फॉस्फेट बफर (PBS): औचित्य, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

फॉस्फेट बफर, फॉस्फेट खारा बफर या BPS एक बफर isotonic जिसका कार्य है करने के लिए पीएच और प्राकृतिक जैविक पर्यावरण (शारीरिक) के करीब के रूप में आसमाटिक दबाव बनाए रखें। परिचित पीबीएस फॉस्फेट बफर खारा के लिए खड़ा है।

PH और ऑस्मोलरिटी दो बहुत महत्वपूर्ण पहलू हैं जिन्हें कुछ प्रयोगशाला प्रोटोकॉल में नियंत्रित किया जाना चाहिए। पीएच के मामले में, यह आवश्यक है कि इसे नियंत्रित किया जाए, विशेष रूप से जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं में, क्योंकि ये अलग-अलग हो सकते हैं या नहीं किए जा सकते हैं यदि अभिकारक अनुचित पीएच में हैं।

पीबीएस फॉस्फेट दो अलग-अलग पीएच में खारा बफर करता है। स्रोत: Pixinio.com

जबकि, जीवित कोशिकाओं के साथ काम करते समय, परासरण का नियंत्रण आवश्यक है, क्योंकि कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली विलेय की सांद्रता के अनुसार प्रतिक्रिया करते हैं, जिसमें वे पाए जाते हैं।

यदि कोशिकाओं को एक हाइपरटोनिक माध्यम में स्थानांतरित किया जाता है, तो वे निर्जलित हो जाएंगे, क्योंकि पानी की ढाल को उस तरफ ले जाया जाएगा जहां विलेय की अधिक मात्रा होती है। यदि, दूसरी ओर, कोशिकाओं को एक हाइपोटोनिक माध्यम में रखा जाता है, तो कोशिकाएं तरल को अवशोषित कर लेंगी जब तक कि वे लाइसिन न हों।

यही कारण है कि पीबीएस बफर प्रयोगशाला प्रोटोकॉल के लिए उपयोग किया जाता है जो इन विट्रो में कोशिकाओं के रखरखाव की आवश्यकता होती है, इस तरह से कोशिकाओं को नुकसान नहीं होगा।

पीबीएस नमक के संयोजन से बना है, जैसे सोडियम क्लोराइड, सोडियम फॉस्फेट, पोटेशियम क्लोराइड और पोटेशियम फॉस्फेट। पीबीएस की संरचना प्रोटोकॉल के आधार पर भिन्न हो सकती है।

आधार

मूल रूप से फॉस्फेट बफर का कार्य शरीर के अंदर पाए जाने वाले इलेक्ट्रोलाइट एकाग्रता के साथ-साथ एक निरंतर शारीरिक पीएच को बनाए रखना है।

इस वातावरण में, कोशिकाएं स्थिर रहने में सक्षम होती हैं, क्योंकि शारीरिक स्थितियों को जितना संभव हो उतना अनुकरण किया जाता है।

यदि आवश्यक हो तो अन्य यौगिकों को मूल पीबीएस फॉर्मूलेशन में जोड़ा जा सकता है, उदाहरण के लिए बफर के लिए ईडीटीए के अतिरिक्त क्रॉस-असंगतता परीक्षण में लाल रक्त कोशिकाओं को धोने के लिए उपयोगी है।

EDTA सीरम में मौजूद C1 के पूरक के अंश को क्लीव होने से रोकता है और लाल रक्त कोशिकाओं को lysed करता है, अर्थात यह झूठे असंगत परिणामों से बचता है। इसके अलावा, EDTA कोशिकाओं को अलग करने में मदद करता है।

तैयारी

पीबीएस फॉस्फेट बफर खारा की तैयारी के लिए तौले जाने वाले लवण की मात्रा उस मात्रा पर निर्भर करेगी जिसकी आवश्यकता होनी चाहिए:

-फॉस्फेट बफर खारा स्टॉक समाधान (10X पीबीएस)

समाधान के एक लीटर के लिए:

तौलना:

NaCl का 80.6 ग्राम,

KCl का 2.2 g, 11.5 ग्राम Na ₂ HPO ₄, 2.0 ग्राम केएच ₂ एचपीओ ₄

तैयारी की तकनीक

भारी नमक को एक बीकर में रखें, पर्याप्त पानी (80%) डालें और जब तक लवण भंग न हो जाए तब तक चुंबकीय पट्टी के साथ सरगर्मी प्लेट पर मिलाएं।

चुंबकीय पट्टी के साथ सरगर्मी प्लेट का उपयोग करके पीबीएस की तैयारी। स्रोत: उपयोगकर्ता: Ruhrfisch, विकिपीडिया। कॉम

फ़िल्टर न किए गए कणों को हटाने के लिए। 0.45 माइक्रोन छिद्रों वाले फिल्टर का उपयोग करें। आटोक्लेव और ढक्कन के साथ कांच के जार में एक लामिना का प्रवाह हुड में असमान रूप से वितरित करें।

10X समाधान (केंद्रित) पीएच को समायोजित नहीं करता है। समायोजन 1X पीबीएस बफर एकाग्रता, (1:10 कमजोर पड़ने) के लिए एक बार पतला किया जाता है।

-बुफर फॉस्फेट खारा (1X पीबीएस)

1X पीबीएस सीधे तैयार किया जा सकता है, प्रत्येक नमक की इसी मात्रा का वजन, या यह बाँझ आसुत जल के साथ स्टॉक समाधान (1:10) को पतला करके तैयार किया जा सकता है।

1x पीबीएस फॉस्फेट बफर खारा के सीधे एक लीटर तैयार करने के लिए, वजन:

NaCl का 8.06 ग्राम, KCl का 0.22 ग्राम, न। ₂ एचपीओ ₄ का 1.15 ग्राम, केएच ₂ एचपीओ ₄ का 0.20 ग्राम

तैयारी की तकनीक

केंद्रित समाधान में आगे बढ़ें। इसके बाद, पीएच को समायोजित किया जाना चाहिए। ऐसा करने के लिए, पीएच को मापें और परिणाम के आधार पर एसिड (एचसीएल) या आधार (NaOH) का उपयोग पीएच को कम करने या क्रमशः बढ़ाने के लिए करें, जब तक कि यह 7.4 न हो।

पीएच मीटर का उपयोग करके समाधान के पीएच मान की निगरानी करते समय एसिड या बेस को ड्रॉप द्वारा जोड़ा जाता है। फ़िल्टर, आटोक्लेव, और aseptically जरूरत के अनुसार शंक्वाकार ट्यूब या जार में वितरित करें।

-10X स्टॉक समाधान से 1X पीबीएस तैयार करें:

एक 1:10 कमजोर पड़ने बनाओ। उदाहरण के लिए, 1X पीबीएस की 1 लीटर तैयार करने के लिए, स्टॉक समाधान के 100 मिलीलीटर को मापें और 700 मिलीलीटर बाँझ आसुत जल जोड़ें। पीएच को समायोजित करें और 1000 मिलीलीटर तक पानी की मात्रा भरें।

तैयार पीबीएस बफर रंगहीन और स्पष्ट है।

दैनिक पीबीएस को कमरे के तापमान और बाकी रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जा सकता है।

पीएच समायोजन के लिए समाधान

एचसीएल

1 मोलर एचसीएल (हाइड्रोक्लोरिक एसिड) के 100 मिलीलीटर के लिए।

आसुत जल के 91 एमएल को मापें और इसे 250 एमएल बीकर में रखें।

केंद्रित एचसीएल के 8.62 एमएल को मापें और धीरे-धीरे इसे बीकर युक्त पानी में मिलाएं (कभी भी इसे दूसरे तरीके से न करें)। मजबूत एसिड (अत्यधिक संक्षारक पदार्थ) को संभालते समय उचित जैव सुरक्षा उपाय करें।

ग्लास के अंदर एक चुंबकीय पट्टी के साथ सरगर्मी प्लेट का उपयोग करके 5 मिनट के लिए मिलाएं। 100 मिलीलीटर फ्लास्क में स्थानांतरण करें और आसुत एच ₂ ओ के साथ 100 मिलीलीटर तक करें ।

