Malonate शोरबा तरल संस्कृति नैदानिक परीक्षण (malonate) के लिए इस्तेमाल किया मध्यम, परिवार Enterobacteriaceae से कुछ पीढ़ी को अलग करने के लिए प्रयोग किया जाता है। यह 1933 में लिफसन द्वारा बनाया गया था और बाद में इविंग द्वारा संशोधित किया गया था, जिन्होंने मूल सूत्र में थोड़ी मात्रा में डेक्सट्रोज और खमीर निकालने को जोड़ा।
माध्यम वर्तमान में खमीर निकालने, अमोनियम सल्फेट, डिपोटेशियम फॉस्फेट, मोनोपोटेशियम फॉस्फेट, सोडियम क्लोराइड, सोडियम मैलोनेट, डेक्सट्रोज और ब्रोमोथाइमोल ब्लू से बना है। इस परीक्षण को आम तौर पर Enterobacteriaceae के लिए जैव रासायनिक पहचान बैटरी में शामिल किया जाता है, जिससे कुछ निश्चित प्रजातियों और प्रजातियों में अंतर करने में मदद मिलती है।
मैलोनेट परीक्षण का ग्राफिक प्रतिनिधित्व। A. नेगेटिव टेस्ट, B. (अम्लीकरण) नेगेटिव टेस्ट, C. (मीडियम अल्कलाइजेशन) पॉजिटिव टेस्ट। स्रोत: कलर ट्यूब publicdomainpictures.net
मैलोनेट परीक्षण मुख्य रूप से कुछ सूक्ष्मजीवों की क्षमता के आधार पर सोडियम मैनेटोनेट को उनके एकमात्र कार्बन स्रोत और अमोनियम सल्फेट को उनके नाइट्रोजन स्रोत के रूप में उपयोग करने पर आधारित है।
आमतौर पर एंटरोबैक्टर, क्लेबसिएला और सिट्रोबैक्टीरिया जेनेरा की कुछ प्रजातियों में मैलोनेट परीक्षण सकारात्मक है। जबकि, जेनेरा एस्चेरिचिया, साल्मोनेला, शिगेला, एडवर्ड्सियाला, यर्सिनिया, सेराटिया, मॉर्गनेला, प्रोटीन और प्रोविडेंसिया की अधिकांश प्रजातियां नकारात्मक प्रतिक्रिया देती हैं।
आधार
मैलोनेट परीक्षण में उन बैक्टीरिया को दिखाया जाता है जो सोडियम कार्बोनेट को कार्बन स्रोत के रूप में और अमोनियम सल्फेट को नाइट्रोजन स्रोत के रूप में उपयोग करने में सक्षम होते हैं।
अधिकांश एंटरोबैक्टीरिएसी जो कि malonate का उपयोग नहीं करते हैं, इस माध्यम में विकसित करने में सक्षम हैं, पोषक तत्वों के साथ डेक्सट्रोज और खमीर निकालने।
इस मामले में, पेप्टोन के उपयोग द्वारा क्षारीय करने के किसी भी प्रयास को डेक्सट्रोज के किण्वन द्वारा उत्पन्न एसिड के उत्पादन से मुकाबला किया जाएगा। इसी तरह, डिपोटेशियम और मोनोपोटेशियम फॉस्फेट एक बफर के रूप में कार्य करते हैं, पीएच को 6.7 पर बनाए रखते हैं।
इसीलिए, जब परीक्षण नकारात्मक होता है, शोरबा एक ही मूल रंग (हरा) रहता है। डेक्सट्रोज के किण्वन के कारण दुर्लभ अवसरों पर माध्यम अम्लीय हो सकता है; पेप्टोन और पीएच इंडिकेटर के उपयोग के बिना यह माध्यम के रंग को पीले रंग की ओर मोड़ देगा। ऐसा होने के लिए, पीएच 6 तक गिरना चाहिए।
