं हैं जैसे कि खंडित ईोसिनोफिल्स में निहित हैं, दूसरों के बीच में; ये ईओसिन के साथ दागदार होंगे।

दूसरी ओर, इस तथ्य के कारण कि मेथिलीन ब्लू और एज़ुर को मेटाक्रोमैटिक कलरेंट होने की विशेषता है, वे पॉलीअन के भार के अनुसार विभिन्न संरचनाओं को एक चर ह्यू प्रदान कर सकते हैं।

यह है कि मूल और अम्ल रंजक का रणनीतिक संयोजन एसिड संरचनाओं के मामले में, हरे नीले, गहरे नीले, बकाइन और बैंगनी रंग के रंगों के माध्यम से चलना, प्रत्येक संरचना की जैव रासायनिक विशेषताओं के अनुसार, रंगों की एक विस्तृत स्पेक्ट्रम विकसित करने का प्रबंधन करता है।

जबकि ईओसिन द्वारा प्रदान किया जाने वाला रंग अधिक स्थिर है, लाल-नारंगी और सामन के बीच रंग पैदा करता है।

सामग्री

स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए सामग्री

स्टॉक सॉल्यूशन की तैयारी के लिए 600 मिलीग्राम चूर्ण गिमेसा दाग का वजन होता है, जिसमें 500 सीसी एसीटोन रहित मिथाइल अल्कोहल और 50 सीसी न्यूट्रल ग्लिसरीन होता है।

स्टॉक समाधान कैसे तैयार करें

एक मोर्टार में भारी गिमेसा पाउडर रखें। यदि गांठ हैं तो उन्हें छिड़काव करना चाहिए। बाद में मापा ग्लिसरीन की एक प्रशंसनीय राशि जोड़ें और बहुत अच्छी तरह से मिलाएं। प्राप्त मिश्रण को एक बहुत साफ एम्बर बोतल में डाला जाता है।

ग्लिसरीन के बाकी मोर्टार में रखा गया है। मोर्टार की दीवारों पर चिपक गया है और एक ही जार में डालना बाकी colorant को साफ करने के लिए फिर से मिलाएं।

बोतल को कैप किया जाता है और 2 घंटे के लिए 55 forC पर पानी के स्नान में रखा जाता है। हालांकि यह पानी के स्नान में है, धीरे-धीरे मिश्रण को हर आधे घंटे में हिलाएं।

बाद में, शराब को रखने के लिए मिश्रण को ठंडा करने की अनुमति दी जाती है। इससे पहले, शेष अल्कोहल को धोने के लिए मोर्टार में मापा अल्कोहल का एक हिस्सा रखा जाता है और फिर इसे बाकी अल्कोहल के साथ मिश्रण में मिलाया जाता है।

इस तैयारी को कम से कम 2 सप्ताह के लिए परिपक्व होने के लिए छोड़ दिया जाना चाहिए। स्टॉक समाधान के उपयोग किए गए हिस्से को फ़िल्टर किया जाना चाहिए।

तैयारी के संदूषण से बचने के लिए, उस हिस्से को स्थानांतरित करने की सिफारिश की जाती है जो ड्रॉपर के साथ एक छोटी एम्बर बोतल के निरंतर उपयोग में होगी। जब भी अभिकर्मक चलता है, तब तक फिर से भरें।

बफर समाधान तैयार करने के लिए सामग्री

दूसरी ओर, पीएच 7.2 पर एक बफर समाधान निम्नानुसार तैयार किया जाता है:

6.77 ग्राम सोडियम फॉस्फेट (निर्जल) (NaHPO ₄), 2.59 ग्राम पोटेशियम डाइहाइड्रोजेन फॉस्फेट (KH ₂ PO ₄) और आसुत जल का वजन 1000 cc तक होता है।

रंगकर्मी की अंतिम तैयारी

अंतिम धुंधला समाधान की तैयारी के लिए, फ़िल्टर किए गए स्टॉक समाधान के 2 मिलीलीटर को बफर समाधान के 6 मिलीलीटर के साथ मापा और मिलाया जाता है। मिश्रण को हिलाएं।

एक प्रासंगिक तथ्य जो ध्यान में रखा जाना चाहिए कि वाणिज्यिक कंपनी के आधार पर रंग तैयार करने की तकनीक बदल सकती है।

रंग प्रदर्शन करने के लिए आवश्यक अतिरिक्त सामग्री

वर्णित सामग्रियों के अलावा, आपके पास रंग पुलों, पानी के साथ टी-शर्ट या धुलाई के लिए बफर, ऑब्जेक्ट स्लाइड या ऑब्जेक्ट्स के लिए कवर होना चाहिए, रंग समय और सोख्ता पेपर या कुछ सामग्री को नियंत्रित करने के लिए एक स्टॉपवॉच जो सूखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है (धुंध या कपास)।

