लैक्टोज शोरबा गैर का एक साधन है - चयनात्मक तरल संस्कृति माध्यम के रूप में मुख्य रूप से इस्तेमाल एक प्रसंस्कृत खाद्य पदार्थ, डेयरी उत्पाद या पानी के लिए सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण से साल्मोनेला उपभेदों के अलगाव में पूर्व संवर्धन। यह इंटरनेशनल कमीशन ऑन माइक्रोबायोलॉजिकल स्पेसिफिकेशन्स फॉर फूड्स (ICMPF) द्वारा अनुशंसित है।
माध्यम में जिलेटिन, मांस निकालने और लैक्टोज के एंजाइमेटिक पाचन होते हैं, जो बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक पदार्थ हैं। इसके अलावा, लैक्टोज एक किण्वनीय कार्बोहाइड्रेट है, इसलिए कुछ कोलीफॉर्म गैस के उत्पादन के साथ इसे तोड़ने में सक्षम हैं।
मैलापन के साथ लैक्टेटेड शोरबा। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया फोटो। मारिलेस गिल
इस कारण से, लैक्टोज शोरबा को अमेरिकन पब्लिक हेल्थ एसोसिएशन (एपीएचए) द्वारा कुल और फेकल कोलीफॉर्म बैक्टीरिया के प्रकल्पित अध्ययन के लिए अनुशंसित किया गया है, जो इसे मोस्ट प्रोबेबल नंबर (एमपीएन) की मानक तकनीक में लॉरिल सल्फेट ट्रिप्टो ब्रोथ के एक उत्कृष्ट विकल्प के रूप में योग्य बनाता है।), भोजन, दूध और सतह के पानी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है, भूमिगत, मनोरंजक, घरेलू और औद्योगिक अपशिष्ट नमूने।
आधार
कुछ नमूनों के सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण के लिए, पूर्व संवर्धन कदम एक विशिष्ट सूक्ष्मजीव को ठीक करने में सक्षम होने के लिए आवश्यक है जो बहुत कम मात्रा में या प्रतिकूल परिस्थितियों में हो सकता है जो इसकी व्यवहार्यता का उल्लंघन या कम से कम करें।
यह सूखे और प्रसंस्कृत खाद्य पदार्थों का मामला है, संभवतः साल्मोनेलस सपा के साथ दूषित है। इन मामलों में, यदि बैक्टीरिया मौजूद हैं, तो उन्हें उत्पाद उत्पादन प्रक्रिया के दौरान शारीरिक और रासायनिक शोषण का सामना करना पड़ा है।
इस तरह से कि सूक्ष्मजीव प्रतिकूल कारकों जैसे निर्जलीकरण, निरोधात्मक या विषैले उत्पादों के संपर्क में और अन्य जीवाणुओं की मौजूदगी से उत्पन्न ओवरलैप से अधिक मात्रा में अन्य लोगों के संपर्क में आते हैं।
इस अर्थ में, लैक्टोज शोरबा का सूक्ष्मजीव की क्षतिग्रस्त संरचनाओं पर मरम्मत प्रभाव पड़ता है, जिससे यह ठीक हो जाता है और पुन: उत्पन्न होता है, इस तरह से कि इसका पता लगाया जा सके।
इसी तरह, लैक्टोज शोरबा में निरोधात्मक पदार्थों को पतला करने की क्षमता है जो इसकी व्यवहार्यता को प्रभावित कर सकते हैं, जिससे इसके विकास की अनुमति मिलती है। इसके अलावा, लैक्टोज शोरबा की पोषण संरचना अन्य सूक्ष्मजीवों पर साल्मोनेला एसपी के विकास के पक्ष में रणनीतिक है।
अंतिम पहचान के लिए, इसे अन्य निश्चित संस्कृति मीडिया के लिए उपसंस्कृत होना चाहिए।
दूसरी ओर, माध्यम की संरचना भी लैक्टोज किण्वन सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए संभव बनाता है जो गैस का उत्पादन करते हैं।
