- आधार
- अभिकर्मकों
- मूत्रवर्धक अभिकर्मक स्थिरता
- प्रक्रिया
- तकनीक
- अंशांकन वक्र
- दखल अंदाजी
- पदार्थ जो कि बायुरेट टेस्ट में हस्तक्षेप करते हैं
- वे पदार्थ जो बायुरेट टेस्ट में हस्तक्षेप नहीं करते हैं
- फायदा
- नुकसान
- अनुप्रयोग
- पैथोलॉजी जो वृद्धि या कमी के साथ होती है
- नैदानिक नमूने
- मूत्र प्रोटीन / मूत्र क्रिएटिनिन अनुपात सामान्य मूल्य
- गैर-नैदानिक नमूने
- संदर्भ
Biuret प्रोटीन दृढ़ संकल्प लंबी श्रृंखला और छोटी श्रृंखला के लिए इस्तेमाल किया एक अभिकर्मक है। यह विशेष रूप से विश्लेषणात्मक रसायन विज्ञान और मूत्रालय के क्षेत्र में उपयोग किया जाता है ताकि सीरम, प्लाज्मा और मूत्र में कुल प्रोटीन की एकाग्रता की जांच की जा सके।
कुछ पैथोलॉजी में प्रोटीन का मान बढ़ाया या घटाया जा सकता है। हाइपोप्रोटीनीमिया लक्षण आमतौर पर गुर्दे की बीमारी के रोगियों में, कुपोषित रोगियों में, और पुराने संक्रमण वाले रोगियों में होते हैं।
बायूरिट रिएक्शन पॉजिटिव बायुरेट टेस्ट में बनने वाले कॉम्प्लेक्स की रासायनिक संरचना। स्रोत: Yikrazuul / फ़्लिकर
जबकि हाइपरप्रोटीनेमिया कई मायलोमा, प्रणालीगत ल्यूपस एरिथेमेटोसस, बैक्टीरियल एंडोकार्डिटिस, बैक्टीरियल मेनिनजाइटिस, वाल्डेनस्ट्रॉम के मैक्रोग्लोबुलिनमिया जैसे विकृति में मनाया जाता है।
दूसरी ओर, मूत्र में प्रोटीन की उपस्थिति गुर्दे द्वारा एल्बुमिन के निस्पंदन के कारण होती है। यह रोगात्मक व्यवहार है जिसका अध्ययन किया जाना चाहिए।
इस अर्थ में, मूत्रवर्धक बहुत उपयोगी है, क्योंकि यह कई अन्य नमूनों में सीरम, प्लाज्मा, मूत्र में प्रोटीन की उपस्थिति को निर्धारित करने की अनुमति देता है।
यहां तक कि बायूरेट का उपयोग अज्ञात रचना के खराब नमूनों या नमूनों में प्रोटीन की उपस्थिति और एकाग्रता की जांच के लिए किया जा सकता है। इसलिए, अनुसंधान क्षेत्र में इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
बायुरेट टेस्ट पेप्टाइड बॉन्ड का पता लगाने पर आधारित है। परीक्षण एक क्षारीय माध्यम में होता है। नमूने में वायलेट-बैंगनी कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए कम से कम दो पेप्टाइड बॉन्ड होने चाहिए। कॉम्प्लेक्स बॉन्ड और कॉपर आयन के मिलन से बनता है।
आधार
Biuret की अभिकर्मक पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड, कप्रिक सल्फेट, और सोडियम और पोटेशियम टार्ट्रेट से बना है। सोडियम हाइड्रॉक्साइड का उपयोग माध्यम को क्षारीय करने के लिए किया जाता है, क्योंकि यह स्थिति प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक है।
प्रोटीन के साथ प्रतिक्रिया करने वाले पदार्थ कप सल्फेट होते हैं, जबकि सोडियम टारट्रेट में कॉपर हाइड्रॉक्साइड के गठन की अनुमति नहीं देने का कार्य होता है, जो प्रतिक्रिया के साथ वेग और हस्तक्षेप करता है।
यदि पेप्टाइड बांड (पॉलीपेप्टाइड्स या प्रोटीन) वाले पदार्थ नमूने में पाए जाते हैं, तो परीक्षण सकारात्मक होगा।
