की मध्यस्थता: औचित्य, तैयारी, उपयोग और सीमाएं - जीवविज्ञान - 2025

के या ग्लूकोज किण्वन मध्यम एक अर्द्ध ठोस अगर विशेष रूप से ऑक्सीडेटिव और Enterobacteriaceae के अलावा अन्य सूक्ष्मजीवों का एक महत्वपूर्ण समूह, गैर आंतों का ग्राम नकारात्मक बेसिली कहा जाता है में कार्बोहाइड्रेट के उत्साहवर्द्धक चयापचय के अध्ययन के लिए बनाया गया है।

यह ह्यूग और लीफसन द्वारा बनाया गया था; इन शोधकर्ताओं ने महसूस किया कि कार्बोहाइड्रेट के एसिड उत्पादन का अध्ययन करने के पारंपरिक साधन बैक्टीरिया के इस विशिष्ट समूह के लिए उपयुक्त नहीं थे।

A. मध्यम का वाणिज्यिक बेसल। B. मध्यम मध्यम बीज वाले ट्यूब। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा ली गई ए और बी तस्वीरें। मारीलासा गिल।

ऐसा इसलिए है क्योंकि गैर-एंटरिक ग्राम नकारात्मक छड़ आमतौर पर एंटरोबैक्टीरिया के विपरीत, कम मात्रा में एसिड का उत्पादन करते हैं।

इस अर्थ में, ओएफ माध्यम में विशेष विशेषताएं हैं जो एसिड की छोटी मात्रा का पता लगा सकती हैं, दोनों ऑक्सीडेटिव और किण्वक मार्गों द्वारा। ये अंतर पेप्टोन, कार्बोहाइड्रेट और अगर की मात्रा से संबंधित हैं।

इस माध्यम में कम पेप्टोन होते हैं और कार्बोहाइड्रेट की उच्च एकाग्रता होती है, इस प्रकार उन उत्पादों को कम किया जाता है जो प्रोटीन चयापचय के परिणामस्वरूप माध्यम को क्षारीय करते हैं और कार्बोहाइड्रेट के उपयोग के कारण एसिड का उत्पादन बढ़ाते हैं।

दूसरी ओर, अगर की मात्रा में कमी हमें प्रेरणा का पालन करने की अनुमति देने के अलावा, पूरे माध्यम में उत्पादित एसिड के प्रसार के पक्ष में है।

इस माध्यम में पेप्टोन, सोडियम क्लोराइड, ब्रोमोथाइमॉल ब्लू, डिपोटेशियम फॉस्फेट, अगर और कार्बोहाइड्रेट होते हैं। सबसे आम कार्बोहाइड्रेट ग्लूकोज है, लेकिन अन्य का उपयोग किया जा सकता है जिसके अनुसार कोई भी अध्ययन करना चाहता है, जैसे कि लैक्टोज, माल्टोज़, ज़ाइलोज़, अन्य।

आधार

किसी भी संस्कृति माध्यम की तरह, OF OF माध्यम में पोषक तत्व होने चाहिए जो बैक्टीरिया के विकास की गारंटी देते हैं; ये पदार्थ पेप्टोन हैं।

अपने हिस्से के लिए, कार्बोहाइड्रेट ऊर्जा प्रदान करता है और एक ही समय में इसके खिलाफ सूक्ष्मजीव के व्यवहार का अध्ययन करने का कार्य करता है, अर्थात यह बैक्टीरिया को ऑक्सीडेटिव, किण्विक या गैर-सैकैरोलाइटिक जीव के रूप में वर्गीकृत करने की अनुमति देता है।

माध्यम में 2: 1 पारंपरिक मीडिया के विपरीत 1: 5 पेप्टोन / कार्बोहाइड्रेट अनुपात होता है। यह सुनिश्चित करता है कि पेप्टोन के क्षरण से बनने वाली क्षारीय एमाइनों की मात्रा कमजोर एसिड के गठन को बेअसर नहीं करती है।

दूसरी ओर, माध्यम में सोडियम क्लोराइड और डिपोटेशियम फॉस्फेट होता है। ये यौगिक आसमाटिक रूप से मध्यम को स्थिर करते हैं और क्रमशः पीएच को विनियमित करते हैं। ब्रोमोथाइमॉल ब्लू पीएच संकेतक है, जो एसिड के उत्पादन के साथ माध्यम के रंग को हरे से पीले रंग में बदल देता है।

कुछ सूक्ष्मजीव ऑक्सीडेटिव या किण्वन मार्गों के माध्यम से कार्बोहाइड्रेट का उपयोग कर सकते हैं, जबकि अन्य या तो मार्ग नहीं लेते हैं।

