हेमेटोक्सिलिन-ईोसिन धुंधला: विशेषताओं, उपयोग, तकनीक - रसायन विज्ञान - 2025

Hematoxylin - इओसिन रंगों hematoxylin और eosin के संयोजन का उपयोग कर एक धुंधला तकनीक है। रंजक की यह जोड़ी एक आदर्श जोड़ी बनाती है, क्योंकि हेमटॉक्सिलिन एक मूल डाई के रूप में कार्य करता है और इओसिन एक एसिड डाई है।

मूल या एसिड रंजक का पदनाम समाधान में प्राप्त पीएच को संदर्भित नहीं करता है, बल्कि इसके बजाय कि उनके पास या क्रोमोफोर समूह के स्थान के अनुसार आयनिक या धनायन आवेशों के संदर्भ में प्रचलित अनुपात की बात करता है।

हेमेटोक्सिलिन - ईओसिन (HE) सना हुआ स्तंभित उपकला स्रोत: टोड स्ट्रैस और व्लादिमीर विपोव

इस अर्थ में, हेमटॉक्सिलिन को एक मूल (cationic) डाई माना जाता है और इसलिए एसिड संरचनाओं के लिए एक आत्मीयता होती है, जैसे कि कोशिकाओं के नाभिक। जबकि ईओसिन, एक एसिड (आयनिक) डाई होने के नाते, क्षारीय या बुनियादी संरचनाओं के लिए एक समानता है, जैसे कोशिका द्रव्य।

इस कारण से, रंगों के इस संयोजन का उपयोग ऊतक के धुंधला होने के लिए व्यापक रूप से किया जाता है, क्योंकि यह नाभिक और कोशिका द्रव्य को स्पष्ट रूप से प्रतिष्ठित करने की अनुमति देता है। नाभिक दाग गहरे नीले या बैंगनी और साइटोप्लाज्म गुलाबी।

हेमाटोक्सिलिन-एओसिन धुंधला इसकी आसान हैंडलिंग और कम लागत के कारण, ऊतक विज्ञान और साइटोलॉजी के क्षेत्र में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली धुंधला तकनीकों में से एक है। इसका उपयोग कोशिकाओं, मोटे तंत्रिका तंतुओं और ऊतकों में कुछ सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति के लिए किया जाता है, जैसे: परजीवी, कवक और बैक्टीरिया, अन्य।

विशेषताएँ

hematoxylin

हेमाटोक्सिलिन एक तटस्थ डाई है। हालांकि, घटक जो रंग प्रदान करता है (क्रोमोफोर) अणु के cationic या बुनियादी केंद्र में स्थित है। इसलिए एसिड संरचनाओं के लिए इसकी आत्मीयता। इसका रासायनिक सूत्र C ₁₆ H ₁₄ O _{6 है} और इसका वैज्ञानिक नाम 7,11b-dihydroindeno क्रोमिन -3, 4,6a, 9,10 (6 H) -पॉलोल है।

यह मुख्य रूप से कोशिकाओं के नाभिक पर दाग लगाता है, क्योंकि वे न्यूक्लिक एसिड में बहुत समृद्ध हैं। यह वायरल मूल के साइटोप्लाज्मिक निष्कर्षों को भी दाग ​​सकता है।

हेमटॉक्सिलिन को दाग देने के लिए इसे ऑक्सीकृत अवस्था में होना चाहिए और एक धातु से बंधा होना चाहिए। उत्तरार्द्ध ऊतक को ठीक करने की सेवा करेगा, अर्थात यह एक मोर्डेंट के रूप में कार्य करेगा।

जब हेमटॉक्सिलिन को ऑक्सीकृत किया जाता है तो इसे हेमेटिन कहा जाता है। ऑक्सीकरण अभिकर्मक के ऑक्सीजन (उम्र बढ़ने) या इसके ऑक्सीकरण (रासायनिक ऑक्सीकरण) में मदद करने वाले पदार्थों के संपर्क में आने से होता है।

