- आधार
- पेप्टोन, खमीर निकालने और ट्रिप्टिन
- व्याख्या
- गतिशीलता
- शर्करा
- एल ओर्निथिन
- व्याख्या
- PH संकेतक
- सीडिंग और विकासशील तकनीक
- तैयारी
- MIO माध्यम
- कोवाक्स रीजेंट (इंडोल टेस्ट डेवलपर)
- उपयोग
- क्यूए
- संदर्भ
MIO मध्यम एक जैव रासायनिक Enterobacteriaceae परिवार से संबंधित बैक्टीरिया की प्रजातियों की पहचान करने में सहायता करने के लिए इस्तेमाल परीक्षण है। यह काफी पौष्टिक है और ग्लूकोज, यीस्ट एक्सट्रैक्ट, पेप्टोन, ट्रिप्टीन, एल-ऑर्निथिन हाइड्रोक्लोराइड, ब्रोमोकेरसोल पर्पल, और अगर से बना है।
इसके संक्षिप्त अर्थ (MIO) में उन प्रत्येक मापदंडों का वर्णन किया गया है जो इस माध्यम में देखे जा सकते हैं; गतिशीलता, इंडोल और ऑर्निथिन। फ्लैगेल्ला की उपस्थिति के कारण सूक्ष्मता को स्थानांतरित करने की क्षमता है। इस संपत्ति का अवलोकन करने के लिए, माध्यम की संगति को समेकित किया जाना चाहिए, इसलिए तैयारी में कम मात्रा होती है।
MIO माध्यम में परिणामों की व्याख्या की रूपरेखा। स्रोत: लेखक द्वारा तैयार एमएससी। मारिलेस गिल
इंडोल का उत्पादन एंजाइम ट्रिप्टोफैनस की उपस्थिति को दर्शाता है जो अमीनो एसिड ट्रिप्टोफैन पर कार्य करता है, जिससे इंडोल के उत्पादन को दृश्यमान बनाने के लिए एक खुलासा अभिकर्मक के उपयोग की आवश्यकता होती है।
अंत में, ओर्निथिन यह निर्धारित करता है कि क्या जीवाणु अमीनो एसिड को डीकार्बाक्सिलेट करने में सक्षम है, अर्थात, यदि इसमें एंजाइम ओरिनिथिन डिकार्बॉक्साइलेज है।
आधार
पेप्टोन, खमीर निकालने और ट्रिप्टिन
ये तत्व इस माध्यम की पोषण शक्ति में योगदान करते हैं। वे बैक्टीरिया के विकास के लिए पोषक तत्वों और आवश्यक अमीनो एसिड के स्रोत के रूप में काम करते हैं।
इसके अलावा, ट्रिप्टिन एंजाइम ट्रिप्टोफैनस की उपस्थिति को दर्शाने के लिए ट्रिप्टोफैन का एक स्रोत है, जो अनिद्रा, पाइरुविक एसिड, अमोनिया और ऊर्जा को छोड़ते हुए, क्षणिक विक्षोभ द्वारा ट्रिप्टोफैन को नीचा दिखाता है।
इंडोल रंगहीन है, इसलिए पी-डाइमिथाइलामिनोबेंज़ाल्डिहाइड के साथ एर्लिच या कोवाक्स के अभिकर्मक की पांच बूंदों को जोड़कर इसकी उपस्थिति का पता चलता है।
इस यौगिक का एल्डिहाइड समूह इण्डोल के साथ प्रतिक्रिया करता है, जिससे अगुआ की सतह पर एक फ्यूशिया-लाल, अंगूठी के आकार का उत्पाद बनता है।
रंग के किसी भी निशान को एक सकारात्मक परीक्षण माना जाना चाहिए। सबूत को तुरंत पढ़ा जाना चाहिए, क्योंकि समय के साथ रंग में गिरावट आती है।
इसके अलावा, इस परीक्षण का खुलासा किया जाना चाहिए, क्योंकि ओर्निथिन की गतिशीलता और डीकार्बाक्सिलेशन परिणाम नोट किए गए हैं।
व्याख्या
सकारात्मक परीक्षण: कोवाक्स अभिकर्मक की बूंदों को जोड़ने पर एक फ्यूशिया लाल रिंग का गठन।
नकारात्मक परीक्षण: कोई रिंग गठन नहीं।
गतिशीलता
यदि एक बादल माध्यम मनाया जाता है या प्रारंभिक टीकाकरण के चारों ओर एक मोटी वृद्धि रेखा का विस्तार होता है, तो बैक्टीरिया को स्थानांतरित करने की क्षमता स्पष्ट होगी।
एक नकारात्मक गतिशीलता परीक्षण का विकास की एक पतली रेखा को देखकर किया जाएगा, और इसके चारों ओर सब कुछ विकास के बिना होगा।
यह महत्वपूर्ण है कि इंडोल का पता चलने से पहले गतिशीलता को पढ़ा जाता है, क्योंकि अभिकर्मक बादलों के अलावा पूरे माध्यम में होता है।
मोबाइल में लेकिन धीमी गति से बढ़ने वाले बैक्टीरिया में इस माध्यम के साथ अपनी गतिशीलता को प्रदर्शित करना मुश्किल है। इस मामले में, अन्य परीक्षणों या विधियों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, जैसे कि मध्यम गतिशीलता या ड्रॉप पेंडिंग विधि।
