NEUBAUER कक्ष: इतिहास, विशेषताएँ, उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

Neubauer कक्ष, hematometer या hemocytometer, एक प्रयोगशाला एक विशेष मोटी कांच की प्लेट से मिलकर साधन है। इस कैमरे का उपयोग कुछ सेल प्रकारों जैसे लाल रक्त कोशिकाओं, श्वेत रक्त कोशिकाओं और प्लेटलेट्स की गणना करने के लिए किया जाता है, हालांकि इसका उपयोग बीजाणु, शुक्राणु, परजीवी आदि को गिनने के लिए किया जा सकता है।

यह कुछ बहुत अजीब विशेषताओं को प्रस्तुत करता है, क्योंकि इसमें 3 ज़ोन होते हैं, एक गिनती के लिए एक केंद्रीय और दो समर्थन ज़ोन होते हैं। प्रत्येक चैम्बर में दो काउंटिंग ज़ोन या क्रॉसहेयर होते हैं, एक सबसे ऊपर और एक सबसे नीचे।

न्यूबॉयर चैंबर। स्रोत: शांतिबडिया संपादित छवि।

ये एक ग्रिड रूप में कई विभाजन हैं। मतगणना क्षेत्र दोनों वर्गों के 4 कोनों पर पाए जाने वाले मध्यम वर्ग हैं, साथ ही केंद्रीय वर्ग भी।

कैमरे की असेंबली को बहुत सावधानी से किया जाना चाहिए, क्योंकि कोई भी विवरण सेल की गिनती को प्रभावित करता है। ऐसी कई गलतियाँ हैं जो की जा सकती हैं, लेकिन यदि उनमें से कोई भी होती है, तो कैमरा को डिसबैलेंस, क्लिन और रीअसेम्बल किया जाना चाहिए। मुख्य त्रुटियों में निम्नलिखित शामिल हैं:

चेंबर को ओवरफ्लो करना या अंडरफिल करना, चैंबर को सूखने देना, धुंध के साथ अतिरिक्त तरल निकालने की कोशिश करना, चैम्बर को ट्रांसलेट करते समय, गंदे या गीले चैंबर को भरना, तनु या सैंपल को अच्छी तरह से न मिलाना आदि। इन सभी त्रुटियों का परिणाम एक अवास्तविक मूल्य होगा।

इतिहास

Neubauer कक्ष एक सटीक उपकरण है, और विनिर्माण प्रक्रिया सख्त गुणवत्ता नियंत्रण से गुजरती है। यह प्रति मिमी ³ कणों की सटीक गणना या तत्वों के गठन के लिए बनाया गया था, जैसे कि विभिन्न तरल पदार्थों में कोशिकाएं। इसके नाजुक ग्राफिक को हीरे की पेंसिल से उकेरा गया है।

Neubauer चैम्बर विशेषताओं

पूरा चैंबर एक सामान्य स्लाइड का आकार होता है ताकि इसे माइक्रोस्कोप स्टेज पर रखा जा सके।

कक्ष तीन केंद्रीय आयताकार सतहों (ए, बी, सी) के होते हैं। ज़ोन में "बी" आर ज़ोन या काउंटिंग ज़ोन स्थित है, जिसे रेटिकुलम भी कहा जाता है। कैमरे के प्रत्येक तरफ एक, ज़ोन "डी" द्वारा अलग किया गया।

न्यूबॉयर चैंबर का चित्रमय आरेख। स्रोत: हेमेटोलॉजी के लिए प्रैक्टिकल गाइड। वेनेज़ुएला के काराबोबो विश्वविद्यालय के स्कूल ऑफ बायोएनालिसिस।