तकनीक

धुंधला होने की प्रक्रिया

1) धुंधला होने से पहले, नमूना का धब्बा साफ स्लाइड पर तैयार होना चाहिए।

नमूने रक्त, अस्थि मज्जा, ऊतकीय ऊतक अनुभाग या गर्भाशय-योनि के नमूने हो सकते हैं। यह अनुशंसा की जाती है कि स्प्रेड पतले हों और रंग भरने से पहले 1 या 2 घंटे सूखें।

2) एक रंग के पुल पर, उन सभी चादरों को रखें जिन्हें रंगीन होना है। आप हमेशा एक ही क्रम में काम करते हैं और प्रत्येक शीट अच्छी तरह से पहचानी जाती है।

3) स्मीयर पर 100% मिथाइल अल्कोहल (मेथनॉल) की कुछ बूंदें रखें और नमूने को ठीक करने और निर्जलीकरण करने के लिए इसे 3 से 5 मिनट तक कार्य करने दें।

4) शीट पर मौजूद मेथनॉल को त्यागें और हवा को सूखने दें।

5) एक बार सूखने के बाद, ड्रॉपर के साथ अंतिम धुंधला समाधान रखें जब तक कि पूरी शीट को कवर न किया जाए। 15 मिनट के लिए कार्य करने के लिए छोड़ दें। कुछ लेखक 25 मिनट तक सलाह देते हैं। यह बिजनेस हाउस पर निर्भर करता है।

6) दाग को हटा दें और आसुत जल के साथ या 7.2 बफर समाधान के साथ धब्बा को धो लें।

7) एक ब्लॉटिंग पेपर पर शीट को खुली हवा में सूखने दें, एक समर्थन की मदद से लंबवत व्यवस्थित।

8) दाग के किसी भी निशान को हटाने के लिए स्लाइड को पीछे की तरफ एक शराब झाड़ू या कपास झाड़ू से साफ करें।

उपयोगिताएँ

Giemsa धुंधला तकनीक का उपयोग विभिन्न क्षेत्रों में किया जाता है, जिनमें शामिल हैं: हेमटोलॉजी, मायकोलॉजी, बैक्टीरियोलॉजी, पैरासाइटोलॉजी, साइटोलॉजी और साइटोजेनेटिक्स।

रुधिर

यह इस दाग को दिया जाने वाला सबसे अधिक उपयोग है। इसके साथ, अस्थि मज्जा या परिधीय रक्त के नमूनों में मौजूद कोशिकाओं में से प्रत्येक को पहचाना जा सकता है। प्रत्येक श्रृंखला की संख्या का आकलन करने के साथ-साथ ल्यूकोसाइटोसिस या ल्यूकोपेनिया, थ्रोम्बोसाइटोपेनिया, आदि का पता लगाने में सक्षम है।

क्योंकि यह अपरिपक्व कोशिकाओं की पहचान करने में संवेदनशील है, यह तीव्र या पुरानी ल्यूकेमिया के निदान में प्रासंगिक है। एनीमिया का निदान करना भी संभव है, जैसे सिकल सेल एनीमिया, सिकल सेल, अन्य।

कवक विज्ञान

इस क्षेत्र में, ऊतक के नमूनों में हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलटम (इंट्रासेल्युलर डायोर्फिक कवक) की खोज के लिए इसका उपयोग आम है।

जीवाणुतत्व

Giemsa के साथ दागने वाले हेमटोलॉजिकल स्मीयरों में, उन रोगियों में बोरेलियस एसपी का पता लगाना संभव है जो समवर्ती बुखार नामक बीमारी के साथ उपस्थित होते हैं। बुखार के चरम पर लिए गए नमूनों में एरिथ्रोसाइट्स के बीच स्पिरोचेट्स प्रचुर मात्रा में हैं।

संक्रमित कोशिकाओं में रिकेट्सिया एसपी और क्लैमाइडिया ट्रैकोमैटिस जैसे इंट्रासेल्युलर बैक्टीरिया की कल्पना करना भी संभव है।

Parasitology

पैरासाइटोलॉजी के क्षेत्र में, गिम्सा धुंधला ने परजीवी रोगों जैसे कि मलेरिया, चगास रोग और लीशमैनियासिस का निदान करना संभव बना दिया है।