एक प्रतिक्रिया को सकारात्मक के रूप में व्याख्या की जाती है जब समाधान बैंगनी हो जाता है। रंग कम से कम दो पेप्टाइड बांडों के बीच एक कॉम्प्लेक्स के गठन से निर्मित होता है जिसमें सीओ-एनएच समूह और कप्रिकेशन होते हैं।
वायलेट कॉम्प्लेक्स को दो तरीकों से बनाया जा सकता है: एक एमाइड समूहों से प्रोटॉन के नुकसान से होता है जो धातु (डिप्रोनोटेशन) से बांधता है, और दूसरा ऑक्सीजन और नाइट्रोजन इलेक्ट्रॉनों के संघात से जो मुक्त और बाइंड होते हैं तांबे के साथ।
यह प्रतिक्रिया प्रोटीन के प्रकार के आधार पर तीव्रता और रंग में भिन्न हो सकती है।
परीक्षण गुणात्मक या मात्रात्मक रूप से किया जा सकता है। गुणात्मक रूप में इसे सकारात्मक या नकारात्मक के रूप में सूचित किया जाता है। जबकि मात्रात्मक रूप में एकाग्रता को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि द्वारा मापा जा सकता है।
प्रतिक्रिया 540-560 एनएम के बीच पढ़ी जाती है। रंग की तीव्रता सीधे नमूने में पेप्टाइड बांड की एकाग्रता के लिए आनुपातिक है।
अभिकर्मकों
-20% सोडियम हाइड्रोक्साइड (NaOH)
-सुपर सल्फेट पेंटाहाइड्रेट 1% (CuSO 4. 5H 2 O)
-मिश्रित सोडियम और पोटेशियम टारट्रेट टेट्राहाइड्रेट (KNaC 4 H 4 O 6 · 4H 2 O)
मूत्रवर्धक अभिकर्मक स्थिरता
-यह प्रशीतित रखा जाना चाहिए।
प्रक्रिया
तकनीक
परीक्षण ट्यूब में नमूना या मानक के 100 μl का विश्लेषण किया जाना है।
-सोडियम हाइड्रॉक्साइड की 2 मिली।
-मिक्स बहुत अच्छी तरह से।
-जैविक अभिकर्मक की 5 मिली।
-मिक्स और कमरे के तापमान पर 25 मिनट के लिए आराम करें, कवर करें और प्रकाश से बचाएं।
रंग के गठन या नहीं का निरीक्षण करें और स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापें।
अंशांकन वक्र
अंशांकन वक्र प्रदर्शन करने के लिए बोवाइन सीरम एल्बुमिन एक मानक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। इससे विभिन्न सांद्रण तैयार किए जाते हैं। उदाहरण के लिए 25, 50, 75, 100, 125 और 150%।
प्रतिक्रिया इन सभी ज्ञात सांद्रता के साथ स्थापित की गई है और अवशोषण 540 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर पढ़ा जाता है। ज्ञात सांद्रता के डेटा और अवशोषण रीडिंग के साथ अंशांकन वक्र बनाया जाता है।
संसाधित नमूनों के प्रत्येक निर्धारण या बैच में एक मानक को माउंट करने की सिफारिश की जाती है। बोवाइन सीरम एल्ब्यूमिन 0.1-2 मिलीग्राम / एमएल एक अंशांकन मानक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
540 एनएम पर एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पर माप किए जाते हैं।
रैखिकता 12 g / dl की सांद्रता से मिलती है।
दखल अंदाजी
पदार्थ जो कि बायुरेट टेस्ट में हस्तक्षेप करते हैं
हालांकि यह बहुत लगातार नहीं है, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इस परीक्षण के निष्पादन के दौरान कुछ पदार्थ हस्तक्षेप कर सकते हैं। उदाहरण के लिए, अमोनिया की उपस्थिति रंग गठन को रोक सकती है।