प्रत्येक कटिस्नायुशूल एक पॉलिश किया गया क्षेत्र है जिसमें गणना क्षेत्र उत्कीर्ण होता है। इसमें 9 मिमी ^{2 के} सतह क्षेत्र के साथ एक वर्ग होता है और आंतरिक रूप से 1 मिमी ^{2 के} सतह क्षेत्र के साथ 9 वर्गों में विभाजित होता है। चार कोने वाले वर्गों को 16 छोटे वर्गों (0.0625 मिमी ² क्षेत्र में) में विभाजित किया गया है ।

ये ग्रिड मिलीमीटर लाइनों की एक श्रृंखला से बनते हैं जो एक दूसरे के साथ प्रतिच्छेद करते हैं, जो पूरी तरह से रेखांकित ग्रिड को मापते हुए सीमांकित करते हैं। इन रेखाओं को हीरे की नोक से उकेरा गया है।

बेहतर न्यूबॉएर रेटिकुलम। स्रोत: वेनेज़ुएला के काराबोबो विश्वविद्यालय के स्कूल ऑफ बायोएनालिसिस के हेमटोलॉजी का प्रैक्टिकल गाइड।

चारों पक्ष मतगणना क्षेत्र के अनुरूप हैं। यह इन पक्षों या कोनों पर है कि कोशिकाओं के अधिकांश (लाल रक्त कोशिकाओं और ल्यूकोसाइट्स) को गिना जाता है, जबकि प्लेटलेट्स को केंद्रीय क्षेत्र में गिना जाता है।

मध्य क्षेत्र में अधिक विभाजन होते हैं, इसमें एक 1 मिमी ² वर्ग होता है जो 25 वर्गों में विभाजित होता है, जिनका सतह क्षेत्र 0.04 मिमी ² होता है। बदले में इन्हें 0.00 ग्रिड ^{2 के} क्षेत्र के साथ 16 ग्रिड में विभाजित किया गया है ।

उन्नत न्यूबॉएर रेटिकुलम का विवरण। a) कोनों का वर्ग, b) केंद्रीय वर्ग, c) मध्य वर्ग का मध्य वर्ग। स्रोत: वेनेज़ुएला के काराबोबो विश्वविद्यालय के स्कूल ऑफ बायोएनालिसिस के हेमटोलॉजी का प्रैक्टिकल गाइड।

ज़ोन "ए" और "सी" एक विशेष कवर ऑब्जेक्ट को एक हेमेटोमेट्रिक स्लाइड या हेमेटमीटर कवर नामक स्थान पर रखने के लिए समर्थन के रूप में काम करता है।

पन्नी और गिनती की सतह के बीच की ऊंचाई 0.1 मिमी है। टैली बक्से के सतह क्षेत्र की माप, साथ ही चैम्बर की ऊंचाई और नमूने के कमजोर पड़ने, अंतिम गणना करने के लिए आवश्यक डेटा हैं।

अनुप्रयोग

इसका उपयोग सेल की गिनती के लिए किया जाता है। यह हेमटोलॉजी क्षेत्र में विशेष रूप से सहायक है, क्योंकि यह 3 रक्त कोशिका श्रृंखला की गिनती की अनुमति देता है; लाल रक्त कोशिकाओं, सफेद रक्त कोशिकाओं और प्लेटलेट्स।

हालांकि, इसका उपयोग अन्य क्षेत्रों में किया जा सकता है, उदाहरण के लिए शुक्राणु, बीजाणुओं, जीवाणुओं या महत्व के अन्य सामानों की गिनती के प्रकार के आधार पर।

कैसे इस्तेमाल करे?