इओसिन

इओसिन एक डाई है जो लाल या गुलाबी रंग का दाग लगाती है। यह पानी में अघुलनशील है, हालांकि पानी में घुलनशील संस्करण है। आमतौर पर, ईोसिन को अल्कोहल (95 ° इथेनॉल) में भंग करके तैयार किया जाता है।

यह साइटोप्लाज्म, मांसपेशी फाइबर, साइटोप्लाज्मिक ऑर्गेनेल और कोलेजन पर दाग लगाता है, लेकिन सेल नाभिक को दाग नहीं देता है। ऐसा इसलिए है क्योंकि यह नकारात्मक रूप से चार्ज किया जाता है, इसलिए, इसमें सकारात्मक रूप से चार्ज किए गए संरचनाओं के लिए एक समानता है।

ईओसिन "वाई" और "बी" दो प्रकार के होते हैं। Eosin "Y" को पीले ईोसिन के रूप में जाना जाता है। इसका वैज्ञानिक नाम tetrabromo name uorescein है और इसका रासायनिक सूत्र C ₂₀ H ₈ Br ₄ O _{5 है} ।

दूसरी ओर, ईोसिन "बी" को कभी-कभी ब्लूश एरिथ्रोसिन बी कहा जाता है। इसका वैज्ञानिक नाम dibromodynitro ce uorescein है और सूत्र C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O _{9 है} । दोनों बहुत समान हैं और एक या दूसरे का उपयोग करने के बीच का अंतर वास्तव में ध्यान देने योग्य नहीं है। हालांकि, सबसे लोकप्रिय ईोसिन "वाई" है।

Eosin में एक जीवित कोशिका और एक मृत व्यक्ति के बीच अंतर करने की संपत्ति होती है, क्योंकि यह केवल कोशिका के मृत होने पर अपने कोशिका द्रव्य को दागने के लिए झिल्ली को पार करने में सक्षम होता है, कोशिका के कोशिका द्रव्य को रंगहीन छोड़ देता है यदि वह जीवित रहता है।

अनुप्रयोग

तंत्रिका फाइबर धुंधला हो जाना

मोटी तंत्रिका तंतुओं को दाग दिया जा सकता है और हेमटॉक्सिलिन-ईोसिन से पहचाना जा सकता है। हालांकि, पतले तंत्रिका तंतुओं को धुंधला करने के लिए यह उपयोगी नहीं है, क्योंकि बाद की कल्पना करने के लिए चांदी के धुंधलापन की आवश्यकता होती है।

हिस्टोलॉजिकल स्किन सेक्शन के दाग

त्वचा की सींग की परत के धुंधलापन में, डाई जो कार्य करता है वह ईओसिन है, क्योंकि इस स्तर पर कोशिकाओं में एक नाभिक नहीं होता है।

त्वचा की दानेदार परत में, हेमटोक्सिलिन ग्रैन्यूल कोशिकाओं के अंदर केराटोहिलिन कणिकाओं को दृढ़ता से दाग देता है। इसके विपरीत, त्वचा की स्पिनस परत को हेमटॉक्सीलिन के साथ कमजोर रूप से दाग दिया जाता है, जबकि बेसल या रोगाणु परत काफी दाग ​​है।

ईओसिन सभी कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म को दाग देता है और रंग की तीव्रता परत से परत तक भिन्न हो सकती है।

हेमटॉक्सिलिन-एओसिन मल के नमूने

गोमेज़ एट अल।, 2005 में यह प्रदर्शित किया गया कि एंटोमैबा हिस्टोलिटिका और एंटामोइबा डिस्प्रेशन की वजह से तीव्र डायरिया रोग वाले रोगियों में ताज़े हेबेस्टाइका और एंटामोइबा डिस्प्रेशन की वजह से हेमेटोक्सिलिन-ईओसिन धुंधला अमोनिया के मामलों की पहचान करने में अधिक प्रभावी था।