यह प्रत्येक सूक्ष्मजीव की विशेषताओं पर निर्भर करता है। उदाहरण के लिए, कुछ सख्त एरोबिक सूक्ष्मजीव कुछ कार्बोहाइड्रेट को ऑक्सीडाइज़ कर सकते हैं, और संकाय anaerobes उनके आसपास के वातावरण पर निर्भर करते हुए ऑक्सीकरण और किण्वन कर सकते हैं, जबकि अन्य ऑक्सीकरण या किण्वन कार्बोहाइड्रेट (एसाकारोटैटिक) नहीं करते हैं।

अंत में, सीडीसी द्वारा अनुशंसित मध्यम का एक संशोधन है जिसमें एक संकेतक के रूप में फिनोल लाल के साथ एक विशेष ओएफ आधार है।

ऑक्सीकरण की प्रक्रिया

ग्लूकोज ऑक्सीकरण प्रक्रिया को ग्लूकोज के फास्फोरिलीकरण की आवश्यकता नहीं होती है, जैसा कि किण्वन प्रक्रिया करती है। इस मामले में एल्डिहाइड समूह को एक कार्बोक्सिल समूह में ऑक्सीकरण किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप ग्लूकोनिक एसिड होता है। यह बदले में 2-केटोग्लोनिक को ऑक्सीकरण करता है।

उत्तरार्द्ध या तो पायरुविक एसिड के दो अणुओं को जमा या तोड़ देता है। इस प्रणाली को अंतिम इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में ऑक्सीजन या कुछ अकार्बनिक यौगिक की उपस्थिति की आवश्यकता होती है।

इस मार्ग से एसिड का उत्पादन किण्वन मार्ग द्वारा प्राप्त की तुलना में कमजोर है।

किण्वन प्रक्रिया

किसी भी उपलब्ध मार्ग से ग्लूकोज किण्वन के लिए, इसे पहले फॉस्फोराइलेट किया जाना चाहिए, जिससे ग्लूकोज-6-फॉस्फेट बन जाता है।

ग्लूकोज किण्वन कई मार्गों को ले सकता है, जिनमें से एक दूतावास-मेयेरहोफ-परनास मार्ग है, लेकिन वे एंटनेर-डोडोरॉफ मार्ग या वारबर्ग-डिकेंस हेक्सोज मोनोफॉस्फेट मार्ग भी ले सकते हैं, जिसे इस रूप में भी जाना जाता है पैंटोज के क्षरण में।

चुना गया मार्ग उस सूक्ष्मजीव के पास मौजूद एंजाइमी प्रणाली पर निर्भर करेगा।

वाया एम्बडन-मेयरहोफ- पारनस

दूतावास-मेयेरहोफ-परनास मार्ग के माध्यम से ग्लूकोज के किण्वन में, इसे दो त्रिभुज अणुओं में विभाजित किया जाता है, बाद में ग्लिसराल्डिहाइड-3-फॉस्फेट के गठन तक, विभिन्न कार्बन यौगिकों के लिए अवक्रमित किया जाता है। वहाँ से एक मध्यवर्ती पदार्थ की उत्पत्ति होती है, जो पाइरुविक अम्ल है।

वहां से विभिन्न प्रकार के मिश्रित एसिड बनेंगे जो एक प्रजाति से दूसरे में भिन्न हो सकते हैं।

यह प्रणाली ऑक्सीजन की अनुपस्थिति में होती है और अंतिम इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में एक कार्बनिक यौगिक की आवश्यकता होती है।

एंटनर-डोडोरॉफ़ मार्ग

एंटनर-डोडोरॉफ़ मार्ग के माध्यम से ग्लूकोज के किण्वन में, ग्लूकोज 6-फॉस्फेट ग्लूकोनो-ए-लैक्टोन-6-फॉस्फेट बन जाता है और वहां से यह 6-फॉस्फोग्लुकोनेट और 2-केटो-3-डीऑक्सी-6- से ऑक्सीकरण होता है। फॉस्फोग्लुकोनेट, अंत में पाइरूविक एसिड बनाते हैं। इस पथमार्ग को ग्लाइकोलाइसिस होने के लिए ऑक्सीजन की आवश्यकता होती है।

पेन्टोज़ का अतिक्रमण मार्ग या वारबर्ग-डिकेंस हेक्सोक्सा मोनोफ़ॉस्फेट मार्ग

यह मार्ग ऊपर के 2 का एक संकर है। यह एंटनर-डोडोरॉफ़ मार्ग के समान शुरू होता है, लेकिन बाद में ग्लिसराल्डिहाइड-3-फॉस्फेट पाइरुविक एसिड के अग्रदूत के रूप में बनता है, जैसा कि एम्बडन-मेयरहोफ-पारनास मार्ग में होता है।

तैयारी

तौलना:

पेप्टोन के 2 जी

सोडियम क्लोराइड के 5 ग्राम

डी-ग्लूकोज का 10 ग्राम (या कार्बोहाइड्रेट तैयार किया जाना है)