शर्करा
ग्लूकोज किण्वित कार्बोहाइड्रेट है, जो ऊर्जा प्रदान करने के अलावा, पर्यावरण को अम्लीकृत करता है, जो कि अमीनो एसिड ऑर्निथिन के डिकार्बोजाइलेशन के लिए एक आवश्यक स्थिति है।
ग्लूकोज का किण्वन हमेशा होना चाहिए, इस सिद्धांत से शुरू होता है कि एंटरोबैक्टीरिया परिवार किण्वन ग्लूकोज से संबंधित सभी बैक्टीरिया।
एल ओर्निथिन
इस घटना में कि बैक्टीरिया एंजाइम ओर्निथिन डिकार्बोसिलेज़ का उत्पादन करता है, यह एक बार ग्लूकोज के किण्वन द्वारा अम्लीकृत होने के बाद कार्य कर सकता है।
एंजाइम ओर्निथिन डिकार्बोक्साइलेज़ एमिनो एसिड के कार्बोक्सिल समूह पर काम करता है जो पुट्रेसिन नामक एक एमाइन का उत्पादन करता है जो माध्यम को फिर से क्षारीय करता है।
इस परीक्षण को ऊष्मायन के 24 घंटों के बाद पढ़ा जाना चाहिए, क्योंकि यदि आप झूठी नकारात्मक के साथ परीक्षण को गलत तरीके से व्याख्या करने से पहले पढ़ने की कोशिश करते हैं।
यह याद रखना चाहिए कि होने वाली पहली प्रतिक्रिया ग्लूकोज का किण्वन है, इसलिए प्रारंभिक चरण में मध्यम पीला हो जाता है (पहले 10 से 12 घंटे)। यदि बाद में ओर्निथिन डिकार्बोसाइलेशन होता है, तो माध्यम बैंगनी हो जाएगा।
इंडोल का खुलासा करने से पहले ऑर्निथिन डिकार्बोलाइजेशन टेस्ट की व्याख्या करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि कोवाक्स की अभिकर्मक माध्यम के रंग को बदल देता है।
व्याख्या
नकारात्मक परीक्षण: एक पीले रंग के साथ या एक पीले रंग की पृष्ठभूमि के साथ मध्यम।
सकारात्मक परीक्षण: मध्यम पूरी तरह से बैंगनी।
PH संकेतक
इस मामले में, ब्रोमोकेरसोल बैंगनी का उपयोग किया जाता है; माध्यम में पीएच में परिवर्तन होने पर खुलासा करने का प्रभारी। अम्लीकरण होने पर, संकेतक पीला हो जाता है, और क्षारीकरण होने पर, यह बैंगनी हो जाता है।
सीडिंग और विकासशील तकनीक
MIO माध्यम को बोने के लिए, एक सीधी लूप या सुई का उपयोग किया जाता है और इसके साथ कॉलोनी के एक हिस्से का अध्ययन किया जाता है।
एक सीधी रेखा में MIO के बीच में एक गहरा पंचर बनाया जाता है। यह डबल पंचर करने के लिए उचित नहीं है, क्योंकि यह एक ही स्थान पर पंक्चर नहीं किए जाने पर गतिशीलता की झूठी छवि दे सकता है।
एरोबायोसिस में 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 से 48 घंटों के लिए सेते हैं। इस क्रम में परिणामों को देखें: गतिशीलता, ऑर्निथिन के डिकार्बोजाइलेशन और अंत में इंडोल को प्रकट करते हैं।
यह उचित रूप से मध्यम के 2 मिलीलीटर को हटाने के लिए सलाह दी जाती है, इसे एक बाँझ ट्यूब में स्थानांतरित करें और वहां इंडोल परीक्षण करें, ताकि अगर यह नकारात्मक हो, तो मूल ट्यूब के बाकी हिस्सों को फिर से प्रकट करने के लिए, आगे के 24 घंटों के लिए ऊष्मायन किया जा सकता है।
इंडोल का विकास निम्नानुसार किया जाता है: कोवाक्स की अभिकर्मक की 3 से 5 बूंदों को एमआईओ माध्यम में जोड़ा जाता है और सख्ती से हिलाया जाता है। यह देखा जाता है कि लाल-फुचिया रिंग दिखाई देती है या नहीं।
तैयारी
MIO माध्यम
MIO माध्यम का 31 ग्राम वजन करें और आसुत जल के एक लीटर में भंग करें।
मिश्रण को एक मिनट के लिए उबलने तक गर्म करें, जब तक कि अगरर पूरी तरह से भंग न हो जाए। कपास की टोपी के साथ 13/100 परीक्षण ट्यूबों में मध्यम के 4 मिलीलीटर वितरित करें।