नमूना तैयार करना

सेल गिनती करने के लिए, यह आमतौर पर पिछले कमजोर पड़ने से शुरू होता है। उदाहरण: श्वेत रक्त कोशिकाओं की गणना करने के लिए, तुर्क के तरल के साथ 1:20 कमजोर पड़ने को तैयार करें। विंदुक को लोड करने और न्यूबॉयर कक्ष को माउंट करने से पहले कमजोर पड़ने को अच्छी तरह मिलाया जाता है।

ऐसे समय होते हैं जब एक 1:20 कमजोर पड़ने को गिनने के लिए पर्याप्त नहीं होता है। उदाहरण के लिए, कुछ प्रकार के पुराने ल्यूकेमिया से पीड़ित रोगियों में। इन मामलों में, 1: 100 जैसे उच्च dilutions बनाया जाना चाहिए।

यदि, दूसरी ओर, गिनती बहुत कम है, जैसे कि गंभीर ल्यूकोपेनिया में, नमूना को केंद्रित करने के लिए छोटे फैलाव किए जा सकते हैं। उदाहरण: आप एक 1:10 कमजोर पड़ सकते हैं।

जो परिवर्तन किए जाते हैं वे गणनाओं को प्रभावित करते हैं।

न्यूबॉयर चैंबर बढ़ते हैं

न्युबॉयर कक्ष को केंद्रीय क्षेत्र में हेमोमेट्रिक स्लाइड रखकर इकट्ठा किया जाता है। दोनों बहुत साफ और सूखे होने चाहिए। लैमेला को रखने के लिए, इसे किनारों से लिया जाता है और धीरे से कैमरे पर गिरा दिया जाता है।

यह लोडिंग ज़ोन के किनारे पर 35 डिग्री के कोण पर थोमा स्वचालित पिपेट या पिपेट की नोक रखकर भरा जाता है। तरल को सुचारू रूप से छुट्टी दी जाती है और लोडिंग क्षेत्र केशिका द्वारा भरा जाता है। यह दोनों क्रॉसहेयर को लोड करने के लिए दोनों तरफ से किया जाता है।

रेटिकल्स को अतिभारित नहीं किया जाना चाहिए और न ही उन्हें तरल से इनकार किया जाना चाहिए। लोड सटीक होना चाहिए। यह महत्वपूर्ण है कि भरने को सजातीय रूप से किया जाता है, अर्थात, कोई बुलबुले नहीं होना चाहिए।

एक बार कक्ष को इकट्ठा करने के बाद, इसे 2 मिनट के लिए आराम करने के लिए छोड़ दिया जाता है ताकि कोशिकाएं नीचे की ओर झुकें और उनका दृश्य और गिनती आसान हो।

आराम के समय के बाद, इसे अवलोकन के लिए प्रकाश माइक्रोस्कोप के मंच पर रखा गया है। पहले यह 10X उद्देश्य के साथ केंद्रित है और यदि आवश्यक हो तो यह 40X पर चला जाता है।

इसके दृश्य को बेहतर बनाने के लिए, माइक्रोस्कोप से प्रकाश का मार्ग कम किया जाता है। ऐसा करने के लिए, कंडेनसर को उतारा जाता है और डायाफ्राम को थोड़ा बंद कर दिया जाता है।

गिनती

श्वेत रक्त कोशिकाओं या ल्यूकोसाइट्स की गिनती के लिए, चार मध्य कोने के कोने की पूरी सतह और प्रत्येक जालिका के केंद्रीय वर्ग को गिना जाना चाहिए।

ऊपरी बाएं कोने में वर्ग में गिनती शुरू होती है। आप पहली पंक्ति के पहले वर्ग से शुरू करते हैं, यानी बाएं से दाएं जब तक आप विपरीत छोर तक नहीं पहुंचते।

वहां आप नीचे जाते हैं और दाएं से बाएं अपने टकटकी को तब तक वापस करते हैं जब तक कि आप दूसरे छोर तक नहीं पहुंचते और इसी तरह, प्रत्येक ग्रिड के भीतर की कोशिकाओं को एक ज़िगज़ैग फैशन में गिना जाता है। प्रत्येक मध्य वर्ग के 16 ग्रिड गिने जाते हैं।