पहले दो में, प्लाज़मोडियम एसपी और ट्रिपैनोसोमा क्रेज़ी परजीवी क्रमशः संक्रमित रोगियों के परिधीय रक्त में देखे जा सकते हैं, वे रोग के चरण के आधार पर विभिन्न चरणों में पाए जा सकते हैं।

रक्त में परजीवियों की खोज में सुधार करने के लिए, मई-ग्रुनावल्ड दाग के साथ मिश्रित गिमेसा के दाग का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

इसी तरह, त्वचीय लीशमैनियासिस का निदान गिम्स-सना हुआ त्वचा बायोप्सी नमूनों का मूल्यांकन करके किया जा सकता है जहां परजीवी पाया जाता है।

कोशिका विज्ञान

Giemsa धुंधला का उपयोग एंडोकेरिकल नमूनों के साइटोलॉजिकल अध्ययन के लिए भी किया जाता है, हालांकि यह इस उद्देश्य के लिए सबसे अधिक बार उपयोग की जाने वाली तकनीक नहीं है।

लेकिन संसाधनों की कमी के मामलों में, इसका उपयोग किया जा सकता है, जो कि पापोनिकोलाउ तकनीक द्वारा और कम लागत पर पेश की गई समान कार्यक्षमता है। हालाँकि, इसके लिए परीक्षक की ओर से विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है।

सितोगेनिक क s

Giemsa धुंधला की एक प्रासंगिक विशेषता डीएनए की समृद्ध क्षेत्रों को एडीनिन और थाइमिन को दृढ़ता से बांधने की क्षमता है। यह संक्षेपण के विभिन्न राज्यों में कोशिका के समसूत्रण के दौरान डीएनए की कल्पना करने की अनुमति देता है।

ये अध्ययन क्रोमोसोम के विभिन्न क्षेत्रों के दोहराव, विलोपन या ट्रांसकोलेशन जैसे वर्णिक विपथन का पता लगाने के लिए आवश्यक हैं।

Giemsa दाग की प्रभावकारिता का अनुसंधान

कन्नोवा एट अल (2016), त्वचीय लीशमैनियासिस के निदान के लिए 3 धुंधला तकनीकों की तुलना में।

इसके लिए, उन्होंने प्रायोगिक पशु (मेसोक्रिसेटस ऑराटस) से प्राप्त नमूनों का इस्तेमाल किया, जो लीशमैनियास के साथ प्रयोगात्मक रूप से टीका लगाए गए थे।

लेखकों ने प्रदर्शित किया कि गिम्प्सा का दाग पैप-मार्ट® और गफ्नी के दाग से बेहतर था। इसलिए, उन्होंने त्वचीय लीशमैनियासिस के निदान के लिए गिमेसा दाग को आदर्श माना।

लेखकों द्वारा प्राप्त किए गए उत्कृष्ट परिणाम इस तथ्य के कारण हैं कि Giemsa मिश्रण बनाने वाले रंजक का संयोजन एक अनुकूल विपरीत बनाने के लिए आवश्यक शर्तों को प्रस्तुत करता है, जिससे amastigotes की संरचनाओं को स्पष्ट रूप से प्रतिष्ठित किया जा सकता है, दोनों इंट्रासेल्युलर और बाह्य रूप से।

अन्य तकनीकों (पैप-मार्ट® और गैफ़नी) ने भी ऐसा किया, लेकिन एक कमजोर तरीके से और इसलिए कल्पना करना अधिक कठिन है। यही कारण है कि लीफ़मैनियासिस के परजीवी निदान के लिए गिमेसा दाग की सिफारिश की जाती है।

इसी तरह, रामिरेज़ एट अल (1994) के एक अध्ययन ने क्लैमाइडिया ट्रैकोमैटिस की पहचान के लिए संयुग्मित स्मीयरों में गिमेसा और लेंड्रम के दाग की वैधता का मूल्यांकन किया।

लेखकों ने निर्धारित किया कि गिमेसा और लेडरम के दाग में समान विशिष्टता है, लेकिन गिमेसा अधिक संवेदनशील पाया गया।

यह बताता है कि क्यों वर्तमान में क्लैमाइडियल संक्रमण के निदान के लिए Giemsa दाग सबसे अधिक बार उपयोग किया जाता है, खासकर अगर कुछ संसाधन हैं।

स्रोत: PanReac एप्लीकेम ITW रीजेंट्स गिमासा का दाग। संस्करण 2: JMBJUL17 CEIVD10ES। Castellar del Vallés, स्पेन।

अच्छे धुंधला के लिए सिफारिशें

चादरों के सुखाने को तेज नहीं किया जाना चाहिए। समय की उचित मात्रा में इसे खुली हवा में सूखने की उम्मीद की जानी चाहिए। लगभग 2 घंटे।

