- आधार
- उपकरण
- एचपीएलसी प्रकार
- सामान्य चरण क्रोमैटोग्राफी
- रिवर्स चरण क्रोमैटोग्राफी
- आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी
- आकार अपवर्जन वर्णलेखन
- अनुप्रयोग
- संदर्भ
उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी एक वाद्य रासायनिक विश्लेषण में इस्तेमाल तकनीक है जो अलग मिश्रण, शुद्ध अनुमति और उसके घटकों यों रहे हैं, और आगे के अध्ययन है। इसे एचपीएलसी संक्षिप्त नाम से जाना जाता है, जिसे अंग्रेजी से लिया गया है: उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी।
इस प्रकार, जैसा कि इसके नाम से संकेत मिलता है, यह तरल पदार्थों में हेरफेर करके काम करता है। इनमें विश्लेषण या ब्याज के नमूने से बने मिश्रण और एक या अधिक सॉल्वैंट्स शामिल हैं जो मोबाइल चरण के रूप में कार्य करते हैं; वह है, जो सभी HPLC उपकरणों और स्तंभ के माध्यम से विश्लेषण को खींचता है।
एचपीएलसी उपकरण। स्रोत: Dqwyy
एचपीएलसी का व्यापक रूप से कई कंपनियों में गुणवत्ता विश्लेषण प्रयोगशालाओं द्वारा उपयोग किया जाता है; जैसे कि फार्मास्यूटिकल्स और भोजन। प्रश्न के विश्लेषक को नमूना तैयार करना होगा, मोबाइल चरण, तापमान और अन्य मापदंडों की जांच करना चाहिए, और स्वचालित रूप से इंजेक्शन करने के लिए उपकरण के लिए पहिया या हिंडोला के अंदर शीशियों को जगह देना चाहिए।
एचपीएलसी उपकरण एक कंप्यूटर के लिए युग्मित होता है जिसके माध्यम से उत्पन्न क्रोमैटोग्राम को देखा जा सकता है, साथ ही साथ विश्लेषण शुरू करना, मोबाइल चरण के प्रवाह को नियंत्रित करना, क्षालन के प्रकार (आइसोक्रेटिक या ग्रेडिएंट) की प्रोग्रामिंग करना और डिटेक्टरों को चालू करना (यूवी) -विस या मास स्पेक्ट्रोफोटोमीटर)।
आधार
पारंपरिक तरल क्रोमैटोग्राफी के विपरीत, जैसे कागज या सिलिका जेल भरा कॉलम क्रोमैटोग्राफी, एचपीएलसी तरल को स्थिर चरण को गीला करने के लिए गुरुत्वाकर्षण पर निर्भर नहीं करता है। इसके बजाय, यह उच्च दबाव पंपों के साथ काम करता है, जो अधिक तीव्रता के साथ स्तंभ के माध्यम से मोबाइल चरण या eluent को सिंचित करता है।
इस तरह, कॉलम के माध्यम से हर बार मोबाइल चरण डालना आवश्यक नहीं है, बल्कि सिस्टम इसे लगातार और उच्च प्रवाह दर के साथ करता है।
लेकिन इस तकनीक की दक्षता केवल इस विस्तार के कारण नहीं है, बल्कि छोटे भराव कणों के लिए भी है जो स्थिर चरण बनाते हैं। छोटा होने के नाते, मोबाइल चरण के साथ इसका संपर्क क्षेत्र अधिक है, इसलिए यह विश्लेषण के साथ बेहतर डिग्री के लिए बातचीत करेगा और इसके अणु अधिक अलग होंगे।
इन दो विशेषताओं, प्लस तथ्य यह है कि तकनीक डिटेक्टरों के युग्मन की अनुमति देती है, एचपीएलसी को पतली परत या पेपर क्रोमैटोग्राफी से बेहतर बनाती है। पृथक्करण अधिक कुशल हैं, मोबाइल चरण स्थिर चरण के माध्यम से बेहतर यात्रा करता है, और क्रोमैटोग्राम विश्लेषण में किसी भी विफलता का पता लगा सकते हैं।
उपकरण
एचपीएलसी उपकरण के संचालन का सरलीकृत आरेख। स्रोत: गेब्रियल बोलिवर
ऊपर एक सरलीकृत आरेख है कि कैसे एक एचपीएलसी उपकरण काम करता है। सॉल्वैंट्स उनके संबंधित कंटेनरों में हैं, होज़ के साथ व्यवस्थित किए जाते हैं ताकि पंप उन्हें उपकरण में थोड़ी मात्रा में ले जाए; इस प्रकार हमारे पास मोबाइल चरण है।
मोबाइल चरण या eluent को पहले नीचा दिखाना चाहिए, ताकि बुलबुले विश्लेषण अणुओं के पृथक्करण को प्रभावित न करें, जो उपकरण के इंजेक्शन बनाने के बाद मोबाइल चरण के साथ मिश्रण करता है।
क्रोमैटोग्राफिक कॉलम एक ओवन के अंदर स्थित होता है जो तापमान को विनियमित करने की अनुमति देता है। इस प्रकार, विभिन्न नमूनों के लिए उच्च प्रदर्शन विभाजनों को प्राप्त करने के लिए पर्याप्त तापमान होते हैं, साथ ही विशिष्ट विश्लेषण के लिए स्तंभों और प्रकारों के एक विस्तृत सूची या स्थिर चरण होते हैं।