दो बार सेल की गिनती से बचने के लिए, उन कोशिकाओं के बारे में नियम हैं जो प्रत्येक ग्रिड की सीमा रेखा पर स्थित हैं। बाईं ओर और शीर्ष रेखाओं पर कोशिकाओं को गिना जाता है और दाईं और नीचे की रेखाओं पर कोशिकाओं की अनदेखी की जाती है।

एक मैनुअल सेल काउंटर उपलब्ध होना चाहिए ताकि ऑपरेटर डिवाइस कुंजी को कई बार दबाए, क्योंकि वहां सेल देखे जा सकते हैं। काउंटर के उपयोग के साथ, ऑपरेटर सूक्ष्म क्षेत्र से देखने के लिए बिना गिन सकता है। गिनती के अंत में, आप कुल गिने कोशिकाओं की संख्या देखेंगे।

गणना

गणना के लिए आप कई तरीकों से आगे बढ़ सकते हैं। एक सिंगल ग्रैच्युल को गिना जा सकता है या दोनों को गिना जा सकता है और दोनों को औसत किया जाता है। इन दो स्थितियों में, गिने कोशिकाओं को एक कारक से गुणा किया जाना चाहिए, जो इस मामले में 40 होगा। और इस प्रकार प्रति मिमी ³ की कुल गणना ^{प्राप्त की जाती है} ।

लेकिन अगर दो ग्रिड गिने जाते हैं और औसत नहीं लिया जाता है, तो इसे 20 से इस मामले में एक अलग कारक से गुणा किया जाना चाहिए।

-मूलपत्ति कारक

यहां बताया गया है कि गुणन कारक की गणना कैसे की जाती है।

गणना के लिए विभिन्न आंकड़ों पर ध्यान दिया जाता है, जिसमें कमजोर पड़ने वाले टिटर, चैम्बर की ऊंचाई और गिने गए क्षेत्र शामिल हैं।

पतला करने की क्रिया

ल्यूकोसाइट गिनती के लिए मानक कमजोर पड़ने का उपयोग 1:20 है।

चैंबर की ऊंचाई

कक्ष और रक्त कोशिका शीट के बीच की ऊंचाई 0.1 मिमी है।

गिनती का क्षेत्र

यदि 1 मिमी ² क्षेत्र के 5 वर्गों को गिना जाता है, तो इसका मतलब है कि कुल गिनती क्षेत्र 5 मिमी ^{2 है} । गणना की गई कुल मात्रा प्राप्त करने के लिए इस डेटा को चैम्बर की ऊंचाई से गुणा किया जाना चाहिए। यही है, 5 मिमी ² x 0.1 मिमी = 0.5 मिमी ³ ।

सूत्र और गणना

हमारे पास जो डेटा है वह कहा गया है:

यदि 0.5 मिमी ³ में - ये हैं --- गिने कोशिकाओं की संख्या

1 मिमी ^{3 में} --- कोशिकाओं का X n ° होगा

कोशिकाओं की एक्स नं। = (नं। कोशिकाओं की गणना एक्स 1) / 0.5 मिमी ³

लेकिन कमजोर पड़ने को भी ध्यान में रखा जाना चाहिए। इसलिए, सूत्र इस प्रकार है:

(गिने गए कोशिकाओं की संख्या x 1) x 20 / 0.5 मिमी ³

अंत में, संक्षेप करने के लिए, गिने गए कोशिकाओं की संख्या 40 से गुणा की जा सकती है। इस प्रकार, प्रति मिमी ³ ल्यूकोसाइट्स का मूल्य ^{प्राप्त होता है} ।

यदि दो रेटिकल की गणना की जाती है, तो गिने हुए क्षेत्र का डेटा बदल दिया जाता है, जो इस मामले में 10 वर्ग होगा, यानी 10 मिमी ² । और 1 मिमी 3 की कुल गणना की गई मात्रा। सूत्र होगा:

(गिने गए कोशिकाओं की संख्या x 1) x 20/1 मिमी ³

इसलिए, इस मामले में गुणन कारक 20 होगा।

गलतियां

-अगर कैमरे को लोड करते समय इसे पार किया जाता है या तरल के साथ पार किया जाता है, तो कैमरे की ऊंचाई अलग-अलग होगी। यह गणना वास्तविक चीज़ से अधिक होने के परिणामस्वरूप होती है। यदि आप धुंध या कपास के साथ अतिरिक्त को हटाने की कोशिश करते हैं, तो यह एक बड़ी गलती है। यह क्रिया कोशिकाओं को ध्यान केंद्रित करने, गिनती बढ़ाने का कारण बनेगी।

-यदि इसे खराब तरीके से लोड किया जाता है, तो गिनती वास्तविक से कम होगी।

-अगर कैमरे को माउंट किया जाता है और सूखने दिया जाता है, तो अब गिनती करना संभव नहीं है क्योंकि यह गलत परिणाम देगा।

-यदि चेंबर को लोड करने से पहले नमूने के कमजोर पड़ने को अच्छी तरह से मिश्रित नहीं किया जाता है, तो रीडिंग में त्रुटि का खतरा होता है, क्योंकि कोशिकाओं को सजातीय रूप से वितरित नहीं किया जाएगा। इसलिए, कोशिकाओं की एक कम या उच्च एकाग्रता होगी, यह इस बात पर निर्भर करता है कि नमूना क्रमशः तरल की सतह से या ट्यूब के नीचे से लिया गया है।

-बबल्स की उपस्थिति तरल की मात्रा को कम करती है जो कोशिकाओं में सही दृश्य और वितरण के साथ हस्तक्षेप करते हुए, जालिका में प्रवेश करती है। यह सभी परिणामों को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करता है।

-गणना करते समय, खो जाने से बचने के लिए प्रत्येक बड़े वर्ग के पूरा होने तक माइक्रोस्कोप से न देखें।

बढ़ते समय के बाद त्रुटि का एक कारण कैमरा को झुकाना है। इस कारण से, माइक्रोस्कोप के चरण को सावधानीपूर्वक उठाया जाना चाहिए।

सिफ़ारिश करना

यदि किसी भी कारण से आप चैम्बर को भरने में असामान्यता का पता लगाते हैं, तो यह अनुशंसा की जाती है कि आप उस तैयारी को अलग कर दें, चैम्बर को साफ करें और स्क्रैच से पुन: एकत्रित करें।

क्रॉस बालों को खरोंचने से बचने के लिए कैमरे की सफाई करते समय बहुत सावधानी बरतें। दूसरी ओर, ध्यान रखें कि हेमोमेट्रिक स्लाइड नाजुक और नाजुक है। अनुचित हैंडलिंग इसे तोड़ सकती है।

इससे पहले कि आप गिनती शुरू करें, सुनिश्चित करें कि कोशिकाओं को अच्छी तरह से वितरित किया गया है। कोशिकाओं का असमान वितरण खराब नमूना मिश्रण या कमजोर पड़ने से होता है। यदि ऐसा होता है, तो विधानसभा को दोहराया जाना चाहिए।

यह जानने का एक तरीका है कि क्या कोशिकाओं को अच्छी तरह से वितरित किया गया है, प्रत्येक बड़े वर्ग की गिनती की तुलना करके है, प्रत्येक वर्ग के लिए गिने जाने वाले कोशिकाओं की संख्या एक से दूसरे में भिन्न नहीं होनी चाहिए।

-यदि सफेद रक्त कोशिका की गिनती 50,000 मिमी ³ से ऊपर है ^{, तो} गिनती को दोहराने की सलाह दी जाती है, जिससे अधिक पतला हो जाता है।

-यदि आप कमजोर पड़ने को बदलते हैं, तो आपको गुणन कारक को पुनर्गणना करना चाहिए, क्योंकि यह सूत्र को प्रभावित करता है।

संदर्भ

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