सर्वोत्तम परिणामों के लिए तुरंत 2 घंटे बाद रंग।

स्मीयरों को ठीक करने और बेहतर दाग देने के लिए, नमूना को स्लाइड पर इस तरह से वितरित किया जाना चाहिए कि एक पतली और एक समान परत बनी रहे।

पसंदीदा रक्त नमूना केशिका है, क्योंकि धब्बा सीधे रक्त की बूंद से बनता है और इसलिए नमूना में कोई योजक नहीं होता है, जो सेलुलर संरचनाओं के रखरखाव का पक्षधर है।

हालांकि, अगर शिरापरक रक्त का उपयोग किया जाता है, तो ईडीटीए को एक थक्कारोधी के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए और हेपरिन नहीं, क्योंकि हेपरिन आमतौर पर कोशिकाओं को विकृत करता है।

Giemsa धुंधला में आम गलतियाँ

इस रंग के अभ्यास में गलतियाँ की जा सकती हैं। संरचनाओं की तानिका में अचानक बदलाव से उनका सबूत है।

बेहद नीला रंग

इसकी वजह यह हो सकती है:

• बहुत मोटा स्मीयर
• धुंधला समय से अधिक
• अपर्याप्त रूप से धोएं।
• तटस्थ (क्षारीय) पीएच से ऊपर अभिकर्मकों का उपयोग।

इन शर्तों के तहत निम्नलिखित संरचनाओं के रंग विकृत होते हैं, इस तरह से कि धुंधला साल्मन-गुलाबी के बजाय एरिथ्रोसाइट्स हरा दिखाई देगा, ईोसिनोफिल्स के दाने जो दाग वाले ईंट लाल होने चाहिए, भूरे या भूरे रंग के हो जाएंगे और इतने पर होंगे सामान्य स्वर में विचलन।

अत्यधिक गुलाबी रंग

इसकी वजह यह हो सकती है:

• अपर्याप्त धुंधला समय।
• लंबे समय तक या अत्यधिक धुलाई।
• खराब सुखाने।
• अत्यधिक अम्लीय अभिकर्मकों का उपयोग।

इस विशेष मामले में, सामान्य रूप से नीले रंग के धब्बे वाली संरचना लगभग दिखाई नहीं देगी, जबकि गुलाबी रंग के धब्बे वाली संरचना में अतिरंजित रंग होंगे।

उदाहरण: लाल रक्त कोशिकाएं चमकीले लाल या चमकीले नारंगी रंग की हो जाएंगी, परमाणु क्रोमैटिन हल्का गुलाबी दिखाई देगा, और ईोसिनोफिल कणिकाएं गहरे चमकीले लाल रंग को दाग देंगी।

स्मीयर में अवक्षेप की उपस्थिति

इसके कारण हो सकते हैं:

• गंदी या खराब धुली फिल्मों का इस्तेमाल करें।
• स्मीयर को अच्छी तरह से सूखने की अनुमति न दें।
• बहुत लंबे समय के लिए फिक्सिंग समाधान छोड़कर।
• धुंधला होने के अंत में अपर्याप्त धुलाई।
• अपर्याप्त निस्पंदन या इस्तेमाल किया जा रहा colorant का कोई निस्पंदन।

रूपात्मक कलाकृतियों की उपस्थिति

आकृति विज्ञान की कलाकृतियाँ स्मीयरों में दिखाई दे सकती हैं, जिससे उपस्थित संरचनाओं की कल्पना और व्याख्या करना मुश्किल हो जाता है। इसका कारण है:

• एंटीकोआगुलेंट का प्रकार, जैसे हेपरिन।
• गंदी, खराब या चिकना फिल्मों का उपयोग।

भंडारण मोड

तैयार होने के बाद, डाई को कमरे में तापमान (15 - 25 डिग्री सेल्सियस) पर रखा जाना चाहिए, ताकि डाई को वेग से रोका जा सके। इसे कसकर बंद एम्बर कंटेनर में संग्रहीत किया जाना चाहिए।

संदर्भ

1. कन्नोवा डी, ब्रिटो ई और सीमन्स एम। त्वचीय लीशमैनियासिस के निदान के लिए धुंधला तकनीकों का मूल्यांकन। सेलस। 2016; 20 (2): 24-29।
2. PanReac एप्लीकेम ITW रीजेंट। गिमासा का दाग। संस्करण 2: JMBJUL17 CEIVD10ES। Castellar del Vallés, स्पेन।
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