CLED AGAR: औचित्य, उपयोग और तैयारी - जीवविज्ञान - 2025

CLED अगर (Cystine-लैक्टोज-इलेक्ट्रोलाइट की कमी) एक ठोस कल्चर माध्यम अंतर, मूत्र पथ के संक्रमण के निदान के लिए प्रयोग किया जाता है। संस्कृति माध्यम की संरचना मूत्र रोगजनकों के अच्छे विकास के लिए डिज़ाइन की गई है और कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफवी) की मात्रा का ठहराव के लिए आदर्श है।

सीएलईडी संस्कृति माध्यम गैर-चयनात्मक है, क्योंकि ग्राम नकारात्मक और ग्राम सकारात्मक सूक्ष्मजीव इसमें विकसित हो सकते हैं। लेकिन यह कोई समस्या नहीं है, क्योंकि अधिकांश यूटीआई केवल एक प्रकार के सूक्ष्मजीव के कारण होते हैं।

सीएलईडी अगर

पॉलीमाइक्रोबियल संक्रमण के मामले में, 2 या 3 अलग-अलग बैक्टीरिया प्राप्त किए जा सकते हैं, लेकिन यह बहुत दुर्लभ है और ज्यादातर समय यह दूषित नमूने हैं।

ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया जो इस माध्यम में विकसित हो सकते हैं, वे हैं बेसिली जो एंटरोबैक्टीरियासी परिवार और अन्य एंटिक बेसिली से संबंधित हैं, यूरोपाथोजेन मूत्र के नमूनों में सबसे अधिक बार निम्न रूप से पृथक होते हैं: एस्चेरिचिया कोलाई, क्लेबसिएला निमोनिया, प्रोटीज मिराबिलिस, मॉर्गनला मोर्गनी। स्यूडोमोनास एरुगिनोसा, दूसरों के बीच में।

इसी तरह, ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया जो इस माध्यम में विकसित हो सकते हैं उनमें स्टैफिलोकोकस ऑरियस, स्टैफिलोकोकस सैप्रोफाइटिकस, एंटरोकोकस फेकलिस, स्ट्रेप्टोकोकस एगैलिसिया, कोरिनेबैक्टेरियम एसपी, लैक्टोबैसिलस एसपी और यहां तक ​​कि यीस्ट, जैसे कि कैंडल एल्ब्यूमिनस हैं।

हालांकि, माध्यम की रासायनिक संरचना के कारण, यह कुछ मांग जननांगों के रोगजनकों की वृद्धि की अनुमति नहीं देता है, जैसे कि निएसेरिया गोनोरिया, गार्डनेरेला वेजाइनलिस, अन्य।

CLED Agar Rationale

CLED कल्चर माध्यम में मीट एक्सट्रैक्ट, कैसिइन का अग्नाशय हाइड्रोलाइजेट और जिलेटिन का हाइड्रोलाइजेट एक ऊर्जा स्रोत के रूप में होता है। वे बिना बैक्टीरिया के विकास के लिए पोषक तत्व प्रदान करते हैं।

इसमें सिस्टीन भी शामिल है, एक अमीनो एसिड जो कोलीफॉर्म की वृद्धि की अनुमति देता है, उनके छोटे आकार से अलग।

इसी तरह, इसमें एक किण्वित कार्बोहाइड्रेट के रूप में लैक्टोज होता है, इस कारण से यह माध्यम अंतर है; गैर-लैक्टोज किण्वन से किण्वन बैक्टीरिया को भेद करने में सक्षम होना।

किण्वन करने वाले बैक्टीरिया अम्ल के उत्पादन से पीले रंग की कॉलोनियों को विकसित करने के लिए माध्यम के पीएच को बदलते हैं, जबकि गैर-किण्वन बैक्टीरिया माध्यम में परिवर्तन नहीं उत्पन्न करते हैं, इसलिए वे मूल अगर, हरे रंग का रंग लेते हैं।

पीएच संकेतक की उपस्थिति के लिए किण्वन प्रतिक्रिया का पता चला है, जो इस माध्यम में ब्रोमोथाइमोल नीला है।

दूसरी ओर, मध्यम की कम इलेक्ट्रोलाइट सांद्रता जीनस प्रोटीस के विशिष्ट आक्रामक विकास को रोकती है, जिसे स्वार्मिंग प्रभाव कहा जाता है। यह अन्य मीडिया पर एक लाभ उत्पन्न करता है, क्योंकि यह सीएफयू की गिनती की अनुमति देता है, जिसमें प्रोटीन जीन मौजूद है।

हालांकि, इलेक्ट्रोलाइट्स की कम सांद्रता जीनस शिगेला की कुछ प्रजातियों के विकास को रोकती है, अन्य मीडिया की तुलना में यह एक नुकसान है।

CLED agar (Bevis) के लिए तर्क

बेविस द्वारा बनाए गए इस माध्यम का एक संस्करण या संशोधन है, जिसने मूल संरचना में एसिड फुकसिन (एंड्रेड के संकेतक) को शामिल किया है। यह गैर-किण्वन बैक्टीरिया से किण्वन को अलग करने के लिए ब्रोमोथाइमॉल ब्लू के साथ मिलकर काम करता है।

पारंपरिक और संशोधित माध्यम के बीच का अंतर वह रंग है जो उपनिवेशों पर होता है। लैक्टोज-किण्वन बैक्टीरिया के मामले में, उपनिवेश लाल-नारंगी को गुलाबी या लाल प्रभामंडल के साथ बदल देते हैं, जबकि गैर-किण्वन वाले नीले-भूरे रंग के होते हैं।