तैयारी
एक लीटर लैक्टोज शोरबा तैयार करने के लिए, निर्जलित माध्यम के 13 ग्राम वजन और 1000 मिलीलीटर डिस्टिल्ड पानी में भंग किया जाना चाहिए।
पानी में माध्यम को भंग करने में मदद करने के लिए, समाधान को थोड़ा गर्म किया जा सकता है, लेकिन बहुत अधिक नहीं।
एक बार सजातीय होने के बाद, समाधान इस प्रकार तैयार किया जाता है: यदि शोरबा का उपयोग कॉलिफॉर्म की खोज के लिए किया जाता है, तो परीक्षण ट्यूबों का एक रैक तैयार किया जाता है, जिसमें एक डरहम किण्वन ट्यूब को उल्टा डाला जाता है।
डरहम ट्यूब एक बहुत ही महत्वपूर्ण विवरण है, क्योंकि यह गैस गठन का पता लगाने की अनुमति देगा, कॉलिफोर्म की खोज में महान मूल्य का डेटा।
एक बार ट्यूब तैयार हो जाने के बाद, लैक्टोज शोरबा के 10 मिलीलीटर को उनमें भेज दिया जाता है, एक मात्रा जो पूरे डरहम ट्यूब को कवर करने के लिए पर्याप्त होनी चाहिए।
यदि लैक्टोज शोरबा का उपयोग पूर्व-संवर्धन शोरबा के रूप में किया जाना है, तो डरहम किण्वन ट्यूब रखना आवश्यक नहीं है। इस मामले में, बड़ी मात्रा में मध्यम (225 मिलीलीटर) की आवश्यकता होती है, जिसे 500 मिलीलीटर की बोतलों, चौड़े मुंह और थर्मो-प्रतिरोधी स्क्रू कैप के साथ परोसा जाएगा।
इसके बाद, ट्यूब या फ्लास्क को 15 मिनट के लिए 121 ° C पर आटोक्लेव किया जाता है।
मध्यम ६. of remain ०.२ के २५ डिग्री सेल्सियस पर अंतिम पीएच में रहना चाहिए।
उपयोग होने तक शोरबा फ्रिज में रखा जाता है।
उपयोग करने से पहले, शोरबा को कमरे के तापमान पर लाया जाना चाहिए।
दूसरी ओर, लैक्टोज शोरबा भी डबल एकाग्रता में तैयार किया जा सकता है।
कुछ प्रयोगशालाएं एक संकेतक के रूप में लैक्टोज शोरबा में ब्रोमोकेरसोल बैंगनी को जोड़ती हैं, ताकि ट्यूब को दिखाया जा सके कि रंग परिवर्तन के कारण लैक्टोज को किण्वित किया गया है। इस मामले में, शोरबा एक बैंगनी रंग लेता है और यदि किण्वन होता है तो यह पीला हो जाता है।
अनुप्रयोग
माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशालाओं में, लैक्टोज शोरबा का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है क्योंकि यह एक अपेक्षाकृत सस्ता माध्यम है जो विश्वसनीय और तेज़ परिणाम (24-48 घंटे) प्रदान करता है।
इसका उपयोग भोजन और पानी में कुल और फेकल कोलीफॉर्म के विश्लेषण के लिए या सलाइमेला के लिए पूर्व-संवर्धन शोरबा के रूप में किया जा सकता है।
पूर्व संवर्धन
पूर्व संवर्धन नमूना संवर्धन के लिए एक कदम है, जो प्रसंस्कृत खाद्य पदार्थों में जीनस साल्मोनेला के बैक्टीरिया की वसूली में सुधार करता है।
ऐसा करने के लिए, ठोस भोजन का नमूना (25 ग्राम) या तरल (25 मिलीलीटर) 225 मिलीलीटर लैक्टोज शोरबा में डाला जाता है, 24 से 48 घंटों के लिए सेते हैं। इसके बाद, यह एक समृद्ध माध्यम में उप-संवर्धित होगा जैसे कि सेलेनाइट सिस्टीन शोरबा या टेट्राथिओनेट शोरबा। फिर XLD और SS चयनात्मक मीडिया पर जाएं।