विघटित विश्लेषण वाला मोबाइल चरण स्तंभ में प्रवेश करता है, और इससे अणु जो स्थिर चरण के लिए पहले "कम" महसूस करते हैं, जबकि बाद में इसे अधिक बनाए रखते हैं। प्रत्येक eluted अणु क्रोमैटोग्राम पर प्रदर्शित एक संकेत उत्पन्न करता है, जहां अलग-अलग अणुओं के प्रतिधारण समय मनाया जाता है।
और दूसरी ओर, डिटेक्टर के माध्यम से गुजरने के बाद मोबाइल चरण एक बेकार कंटेनर में समाप्त होता है।
एचपीएलसी प्रकार
कई प्रकार के एचपीएलसी हैं, लेकिन उन सभी में से सबसे उत्कृष्ट निम्नलिखित चार हैं।
सामान्य चरण क्रोमैटोग्राफी
सामान्य चरण क्रोमैटोग्राफी से तात्पर्य उस स्थान से है जहां स्थिर चरण प्रकृति में ध्रुवीय है, जबकि मोबाइल चरण नॉनपोलर है। हालाँकि इसे सामान्य कहा जाता है, वास्तव में इसका सबसे कम उपयोग किया जाता है, क्योंकि रिवर्स चरण सबसे व्यापक और कुशल है।
रिवर्स चरण क्रोमैटोग्राफी
उलटा चरण होने के नाते, अब स्थिर चरण एपोलर है और मोबाइल चरण ध्रुवीय है। यह जैव रासायनिक विश्लेषण में विशेष रूप से उपयोगी है, क्योंकि कई बायोमोलेक्यूल्स पानी में और ध्रुवीय सॉल्वैंट्स में बेहतर रूप से भंग होते हैं।
आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी
इस प्रकार की क्रोमैटोग्राफी में, विश्लेषण, एक सकारात्मक या नकारात्मक चार्ज के साथ, कॉलम के माध्यम से चलता है, आयनों को प्रतिस्थापित करता है। उच्चतर आवेश, इसकी अवधारण जितनी अधिक होती है, यही वजह है कि इसे संक्रमण धातुओं के आयनिक परिसरों को अलग करने के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
आकार अपवर्जन वर्णलेखन
यह क्रोमैटोग्राफी, अलग करने के बजाय, परिणामस्वरूप मिश्रण को शुद्ध करने के प्रभारी है। जैसा कि इसके नाम से संकेत मिलता है, यह विश्लेषण अब इस आधार पर अलग नहीं किया जाता है कि यह स्थिर चरण से कितना संबंधित है, लेकिन इसके आकार और आणविक द्रव्यमान के अनुसार।
बड़े अणुओं की तुलना में छोटे अणुओं को अधिक बनाए रखा जाएगा, क्योंकि उत्तरार्द्ध पॉलिमेरिक कॉलम भराव के छिद्रों के बीच फंस नहीं रहे हैं।
अनुप्रयोग
एचपीएलसी गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण दोनों के लिए अनुमति देता है। गुणात्मक पक्ष पर, कुछ शर्तों के तहत क्रोमैटोग्राम प्रतिधारण समय की तुलना करके, एक विशेष परिसर की उपस्थिति का पता लगाया जा सकता है। इस तरह की उपस्थिति बीमारी, मिलावट या नशीली दवाओं के उपयोग का संकेत हो सकती है।
इसलिए, यह नैदानिक प्रयोगशालाओं का एक कंप्यूटर हिस्सा है। इसी तरह, यह दवा उद्योगों के भीतर पाया जाता है, क्योंकि यह उत्पाद की शुद्धता की जांच करने की अनुमति देता है, साथ ही साथ इसकी गुणवत्ता गैस्ट्रिक वातावरण में इसके विघटन के संबंध में भी है। प्रारंभिक सामग्री भी एचपीएलसी के अधीन हैं ताकि उन्हें शुद्ध किया जा सके और दवा संश्लेषण में बेहतर प्रदर्शन सुनिश्चित किया जा सके।
एचपीएलसी प्रोटीन, अमीनो एसिड, कार्बोहाइड्रेट, लिपिड, पोर्फिरिन, टेरानोइड्स के जटिल मिश्रण के विश्लेषण और अलगाव की अनुमति देता है, और पौधे के अर्क के साथ काम करने के लिए अनिवार्य रूप से एक उत्कृष्ट विकल्प है।
और अंत में, आणविक बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी आपको विभिन्न आकारों के पॉलिमर का चयन करने की अनुमति देती है, क्योंकि कुछ दूसरों की तुलना में छोटा या बड़ा हो सकता है। इस तरह, कम या उच्च औसत आणविक द्रव्यमान वाले उत्पाद प्राप्त किए जाते हैं, यह उनके गुणों और भविष्य के अनुप्रयोगों या संश्लेषण में एक निर्धारित कारक है।
संदर्भ
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