इसी तरह, अन्य पदार्थ उसी तरंग दैर्ध्य को अवशोषित कर सकते हैं, जैसे कि कुछ वर्णक।
दूसरी ओर, हस्तक्षेप उत्पन्न हो सकता है जब पेप्टाइड बॉन्ड के अलावा कोई पदार्थ कप नमक के साथ एक जटिल बनाता है। उदाहरण: कुछ कार्बोहाइड्रेट और कुछ लिपिड।
इस घटना में कि विश्लेषण किए जाने वाले नमूने को किसी प्रकार के उपजीवन में प्रस्तुत किया जाता है, इसे परीक्षण को बढ़ाने से पहले फ़िल्टर या सेंट्रीफ्यूग किया जाना चाहिए।
वे पदार्थ जो बायुरेट टेस्ट में हस्तक्षेप नहीं करते हैं
परीक्षण की उपस्थिति से प्रभावित नहीं है:
-बिलिरुबिन 20 मिलीग्राम / डीएल की एकाग्रता तक।
-हेमोग्लोबिन 750 मिलीग्राम / डीएल की एकाग्रता तक।
30 ग्राम / एल की एकाग्रता तक -Dextran।
-ट्राइग्लिसराइड्स 4000 मिलीग्राम / डीएल की एकाग्रता तक।
फायदा
यह निष्पादित करने के लिए एक सरल विधि है।
-यह एक आर्थिक परीक्षण है।
-इसमें प्रोटीन की उच्च विशिष्टता होती है।
-लगना हस्तक्षेप।
नुकसान
इसमें प्रोटीन की कम मात्रा का पता लगाने के लिए खराब संवेदनशीलता है। फ़्यूएंटेस एट अल द्वारा किए गए कार्य। पुष्टि करता है कि बायूरेट परीक्षण विधि में प्रोटीन की 1 मिलीग्राम / एमएल और 3 मिलीग्राम / एमएल की मात्रा का पता लगाने की सीमा है।
हालांकि, अमोनिया विश्वविद्यालय में किए गए अन्य शोध बहुत कम मूल्यों की रिपोर्ट करते हैं। अध्ययन द्वारा रिपोर्ट की गई पता लगाने की सीमा 0.020 mg / ml है और परिमाणीकरण सीमा 1.33 mg / ml है।
अनुप्रयोग
बायुरेट अभिकर्मक या परीक्षण का उपयोग नियमित और अनुसंधान प्रयोगशालाओं में नैदानिक और गैर-नैदानिक नमूनों में प्रोटीन के निर्धारण के लिए किया जाता है।
पैथोलॉजी जो वृद्धि या कमी के साथ होती है
कई पैथोलॉजी में नैदानिक नमूनों में कुल प्रोटीन की एकाग्रता को निर्धारित करना महत्वपूर्ण है, जो ऊंचा या घटाया जा सकता है।
वे इसमें उन्नत हैं:
-एकाधिक मायलोमा, -प्रणालीगत एक प्रकार का वृक्ष, बैक्टीरियल एंडोकार्डिटिस, -बैक्टीरियल मैनिंजाइटिस, वाल्डेनस्ट्रॉम के मैक्रोग्लोबुलिनमिया, दूसरों के बीच में।
इसमें कमी आई है:
-गुर्दो की खराबी, - कुपोषण के गंभीर डिग्री वाले लोग, -पेट के संक्रमण वाले मरीज, अन्य लोगों में।
नैदानिक नमूने
सबसे आम नैदानिक नमूने सीरम, प्लाज्मा और मूत्र हैं। सीरम या प्लाज्मा में प्रोटीन का सामान्य मूल्य 6.0-8.8 जीआर / डीएल है।
वयस्कों में मूत्र में प्रोटीन की एकाग्रता 150 मिलीग्राम / 24 घंटे के आंकड़े से अधिक नहीं होती है।
मूत्र प्रोटीन / मूत्र क्रिएटिनिन अनुपात सामान्य मूल्य
शिशुओं: <0.50 मिलीग्राम
बच्चे 2 वर्ष और उससे अधिक उम्र: सूचकांक: 0.20 मिलीग्राम
वयस्क: <0.2 मिलीग्राम
गैर-नैदानिक नमूने
कई प्रकार के गैर-नैदानिक नमूनों, जैसे कि डेयरी उत्पाद, एंटीवेनम, या किसी भी अज्ञात पदार्थ के लिए बायूरेट प्रतिक्रिया का उपयोग किया जा सकता है, जिसके लिए आप प्रोटीन की उपस्थिति की जांच करना चाहते हैं।
संदर्भ
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