हालांकि, जब यह परीक्षण सकारात्मक होता है, तो यह कहा जाता है कि सूक्ष्मजीव ने अन्य घटकों का उपयोग किए बिना, क्रमशः कार्बन और नाइट्रोजन स्रोतों के रूप में मैलोनेट और अमोनियम सल्फेट का उपयोग किया।
इस मामले में, माध्यम सोडियम की रिहाई और NaOH के परिणामस्वरूप गठन के कारण क्षारीय हो जाता है। इस अर्थ में, पीएच इंडिकेटर (ब्रोमोथाइमॉल ब्लू) माध्यम का रंग हरे से नीले रंग में बदल जाता है जब पीएच 7.6 के बराबर या उससे अधिक होता है। नीला हल्का या तीव्र (प्रुशियन नीला) हो सकता है।
अंत में, सोडियम क्लोराइड माध्यम की परासरणशीलता को बनाए रखता है और पानी सभी घटकों का पतला है।
व्याख्या
समान रंग शोरबा (हरा) - नकारात्मक परीक्षण
पीला शोरबा: नकारात्मक परीक्षण
हल्का या गहरा नीला शोरबा: परीक्षण सकारात्मक
फेनिलएलनिन मैलोनेट शोरबा नामक एक प्रकार है, जिसे शॉ और क्लार्क का माध्यम भी कहा जाता है। इस मामले में, दो परीक्षणों का विश्लेषण किया जा सकता है, एक कार्बन स्रोत के रूप में malonate का उपयोग और फेनिलएलनिन से पाइरुविक एसिड का उत्पादन।
तैयारी
मैलोनेट शोरबा
चुने गए वाणिज्यिक कंपनी के सम्मिलित द्वारा निर्दिष्ट ग्राम की संख्या का वजन होता है (यह एक से दूसरे में भिन्न हो सकता है)। तौला हुआ ग्राम एक लीटर आसुत जल में निलंबित होता है। पूरी तरह से भंग होने तक थोड़ा गर्म करें। कपास की टोपी के साथ 13/100 परीक्षण ट्यूबों में मध्यम के 3 मिलीलीटर वितरित करें।
15 से 20 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में बाँझ।
उपयोग करने से पहले ठंडा करें। यदि वे तुरंत उपयोग नहीं होने जा रहे हैं, तो उपयोग करने तक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें। टीका लगाने से पहले कमरे के तापमान पर शोरबा लाओ।
मध्यम का पीएच 6.7। 0.2 होना चाहिए। तैयार माध्यम का रंग बोतल हरा है।
फेनिलएलनिन मालोनेट शोरबा
निर्जलित माध्यम के 11 ग्राम वजन करें और आसुत जल के 1 लीटर में भंग करें। बाकी तैयारी पहले से वर्णित के समान है।
यह नसबंदी शोरबा मध्यम करने से पहले फेनिलएलनिन के 2 ग्राम / एल जोड़कर भी तैयार किया जा सकता है।
उपयोग
इसका उपयोग जैव रासायनिक परीक्षणों की बैटरी के हिस्से के रूप में किया जाता है जो एंटरोबैक्टीरिया परिवार के बैक्टीरिया की पहचान के लिए इकट्ठे होते हैं।
के बीच अंतर करने में मदद करता है:
-इस जीनस एस्चेरिशिया और सेराटिया (-) जीनस क्लेबसिएला और एंटरोबैक्टर (+)।
-सल्मोनेला एंटरिका की प्रजातियां एरीज़ोना, साल्मोनेला एंटरिका एसपीएस सलेम और साल्मोनेला एंटरिका एसपीएस डायरिज़ोना (+), प्रजाति साल्मोनेला एंटरिका एसपी एंटरिका (-)।
आमतौर पर जीनस एक्टिनोबैसिलस (-) से जीनस क्लेबसिएला से (+)।