कुल और फेकल कोलीफॉर्म विश्लेषण
यह फेकल संदूषण के संकेतक के रूप में एक उत्कृष्ट माध्यम है।
इस कारण से, लैक्टोज शोरबा सबसे संभावित संख्या विधि द्वारा कोलीफॉर्म अध्ययन के प्रकल्पित चरण के लिए आदर्श है।
ऐसे नमूनों के लिए जिनमें बड़ी मात्रा में कोलीफॉर्म का संदेह होता है, इसकी थोड़ी मात्रा में टीका लगाया जाता है (1 मिली), जबकि उन नमूनों के लिए जिनमें थोड़ी मात्रा में कोलीफॉर्म का संदेह होता है, अधिक मात्रा में नमूनों (10 मिली) का टीका लगाया जाता है।
विश्लेषण के लिए, 10 -1, 10 -2, 10 -3 dilutions बनाये जाते हैं, जिसका उपयोग प्रत्येक सांद्रता के लिए 3-5 ट्यूबों की बैटरी के रूप में किया जाता है।
प्रत्येक कमजोर पड़ने से, समान मात्रा को लैक्टोज शोरबा में डाला जाता है।
ट्यूबों को 24 घंटे तक ऊष्मायन किया जाता है। नकारात्मक शोरबा को आगे के 24 घंटों के लिए ऊष्मायन किया जाता है।
परिणामों की व्याख्या दो विशेषताओं को देखते हुए की जाती है: पहली है, अशांति की उपस्थिति या अनुपस्थिति और क्योंकि इस माध्यम में पीएच संकेतक नहीं है, कोई रंग परिवर्तन नहीं होगा।
दूसरा गैस का उत्पादन या नहीं है। इसके अंदर एक या एक से अधिक हवाई बुलबुले की उपस्थिति से डरहम ट्यूब में गैस आसानी से निकलती है।
यह सकारात्मक माना जाता है अगर दोनों विशेषताओं को मनाया जाता है, अर्थात, गैस उत्पादन के साथ अशांति। सकारात्मक ट्यूबों को पुष्टिकरण मीडिया (2% ब्रिलियंट ग्रीन बाइल शोरबा और ईसी शोरबा) में फिर से बीज दिया जाना चाहिए।
माध्यम का गुणवत्ता नियंत्रण
- माध्यम तैयार करते समय, डरहम ट्यूबों को रखना नहीं भूलना महत्वपूर्ण है यदि उसी का उद्देश्य कोलीफॉर्म का अध्ययन करना है।
- स्टरलाइज़ करने से पहले माध्यम को ज़्यादा गरम न करें।
- स्टरलाइज़ करने से पहले टेस्ट ट्यूब में वितरित करें, उसके बाद कभी नहीं।
- मीडियम 3 महीने से ज्यादा पुराना होने पर इस्तेमाल न करें।
- माध्यम की सामान्य विशेषताओं में किसी भी परिवर्तन का निरीक्षण करने पर उसका उपयोग न करें।
- लैक्टोज शोरबा का एक बैच तैयार करते समय, इसकी गुणवत्ता का परीक्षण एस्कारिचिया कोलाई, एंटरोबैक्टीरिया एरोजीन, सिट्रोबैक्टीरिया फ्रीन्डि, और क्लेबसिएला निमोनिया जैसे ज्ञात उपभेदों की बुवाई करके करें। वे गैस उत्पादन (सकारात्मक नियंत्रण) के साथ बहुत अच्छी तरह से विकसित होते हैं।
- इसमें स्यूडोमोनास एरुगिनोसा, साल्मोनेला टायफिम्यूरियम या एंटरोकोकस फेसेलिस भी शामिल हो सकते हैं, जो अच्छी तरह से विकसित होते हैं, लेकिन गैस उत्पादन (नकारात्मक नियंत्रण) के बिना।
- यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि निर्जलित माध्यम का मूल रंग बेज है और तैयार माध्यम का रंग बहुत हल्का और पारदर्शी पीला है। यदि रंग या उपस्थिति में परिवर्तन देखा जाता है, तो यह बिगड़ सकता है।
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