15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में बाँझ। आटोक्लेव से निकालें और एक रैक में सीधे खड़े होने के लिए छोड़ दें, इस तरह से एक अर्ध-ठोस ब्लॉक बनता है।
एक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें 2-8 डिग्री सेल्सियस। बैक्टीरियल स्ट्रेन बोने से पहले इसे गर्म होने दें।
निर्जलित माध्यम का रंग बेज है और तैयार माध्यम का रंग थोड़ा ओपलेसेंट बैंगनी है।
तैयार माध्यम का अंतिम पीएच 6.5 pH 0.2 है
मध्यम अम्लीय पीएच में पीला हो जाता है और क्षारीय पीएच में बैंगनी होता है।
कोवाक्स रीजेंट (इंडोल टेस्ट डेवलपर)
यह अभिकर्मक इस प्रकार तैयार किया गया है:
150 मिलीलीटर अमाइल, आइसोमाइल या ब्यूटाइल अल्कोहल (तीनों में से कोई भी) मापा जाता है। इसमें 10 ग्राम पी-डाइमिथाइलिनोबेंज़ाल्डिहाइड घुल जाता है। बाद में 50 मिलीलीटर सांद्र हाइड्रोक्लोरिक एसिड धीरे-धीरे जोड़ा जाता है।
तैयार किया गया अभिकर्मक रंगहीन या हल्का पीला होता है। इसे एम्बर बोतल में रखा जाना चाहिए और रेफ्रिजरेटर में रखा जाना चाहिए। गहरे भूरे रंग का रंग इसके बिगड़ने को दर्शाता है।
इसके अलावा कोवाक्स अभिकर्मक को एर्लिच अभिकर्मक के लिए प्रतिस्थापित किया जा सकता है। उत्तरार्द्ध, अधिक संवेदनशील होने के कारण, बैक्टीरिया में इंडोल को प्रकट करना पसंद किया जाता है जो इसे मिनट मात्रा में उत्पन्न करता है, जैसे कि कुछ गैर-किण्वन ग्राम नकारात्मक छड़ और कुछ अवायवीय में।
उपयोग
यह माध्यम एक परीक्षण है जो एंटरोबैक्टीरिया परिवार से संबंधित बैक्टीरिया की पहचान के लिए जैव रासायनिक परीक्षणों की एक बैटरी का पूरक है।
ऑर्निथिन डिकार्बोसाइलेशन डेटा शिगेला सोनैनी को अलग करने के लिए कार्य करता है, जो कि सकारात्मक परीक्षण करता है, शिगेला बॉयडी, शिगेला फ्लेक्सनेरी और एस। पेचिश, जो नकारात्मक परीक्षण करता है।
यह जीनस क्लेबसिएला को भी विभेदित करता है, जो जीनस एंटरोबैक्टर से नकारात्मक परीक्षण करता है, जहां इसकी अधिकांश प्रजातियां सकारात्मक परीक्षण करती हैं।
स्रोत: कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।
क्यूए
हर बार MIO माध्यम का एक बैच तैयार किया जाता है, एक नियंत्रण परीक्षण किया जा सकता है। इसके लिए, ज्ञात या प्रमाणित उपभेदों का उपयोग माध्यम के व्यवहार का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है।
जिन उपभेदों का उपयोग किया जा सकता है उनमें एस्केरिचिया कोलाई, मॉर्गनेल्ला मॉर्गानी, क्लेबसिएला निमोनिया, एंटरोबैक्टीरिया एरोजेन और प्रोटीन मिराबिलिस हैं।
अपेक्षित परिणाम ई। कोलाई और एम। मोरगनी हैं। दान M: +, I: + और O: +।
क्लेबसिएला निमोनिया सभी नकारात्मक (एम: -, आई: -, ओ:-) है। प्रोटीज मिराबिलिस और एंटरोबैक्टर एरोजेन एम देते हैं: + I: - और O: +।
संदर्भ
- मैक फडदिन जे (2003)। नैदानिक महत्व के बैक्टीरिया की पहचान के लिए जैव रासायनिक परीक्षण। तीसरा संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना। ब्यूनस आयर्स। अर्जेंटीना।
- फोर्ब्स बी, साहम डी, वीसफेल्ड ए (2009)। बेली एंड स्कॉट माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 12 एड। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।
- कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।
- ब्रिटानिया प्रयोगशालाओं। MIO मेडियो 2015। पर उपलब्ध: britanialab.com
- बीडी प्रयोगशालाओं। BBL मोटेलिटी इंडोल ऑर्निथिन (MIO) मीडियम। 2007. पर उपलब्ध: bd.com
- वेलटेक लेबोरेटरीज। मीडियम MIO मोटिलिटी, इंडोल, ऑर्निथिन। 2010 में उपलब्ध है: andinamedica.com