-आयोगिक रूप से यह एन्टेरोबैक्टीरिया परिवार से संबंधित नहीं होने वाले जीवाणुओं की प्रजातियों और प्रजातियों के भेदभाव को दूर करने में मदद कर सकता है, जैसे कि गैर-किण्वन ग्राम नकारात्मक बेसिली अल्कलजीनस फेसेलिस (+) और एसिनेटोबैक्टेर एसपी (-)।
स्रोत: कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।
प्रक्रिया
एक लाइटर के तहत, एक शुद्ध कोलोन का एक हिस्सा लिया जाता है, एक ठीक से निष्फल और ठंडा प्लैटिनम हैंडल का उपयोग करके। लिया गया नमूना (प्रकाश इनोकुलम) मैलोनेट शोरबा में भंग होता है। 24 से 48 घंटों के लिए 35 डिग्री सेल्सियस 24 0.2 पर एरोबियोसिस में ढक्कन ढीले से सेते हैं।
ट्राईप्टिसेज़ सोया शोरबा में मैलोनेट शोरबा को 18-24 घंटे की संस्कृति से भी जोड़ा जा सकता है। इस मामले में, 0.01 मिलीलीटर एक बाँझ पिपेट के साथ लिया जाता है और मैलोनेट शोरबा को निष्क्रिय किया जाता है। 24 से 48 घंटों के लिए 35 डिग्री सेल्सियस 24 0.2 पर एरोबियोसिस में ढक्कन ढीले से सेते हैं।
समय के अंत में, परिणामों की व्याख्या की जाती है। ऊष्मायन के 48 घंटों के बाद नीले रंग के किसी भी निशान को सकारात्मक माना जाना चाहिए। 48 घंटे के ऊष्मायन समय बीत जाने तक परीक्षण को नकारात्मक नहीं माना जाना चाहिए।
फेनिलएलनिन malonate शोरबा संस्करण का उपयोग करने के मामले में, पहले malonate की व्याख्या की जाती है और फिर 1N HCl की 5 बूंदें और 8% फेरिक क्लोराइड के 3-5 बूंदों को जोड़ा जाता है। एक गहरे हरे रंग की व्याख्या फेनिलएलनिन के सकारात्मक परीक्षण के रूप में की जाती है। यदि, दूसरी ओर, मध्यम हल्का नीला हो जाता है, तो परीक्षण फेनिलएलनिन के लिए नकारात्मक है।
क्यूए
माध्यम की बाँझपन नियंत्रण करने के लिए, ऊष्मायन के 24 घंटों के लिए 35 डिग्री सेल्सियस be 0.2 पर एक या दो शोरबा ऊष्मायन किया जाना चाहिए। इस समय के बाद बादल या रंग परिवर्तन नहीं होना चाहिए।
गुणवत्ता नियंत्रण के लिए, ज्ञात या प्रमाणित उपभेदों का उपयोग किया जा सकता है, जैसे: एंटरोबैक्टर एरोजेनस एटीसीसी 13048, क्लेबसिएला न्यूमोनिया एटीसीसी 33945, साल्मोनेला एंटरिका एसपी एरिज़ोनाई एटीसीसी 13314 और एस्चेरिशिया कोली एटीसीसी 25922।
अपेक्षित परिणाम हैं:
- एंटरोबैक्टर एरोजेन, क्लेबसिएला निमोनिया और साल्मोनेला एंटरिका एसपी एरिजोना एक सकारात्मक प्रतिक्रिया (मध्यम नीला रंग) देते हैं।
- एस्चेरिचिया कोलाई के लिए, परिणाम नकारात्मक होना चाहिए, अर्थात, यह उम्मीद है कि कोई रंग परिवर्तन (हरा) नहीं होगा या यह ग्लूकोज किण्वन के कारण पीला हो जाएगा।
सीमाएं
शोरबा का उपयोग न करें जो मैलापन, अवक्षेप, रंग परिवर्तन या किसी भी बिगड़ने के संकेत को दर्शाता है।
संदर्भ
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