यह एरिथ्रोपागोसाइटोसिस (अमीबा जो एरिथ्रोसाइट्स से जुड़ा हुआ है) का पता लगाने में अत्यधिक संवेदनशील दिखाया गया है।

संक्रमण के निदान के लिए ऊतकीय वर्गों का धुंधला होना

वॉल्विन एट अल।, 2004 में संक्रमण पैदा करने वाले सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए हिस्टोलॉजिकल दागों के उपयोग का प्रस्ताव रखा।

हेमटॉक्सिलिन-एओसिन धुंधला का उपयोग करते हुए, वे क्लोस्ट्रीडियम, एक्टिनोमाइसेस, स्पिरिला या कैंडिडा के कारण संक्रमण की कल्पना करने में सक्षम थे। वे त्वचा के वर्गों में परजीवी सरकोपेट्स एस्कैबी की उपस्थिति और विभिन्न ऊतकों के वर्गों में साइटोमेगालोवायरस और दाद द्वारा वायरल निष्कर्षों का निरीक्षण करने में सक्षम थे।

तकनीक

ऊतकीय नमूनों के लिए

हिस्टोलॉजिकल सेक्शन धुंधला कदम की एक श्रृंखला के माध्यम से जाता है। पहली बात हिस्टोलॉजिकल सेक्शन प्राप्त करना है। इसे बाद में एक माइक्रोटेम के साथ कटौती (अल्ट्रा-फाइन) प्राप्त करने के लिए मोम किया जाना चाहिए। तकनीक में निम्नलिखित चरण होते हैं:

1-अतिरिक्त पैराफिन का उन्मूलन: इसके लिए आप xylol या Heme-D का उपयोग कर सकते हैं, 3-5 मिनट के लिए विसर्जित कर सकते हैं।

2-नमूने का पुनर्जलीकरण: यह अवरोही क्रम (100 °, 90 °, 70 °) में अल्कोहल (इथेनॉल) के विभिन्न सांद्रता में नमूने को डुबो कर प्राप्त किया जाता है। 7 मिनट के लिए सभी मामलों में।

3-अतिरिक्त शराब का उन्मूलन: इसके लिए इसे 7 मिनट के लिए पानी में डुबोया जाता है।

4-हेमटॉक्सिलिन के साथ धुंधला हो जाना: नमूना को हेमेटोक्सिलिन युक्त ट्रे में 6-10 मिनट के लिए डुबोया जाता है। एक्सपोज़र का समय नमूने के आकार और मोटाई पर निर्भर करता है।

5-अतिरिक्त हेमटॉक्सिलिन का उन्मूलन: इसे 5 मिनट के लिए पानी से धोया जाता है और फिर एसिड अल्कोहल के माध्यम से एक तीव्र मार्ग (10-20 सेकंड) किया जाता है। बाद में इसे 5 मिनट के लिए फिर से पानी से धोया जाता है। फिर इसे 1 मिनट के लिए 96 डिग्री पर इथेनॉल में डुबोया जाता है।

6-इओसिन के साथ धुंधला हो जाना: इसके लिए, नमूना को ईोसिन ट्रे में 5 मिनट के लिए डुबोया जाता है।

7-नमूने का निर्जलीकरण: ऐसा करने के लिए, यह अल्कोहल ट्रे (इथेनॉल) के माध्यम से जाता है, लेकिन इस बार बढ़ते क्रम में। (70 °, 90 °, 100 °)। (क्रमशः 5 सेकंड, 5 सेकंड, 1 मिनट के लिए)।

8-नमूने का सरलीकरण: इसके लिए इसे 5-10 मिनट के लिए xylol के संपर्क में लाया जाता है और कनाडा के बालसम या अन्य समान सामग्री के साथ स्थायी रूप से सील करने के लिए सूख जाता है।

मल के नमूनों की तलाश में

एक स्मीयर को स्लाइड पर रोगी के मल के साथ बनाया जाता है और 5 मिनट के लिए 80% शराब के साथ तय किया जाता है। शीट 5 मिनट के लिए हेमटॉक्सिलिन में डूबा हुआ है और तुरंत पानी से धोया जाता है।