NaOH

100 मिलीलीटर NaOH (सोडियम हाइड्रॉक्साइड) के लिए 10 मोलर।

आसुत जल के 40 एमएल को मापें और इसे 250 एमएल बीकर में रखें। नाप के 40 ग्राम को मापें और पानी में जोड़ें। कांच के अंदर एक चुंबकीय पट्टी के साथ एक सरगर्मी प्लेट का उपयोग करके मिलाएं।

100 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरण करें और आसुत जल के साथ निशान तक करें। जैव सुरक्षा नियमों का अनुपालन, क्योंकि यह प्रतिक्रिया एक्सोथर्मिक है (यह ऊष्मा के रूप में ऊर्जा छोड़ती है)।

यदि आप फॉस्फेट खारा समाधान की अन्य मात्रा तैयार करना चाहते हैं, तो आप निम्न तालिका से परामर्श कर सकते हैं:

स्रोत: «वायरल और मानव जीनोमिक्स की प्रयोगशाला, यूएएसएलपी स्कूल ऑफ मेडिसिन»

अनुप्रयोग

यह मुख्य रूप से सेल बायोलॉजी, इम्यूनोलॉजी, इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री, बैक्टीरियोलॉजी, वायरोलॉजी, और अनुसंधान प्रयोगशालाओं में उपयोग किया जाता है।

यह अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस तकनीक में एक धोने के समाधान के रूप में, वायरस के लिए सेल संस्कृतियों के रखरखाव में, बैक्टीरियल बायोफिल्म्स की मात्रा का ठहराव में स्पेक्ट्रोस्कोपिक इलिप्सोमेट्री तकनीक में सेंट्रीफ्यूजेशन (लाल रक्त कोशिकाओं) द्वारा सेल धुलाई के लिए आदर्श है। और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के लक्षण वर्णन के लिए तकनीकों में।

इसका उपयोग कोशिकाओं या ऊतकों को परिवहन करने के लिए भी किया जाता है, सेल की गिनती के लिए एक मंदक के रूप में, सेलुलर एंजाइम (ट्रिप्सिन) की तैयारी, बायोमोलेक्यूल डिसीकेशन विधि के लिए मंदक के रूप में और अन्य अभिकर्मकों को तैयार करने के लिए।

दूसरी ओर, मार्टिन एट अल। 2006 में प्रदर्शित किया गया कि पीबीएस फोरेंसिक विज्ञान प्रयोगशालाओं में उपयोगी है, विशेष रूप से योनि स्मीयरों से शुक्राणु की वसूली में, या शिश्न के स्मीयरों से योनि कोशिकाओं की वसूली में। इस तरह से यह स्थापित किया जा सकता है अगर कोई यौन संबंध रहा हो।

सीमाएं

-सोम पीबीएस बफ़र्स में सोडियम एज़ाइड नामक पदार्थ एक संरक्षक के रूप में होता है। यदि यह सीसा या तांबे के संपर्क में आता है तो यह यौगिक विस्फोटक पदार्थ उत्पन्न कर सकता है। इस कारण से, नाली के नीचे इस अभिकर्मक का निपटान करते समय विशेष देखभाल की जानी चाहिए। यदि इसे इस तरह से छोड़ दिया जाता है, तो इसे अधिकतम करने के लिए प्रचुर मात्रा में पानी जोड़ा जाना चाहिए।

-पिंक को फॉस्फेट बफर में नहीं जोड़ा जाना चाहिए, क्योंकि यह कुछ लवणों को पैदा करता है।

-वंगेन और सहयोगियों ने 2018 में यह निर्धारित किया कि पीबीएस का उपयोग परिधीय रक्त से निकाले गए तीव्र मायलॉइड ल्यूकेमिया (एएमएल) की प्राथमिक कोशिकाओं को धोने के लिए उपयुक्त नहीं था, इस तथ्य के कारण कि कई कोशिकाएं लसीका द्वारा खो जाती हैं, सामग्री में भारी कमी के साथ। प्रोटीन।

इसलिए, उन्होंने निर्धारित किया कि तरल नाइट्रोजन में भंडारण के बाद प्राथमिक एएमएल कोशिकाओं को पीबीएस से धोया नहीं जाना चाहिए।

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