लिआ (लाइसिन लोहा) अगर: नींव, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

अगर LIA (लाइसिन आयरन) एक जैव रासायनिक Enterobacteriaceae परिवार के बैक्टीरिया की पहचान करने के लिए इस्तेमाल परीक्षण है। इस माध्यम को फॉकवे फार्मूले के आधार पर एडवर्ड्स और मुरली द्वारा बनाया गया था।

मूल रूप से यह परीक्षण पेप्टोन, खमीर निकालने, ग्लूकोज, एल-लाइसिन, ब्रोमोकेरसोल बैंगनी और आसुत जल युक्त शोरबा था। एडवर्ड्स और मुरली ने अगर-अगर, फेरिक अमोनियम साइट्रेट और सोडियम थायोसल्फेट मिलाया।

लाइसिन डिकार्बोजाइलेशन के लिए सकारात्मक और नकारात्मक परीक्षण। स्रोत: लेखक एमएससी की फोटो और आरेख संपत्ति। मारिलेस गिल

परीक्षण में मूल रूप से एंजाइम लाइसिन डिकार्बोक्सिलेस की उपस्थिति का प्रदर्शन होता है, जो एमिनो एसिड एल-लाइसिन के कार्बोक्सिल समूह के साथ प्रतिक्रिया करने में सक्षम होता है। अमीनो एसिड का एक विघटन एंजाइम लाइसिन डेमिनमिनस की उपस्थिति के कारण भी हो सकता है।

इसके अतिरिक्त, माध्यम की संरचना हाइड्रोजन सल्फाइड के उत्पादन के लिए कुछ जीवाणु जनन की क्षमता को दिखाती है। अंत में, माध्यम में गैस की पीढ़ी या नहीं का निरीक्षण करना भी संभव है।

आधार

पेप्टोन और खमीर निकालने

अधिकांश संस्कृति मीडिया की तरह, Lysine Iron Agar में ऐसे घटक होते हैं जो बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक पोषक तत्वों का स्रोत प्रदान करते हैं। इन घटकों को पेप्टोन और खमीर निकालने द्वारा दर्शाया गया है।

शर्करा

इसी तरह, इस अगर में ग्लूकोज एक किण्वित कार्बोहाइड्रेट के रूप में होता है। एंटरोबैक्टीरिया परिवार में सभी बैक्टीरिया किण्वन ग्लूकोज के लिए जाने जाते हैं।

यह कदम महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह माध्यम को अम्लीकृत करने के लिए जिम्मेदार होगा, एंजाइम सब्सट्रेट के लिए एक आवश्यक शर्त डिकारबॉक्सेलेज़ -इफ वर्तमान- इसके सब्सट्रेट पर कार्य करने के लिए।

कुछ बैक्टीरियल जेनेरा में, ग्लूकोज किण्वन के कारण गैस उत्पादन देखा जा सकता है।

जब ट्यूब में अगर का विस्थापन होता है, तो उसके नीचे एक खाली जगह छोड़कर या माध्यम को दो या अधिक भागों में विभाजित करके गैस का सबूत दिया जाता है।

एल लाइसिन

एक बार लाइसिन डीकार्बाक्सिलेटेड होने के बाद, एक डायमाइन (कैडेवरिन) और कार्बन डाइऑक्साइड बनता है।

Decarboxylation कोएंजाइम पाइरिडोक्सल फॉस्फेट की उपस्थिति में होता है। यह प्रतिक्रिया अपरिवर्तनीय है।

PH संकेतक (ब्रोमोकेरसोल बैंगनी)

विभिन्न प्रतिक्रियाओं द्वारा माध्यम में होने वाले सभी पीएच परिवर्तनों का पता बैंगनी ब्रोमोकेरसोल पीएच संकेतक द्वारा लगाया जाता है।

इस अर्थ में, जब अम्लीकरण होता है तो माध्यम पीला हो जाता है, और जब क्षारीकरण होता है तो माध्यम मूल बैंगनी या बैंगनी रंग में लौटता है।

जब लाइसिन डिएमिनेज़ एंजाइम की उपस्थिति के कारण लाइसिन डिमिनेशन होता है, तो सतह पर एक लाल रंग बनता है, जो सामान्य प्रोटीन, प्रोविडेंसिया और कुछ मॉर्गनेल्ला प्रजातियों में विशिष्ट है।

यह इस तथ्य के कारण है कि डिस्मिनेशन प्रक्रिया के दौरान अल्फा-कीटो-कार्बोनिक एसिड बनता है, जो ऑक्सीजन की उपस्थिति में अमोनियम साइट्रेट के साथ प्रतिक्रिया करता है, जो उपरोक्त रंग का कारण बनता है।

फेरिक अमोनियम साइट्रेट और सोडियम थायोसल्फेट

दूसरी ओर, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन करने वाले बैक्टीरिया सोडियम थायोसल्फेट (सल्फर के स्रोत) और फेरिक अमोनियम साइट्रेट की उपस्थिति से निकाले जाएंगे, जो एच ₂ एस के डेवलपर हैं ।

जिन बैक्टीरिया में एंजाइम थायोसल्फेट रिडक्टेस होता है, उनमें मौजूद सोडियम थायोसल्फेट को कम करके सल्फाइट और हाइड्रोजन सल्फाइड (H ₂ S) बनाने की क्षमता होती है ।

उत्तरार्द्ध एक रंगहीन गैस है, लेकिन लोहे के नमक के साथ प्रतिक्रिया करने पर यह लौह धातु सल्फाइड बनाता है, जो एक अघुलनशील यौगिक (दृश्यमान काला अवक्षेप) है।