0.03 ग्राम ब्रोमोथाइमॉल नीला

आगर की 3 जीआर

डिपोटेशियम फॉस्फेट का 0.30 ग्राम

आसुत जल का 1 लीटर।

कार्बोहाइड्रेट को छोड़कर सभी यौगिकों को मिलाएं और आसुत जल के 1 लीटर में भंग करें। पूरी तरह से भंग होने तक गर्म करें और हिलाएं।

50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा होने पर, 10% ग्लूकोज (फ़िल्टर्ड) का 100 मिलीलीटर जोड़ा जाता है।

Aseptically कॉटन-कैप्ड टेस्ट ट्यूब और आटोक्लेव में ५१ ° C पर १५ मिनट के लिए १५ पाउंड दबाव के माध्यम से 5 मिलीलीटर OF मध्यम वितरित करें।

एक ऊर्ध्वाधर स्थिति में जमने दें।

माध्यम का पीएच 7.1 होना चाहिए। तैयार माध्यम का रंग हरा है।

एक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें।

अनुप्रयोग

एक कार्बोहाइड्रेट के खिलाफ सूक्ष्मजीव के चयापचय व्यवहार का निर्धारण करने के लिए ओएफ माध्यम एक विशेष माध्यम है। विशेष रूप से उन लोगों के लिए जो थोड़ा कमजोर या कोई एसिड बनाते हैं।

बोया

प्रत्येक सूक्ष्मजीव के लिए, 2 OF ट्यूबों की आवश्यकता होती है, दोनों का सूक्ष्मजीव के साथ अध्ययन किया जाना चाहिए। कॉलोनी को एक सीधे हैंडल के साथ लिया जाता है और एक पंचर ट्यूब के केंद्र में नीचे तक पहुंचने के बिना बनाया जाता है; कई पंचर किए जा सकते हैं, जब तक कि गतिशीलता को देखने में कोई दिलचस्पी न हो।

बाँझ तरल पेट्रोलियम जेली या बाँझ पिघल पैराफिन (लगभग 1 से 2 मिलीलीटर) की एक परत को ट्यूबों में से एक में जोड़ा जाता है और "एफ" अक्षर के साथ लेबल किया जाता है। अन्य ट्यूब को मूल छोड़ दिया जाता है और "ओ" लेबल किया जाता है। दोनों ट्यूबों को 35 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है और 3 से 4 दिनों तक प्रतिदिन देखा जाता है।

व्याख्या

चयापचय और गैस का उत्पादन

तालिका: खुले (ऑक्सीडेटिव) और बंद ट्यूबों के उनके व्यवहार के अनुसार सूक्ष्मजीवों का वर्गीकरण

स्रोत: लेखक द्वारा निर्मित एमएससी। मारिलेस गिल

गैस को बुलबुले के गठन या अगर के विस्थापन के साथ मनाया जाता है।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एक जीव जो केवल ग्लूकोज को ऑक्सीकरण करता है लेकिन इसे किण्वन नहीं करता है, अन्य कार्बोहाइड्रेट को किण्वित करने में सक्षम नहीं होगा, किसी भी मामले में यह केवल इसे ऑक्सीकरण करेगा। इसलिए, इस स्थिति में अन्य कार्बोहाइड्रेट के अध्ययन के लिए सील ट्यूब को छोड़ दिया जाएगा।

गतिशीलता

इसके अतिरिक्त, प्रेरणा को मध्यम माध्यम में देखा जा सकता है।

सकारात्मक गतिशीलता: विकास जो टीकाकरण के क्षेत्र तक सीमित नहीं है। ट्यूब के किनारों की ओर विकास होता है।

नकारात्मक प्रेरणा: केवल प्रारंभिक इनोकुलम में वृद्धि।

क्यूए

निम्नलिखित उपभेदों का उपयोग गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में किया जा सकता है: एस्चेरिचिया कोलाई, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा और मोरेक्सैला एसपी। अपेक्षित परिणाम हैं:

1. कोलाई: ग्लूकोज किण्वक (दोनों पीले और स्पार्कलिंग ट्यूब)।
2. एरुगिनोसा: ग्लूकोज ऑक्सीडाइज़र (खुली पीली ट्यूब और हरी या नीली सील)।
3. Moraxella sp: saccharolytic नहीं (हरे या नीले खुले ट्यूब, हरे रंग की सील ट्यूब)।

सीमाएं

-कुछ सूक्ष्मजीवों का विकास मध्यम में नहीं हो सकता। इन मामलों में, परीक्षण दोहराया जाता है लेकिन मध्यम में 2% सीरम या 0.1% खमीर निकालने को जोड़ा जाता है।

-ऑक्सिडेशन प्रतिक्रियाएं अक्सर केवल सतह के करीब देखी जाती हैं और बाकी का माध्यम हरा रह सकता है, उसी तरह इसे सकारात्मक रूप से लिया जाता है।

संदर्भ

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