इसके बाद, यह जल्दी से अम्लीय शराब और फिर अमोनिया पानी में डूब जाता है। इसे पानी से धोया जाता है। यह eosin में 5 मिनट के लिए रंगीन है। पूर्व कला में समझाया गया नमूना अंत में निर्जलित है और अंत में xylene के साथ rinsed है।

अभिकर्मकों की तैयारी

- हेमाटोक्सिलिन

आसुत जल के एक लीटर में 50 ग्राम पोटेशियम या अमोनियम एल्यूमीनियम सल्फेट भंग करते हैं। जब पूरी तरह से भंग हो जाता है, तो 1 ग्राम क्रिस्टलीकृत हेमटॉक्सिलिन जोड़ें। पूरी तरह से घुलने पर, 1 ग्राम साइट्रिक एसिड को 50 ग्राम क्लोरल हाइड्रेट और 0.2 ग्राम सोडियम आयोडेट के साथ मिलाया जाता है।

मिश्रण को 5 मिनट तक उबाला जाता है, फिर ठंडा होने के लिए छोड़ दिया जाता है और जो भी ठोस कण रह जाते हैं उन्हें निकालने के लिए फ़िल्टर किया जाता है। इस प्रकार तैयार किए गए अभिकर्मक का तुरंत उपयोग किया जा सकता है।

- ईोसिन

यह एक शराबी आधार के साथ या पानी के आधार के साथ तैयार किया जा सकता है।

मादक इओसिन

95 डिग्री पर इथेनॉल के 100 मिलीलीटर में 0.5 ग्राम ईओसिन "वाई" भंग। फिर ग्लेशियल एसिटिक एसिड की कुछ बूँदें जोड़ें।

2% जलीय ईओसिन

1250 मिलीलीटर आसुत जल में 25 ग्राम पानी में घुलनशील ईोसिन "Y" घोलें। फिर ग्लेशियल एसिटिक एसिड की कुछ बूँदें जोड़ें।

एसिड अल्कोहल

0.5 मिलीलीटर केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड को मापें और पूर्ण शराब के साथ 100 मिलीलीटर तक बनाएं।

अमोनिया का पानी

ध्यान केंद्रित अमोनिया के 0.5 एमएल और आसुत जल के साथ 100 एमएल तक करें।

संदर्भ

1. नवरेट, त्वचा की जी। ऊतक विज्ञान। Rev फेस मेड UNAM 2003; 46 (4): 130-133। पर उपलब्ध: medigraphic.com
2. गोमेज़-रिवेरा एन, मोलिना ए, गार्सिया एम, कैस्टिलो जे, कैस्टिलो जे, गार्सिया आर, फोंसेका I, वालेंज़ुएला ओ।
3. एंटामोइबा हिस्टोलिटिका / ई की पहचान। तीव्र दस्त में हेमेटोक्सिलिन-एओसिन के साथ इसकी ताजा अमीबा तकनीक बनाम उसके धुंधला हो जाना। रेव मेक्स पेडियाट्र 2005; 72 (3); 109-112। पर उपलब्ध: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M। संरचनात्मक नमूनों में संक्रमण के निदान के लिए हिस्टोलॉजिकल तकनीकों का उपयोग। रेव क्यूब मेड मिल, 2004; ३३ (२)। पर उपलब्ध: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW अभिकर्मक। हेमाटोक्सिलिन-ईोसिन दाग। 2017, स्पेन। पर उपलब्ध: itwreagents.com
6. इओसिन। विकिपीडिया, एक निशुल्क विश्वकोश। 7 नवंबर 2018, 08:18 यूटीसी। 4 अगस्त 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoxylin।" विकिपीडिया, एक निशुल्क विश्वकोश। 3 मई 2019, 11:23 यूटीसी। 4 अगस्त 2019, 22:48 wikipedia.org