हालांकि, इस माध्यम के साथ एच ₂ एस बनाने की क्षमता बहुत विश्वसनीय नहीं है, क्योंकि एच ₂ एस का उत्पादन करने में सक्षम कुछ लाइसिन डिकार्बोक्साइलेज़ नकारात्मक बैक्टीरिया काले वेग का निर्माण नहीं करेंगे, क्योंकि मध्यम की अम्लता हस्तक्षेप करती है। इसलिए, अन्य मीडिया के साथ जांच करने की सिफारिश की जाती है जिसमें लोहा होता है।

परीक्षण की व्याख्या

लाइसिन डिकार्बोसाइलेशन

ऊष्मायन के 24 घंटों के बाद ट्यूबों को पढ़ा जाना चाहिए, अन्यथा प्रतिक्रिया की गलत व्याख्या करने, गलत नकारात्मक रिपोर्ट करने का जोखिम है।

यह याद रखना चाहिए कि पहली प्रतिक्रिया जो ग्लूकोज का किण्वन होगी, इसलिए 10 से 12 घंटे के बाद सभी नलिकाएं पीले हो जाएंगे।

यदि ऊष्मायन समय (24 घंटे) के अंत में बैंगनी या बैंगनी सतह के साथ एक पीले रंग की पृष्ठभूमि देखी जाती है, तो प्रतिक्रिया नकारात्मक है। सतह का बैंगनी रंग पेप्टोन के उपयोग द्वारा माध्यम के क्षारीकरण से मेल खाता है।

एक सकारात्मक प्रतिक्रिया वह है जहां ट्यूब के नीचे और सतह पूरी तरह से बैंगनी होते हैं, अर्थात, यह मूल रंग में लौटता है।

इसलिए, जो परीक्षण की सकारात्मकता को निर्धारित करता है वह माध्यम का आधार या पृष्ठभूमि है। यदि रंग के बारे में संदेह है, तो इसकी तुलना एक गैर-टीकाकृत एलआईए ट्यूब से की जा सकती है।

लाइसिन का वमन

एक ट्यूब जो लाइसिन डिमिनेशन को दिखाती है, उसमें एक लाल रंग की मैरून सतह और एक पीली (एसिड) पृष्ठभूमि या पूरी ट्यूब लाल रंग की मैरून होगी।

इस प्रतिक्रिया को लाइसिन डिकार्बोजाइलेशन के लिए नकारात्मक के रूप में व्याख्या की जाती है, लेकिन लाइसिन डीमिनेशन के लिए सकारात्मक है।

यह प्रतिक्रिया बेजल पर परिभाषित और व्याख्या की गई है।

हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन (एच

माध्यम के सभी या भाग में एक काले अवक्षेप के रूप में एक सकारात्मक प्रतिक्रिया देखी जाती है। आमतौर पर बेवेल और बेस के किनारे के बीच।

यदि वेग पूरे ट्यूब में होता है, तो यह बीच में होने वाली अन्य प्रतिक्रियाओं को प्रकट नहीं करेगा।

परिणामों का रिकॉर्ड

परीक्षण की व्याख्या करते समय परिणाम निम्नानुसार दर्ज किए जाते हैं:

पहले बेवल पढ़ा जाता है, फिर नीचे या ब्लॉक, फिर एच ₂ एस का उत्पादन, और अंत में गैस का उत्पादन।

उदाहरण: के / ए + (-)। इसका मतलब है की:

• K: क्षारीय बेजल (बैंगनी रंग)
• ए: अम्लीय पृष्ठभूमि (पीला), अर्थात् नकारात्मक डिकार्बोलाइजेशन प्रतिक्रिया और नकारात्मक विचलन।
• +: हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन
• (-): गैस के बिना।

तैयारी

निर्जलित लौह अगर लिसीन के 35 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में इसे भंग कर दें।

जब तक अगर पूरी तरह से घुल न जाए तब तक गरम करें, ऐसा करने के लिए इसे एक मिनट के लिए उबलने दें, अक्सर हिलाते रहें। कपास की टोपी के साथ 13/100 परीक्षण ट्यूबों में मध्यम के 4 मिलीलीटर वितरित करें।

15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ। आटोक्लेव से निकालें और एक कोण पर खड़े होने की अनुमति दें ताकि एक गहरा आधार और एक छोटा बेवेल हो।

एक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें 2-8 डिग्री सेल्सियस। बैक्टीरियल स्ट्रेन बोने से पहले इसे गर्म होने दें।

निर्जलित माध्यम का रंग बेज है और तैयार माध्यम लाल रंग का बैंगनी है।

तैयार माध्यम का अंतिम पीएच 6.7 pH 0.2 है

मध्यम पीएच 5.2 या उससे कम पर पीला हो जाता है, और पीएच 6.5 और इसके बाद के संस्करण पर बैंगनी है।

अनुप्रयोग

यह परीक्षण, अन्य जैव रासायनिक परीक्षणों के साथ, एंटरोबैक्टीरिया परिवार के बेसिली की पहचान के लिए किया जाता है।

मध्यम को सीधे लूप या सुई के साथ लगाया जाता है, एक या दो पंचर ट्यूब के नीचे किए जाते हैं, और फिर माध्यम की सतह को एक ज़िगज़ैग में रन किया जाता है।

एरोबायोसिस में 35-37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए सेते हैं। यदि आवश्यक हो, तो इसे अगले 24 घंटों के लिए इनक्यूबेट करने के लिए छोड़ दिया जाता है।

यह सैल्मोनेलस सपा से लैक्टोज-नकारात्मक सिट्रोबैक्टीरिया प्रजातियों को अलग करने के लिए मुख्य रूप से उपयोगी है।

स्रोत: कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।

संदर्भ

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