अनुप्रयोग

CLED agar का उपयोग विशेष रूप से मूत्र के नमूनों के बीजारोपण के लिए किया जाता है। इस माध्यम का उपयोग विशेष रूप से यूरोपीय प्रयोगशालाओं में अक्सर होता है, जबकि अमेरिका में इसका उपयोग कम होता है।

नमूना संग्रह विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए कुछ मापदंडों को पूरा करना चाहिए, जिसमें शामिल हैं:

• सैंपलिंग से पहले एंटीबायोटिक न लें।
• अधिमानतः सुबह मूत्र पहली चीज लें, क्योंकि यह अधिक केंद्रित है, जब इनवेसिव विधियों द्वारा नमूना लेना संभव नहीं है।
• नमूना लेने से पहले जननांगों को अच्छी तरह से धो लें।
• पेशाब की पहली धारा को त्यागें और फिर कंटेनर को रखें।
• एक अच्छी तरह से लेबल बाँझ कंटेनर में 25 से 30 मिलीलीटर मूत्र एकत्र करें।
• बर्फ में घिरे प्रयोगशाला में तुरंत ले जाएं।
• इसे 2 घंटे के भीतर संसाधित किया जाना चाहिए या अधिकतम 24 घंटे के लिए 4 ° C पर प्रशीतित किया जाना चाहिए।

मूत्र के नमूनों को सीज़ करना

मूत्र का नमूना 1:50 पतला होना चाहिए।

कमजोर पड़ने के लिए, रोगी के मूत्र के 0.5 मिलीलीटर को रखें और बाँझ शारीरिक समाधान के 24.5 मिलीलीटर के साथ पतला करें।

CLED माध्यम पर एक drigalski स्पैटुला के साथ फैला हुआ मूत्र और सतह के 0.1 मिलीलीटर को मापें। कालोनियों की गिनती के लिए यह सबसे अच्छी बीजारोपण विधि है। इस कारण से इसका उपयोग मूत्र के नमूनों में किया जाता है, क्योंकि परिणाम CFU / ml में व्यक्त किए जाने चाहिए।

प्राप्त कालोनियों को निर्धारित करने के लिए, निम्नानुसार आगे बढ़ें: कॉलोनियों को प्लेट पर गिनें और 10 से गुणा करें और फिर 50 से। यह आपको पेशाब की CFU / ml की मात्रा प्रदान करता है।

व्याख्या

100,000 सीएफयू / एमएल से ऊपर मायने रखता है--मूत्र संक्रमण को इंगित करता है

1000 सीएफयू / एमएल से नीचे मायने रखता है- कोई संक्रमण नहीं

1000-10,000 सीएफयू / एमएल-के बीच मायने रखता है-संदिग्ध, संभव संदूषण, नमूना दोहराएं।

आईडी

CLED agar पर उगाई जाने वाली कालोनियों में एक ग्राम होना चाहिए और सूक्ष्मजीव की आकारिकी विशेषताओं के आधार पर, एक निश्चित उपसंस्कृति की जाती है।

उदाहरण के लिए, यदि यह एक ग्राम नकारात्मक बेसिलस है, तो इसे मैककॉन्की अगर पर बोया जाएगा, जहां किण्वन या लैक्टोज की नहीं, कोष्ठित किया जाता है। इसके अलावा, एक पोषक तत्व आगर ऑक्सीडेज टेस्ट करने के लिए जुड़ा हुआ है।

यदि ग्राम ग्राम पॉजिटिव कोसी का खुलासा करता है, तो इसे नमकीन मैनिटोल एगर और पोषक तत्वों की मात्रा पर उपसंस्कृत किया जा सकता है। उत्तरार्द्ध में, उत्प्रेरक परीक्षण किया जाता है। अंत में, यदि यीस्ट का अवलोकन किया जाता है, तो इसे साबुद्र अगार पर बोया जाएगा।

कई प्रयोगशालाएं सीएलएड माध्यम के उपयोग से बचती हैं और केवल यूरिन सैंपल लेने के लिए रक्त अगर, मैकोनीज और पोषक तत्व अगर का उपयोग करना पसंद करती हैं।

तैयारी

आसवित पानी के एक लीटर के साथ एक फ्लास्क में CLED अगर पाउडर का 36.2 ग्राम घोलें। 5 मिनट खड़े होने के बाद, फिर से तैयार की हुई अगर को गरम करें, 1 मिनट के लिए लगातार उबालने के लिए मिलाएं।

फिर आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर बाँझ। समय के अंत में, इसे आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और 45 डिग्री सेल्सियस के तापमान तक ठंडा होने दिया जाता है। इसके बाद, प्रत्येक बाँझ पेट्री डिश में 15-20 मिलीलीटर परोसा जाता है।

प्लेट सेवारत प्रक्रिया संदूषण से बचने के लिए एक लामिना का प्रवाह हुड के अंदर या बेंसन बर्नर के सामने किया जाना चाहिए।

परोसे गए प्लेटों को जमने के लिए छोड़ दिया जाता है, एक उल्टे रैक में व्यवस्थित किया जाता है और उपयोग होने तक एक रेफ्रिजरेटर (2-8 डिग्री सेल्सियस) में संग्रहीत किया जाता है।

तैयार माध्यम का अंतिम पीएच 7.3 prepared 0.2 होना चाहिए।

संदर्भ

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