कश्मीर proteinase एक एंजाइम सेरीन प्रोटिएजों का समूह, यानी से संबंधित है, यह अपने बीच एक catalytically सक्रिय अमीनो एसिड सेरीन में है और जलीय विश्लेषण द्वारा पेप्टाइड बांडों को तोड़ने का कार्य किया है। बदले में, यह एंजाइम सबटिलिसिन प्रोटीन (पेप्टिडेज़ एस 8) के परिवार से संबंधित है।
प्रोटीन K का आणविक भार (MW) 28,900 डेल्टोन है और 1974 में पहली बार फंगस एंगोडोन्टियम एल्बम के अर्क में अलग किया गया था, जिसे पहले ट्राईटाइरचियम एल्बम लिम्बर के रूप में जाना जाता था।
प्रोटीन की आणविक संरचना के। स्रोत: लाइकेचिनीडिस
इसकी उच्च प्रोटियोलिटिक क्षमता है, जो बालों में मौजूद केराटिन को नीचा दिखाने में सक्षम है। अंग्रेजी में केराटिन शब्द का अर्थ "केराटिन" है, इसलिए इसे "प्रोटीनएज़ के" कहा जाता है।
देशी प्रोटीन को क्लीवेज करने की अपनी उच्च शक्ति के कारण, यह एंजाइम विभिन्न आणविक जीव विज्ञान तकनीकों में उपयोगी है। यह मुख्य रूप से उच्च आणविक भार (MW) न्यूक्लिक एसिड को अलग करने और तैयार करने के लिए उपयोग किया जाता है।
प्रोटीन कश्मीर परमाणु डीएनए को मुक्त करके काम करता है, जबकि प्रोटीन को नष्ट करता है और आरएनएसेस और डीनेसिस को निष्क्रिय करता है, अर्थात यह डीएनए और आरएनए तैयारियों में न्यूक्लियर को समाप्त करता है।
दूसरी ओर, यह देखा गया है कि प्रोटीनएज़ K कुछ विकृत मूल प्रोटीनों को हाइड्रोलाइज़ कर सकता है, जो कि प्रियन प्रोटीन (पीआरपीसी) के अध्ययन में इसके उपयोग के लिए शोधकर्ताओं की रुचि जगाता है।
हालांकि, उनके उच्च प्रोटीयोलाइटिक क्षमता के बावजूद, प्रोटीन होते हैं जो प्रोटीनएएस के एक्शन के लिए प्रतिरोधी होते हैं। उनमें से कुछ असामान्य प्रोटीन होते हैं जिन्हें प्रिंसेस (PrPSc) कहा जाता है, जो ट्रांसमीसबल स्पॉन्गिफॉर्म एन्सेफैलोपैथी से जुड़े होते हैं।
प्रोटीन K विशेषताएँ
प्रोटीन K में तीन परतों से बना एक तृतीयक संरचना है, जिसमें हेलिकॉप्टर की दो परतों के बीच एक सात-चेन inter शीट इंटरपोज़्ड है। चूंकि यह पेप्टिडेस के S8 परिवार से संबंधित है, इसलिए इसकी सक्रिय साइट में एक उत्प्रेरक त्रय होने की विशेषता है, जिसका अनुक्रमिक क्रम (Asp, His and Ser) है, जो उन्हें पेप्टिडेस के अन्य परिवारों से अलग करता है।
सेरीन प्रोटीज के समूह के इस एंजाइम की विशेषता है कि यह पेप्टाइड बॉन्ड को हाइड्रोफिंकिंग है जो कि एलिफैटिक और एरोमैटिक एमिनो एसिड के कार्बोक्जिलिक समूह के करीब है।
दूसरी ओर, यह कुछ संक्षारक पदार्थों की उपस्थिति में अभिनय करने में सक्षम है, जैसे कि सोडियम डोडेसिल सल्फेट (एसडीएस), ट्रिस-एचसीएल और ईडीटीए, जो प्रोटीन के विकृतीकरण में मदद करने के लिए उपयोग किए जाते हैं, जिससे उन्हें अपनी मूल संरचना को खोना पड़ता है।
यह वैद्युतकणसंचलन तकनीक के लिए प्रोटीन तैयार करने में एक प्रारंभिक कदम है। पीएच रेंज जिस पर proteinase K कार्य करता है वह काफी चौड़ा (2.0 से 12.0) है, जिसमें इष्टतम पीएच 7.5 से 12.0 के बीच है, और इसका आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु 8.9 है। जैसा कि देखा जा सकता है, यह एक बहुत व्यापक पीएच रेंज के खिलाफ सक्रिय है।
एक अन्य विशेषता जो प्रोटीनएज़ K में बाहर होती है, उच्च तापमान (50 - 60 ° C) की उपस्थिति में इसकी स्थिरता है।
एंजाइमेटिक गतिविधि
प्रोटीन K को कैल्शियम आयन की उपस्थिति की आवश्यकता होती है, हालांकि यह इसकी गतिविधि को प्रभावित नहीं करता है, अगर इसकी स्थिरता बनाए रखना आवश्यक है।
प्रोटीनएज K को सब्सट्रेट को पूरी तरह से पचाने के लिए, लगभग 5 मिनट से 2 घंटे का संपर्क समय आवश्यक है।
हालाँकि, इस अर्थ में, Daza et al।, Proteinase K के संपर्क में विभिन्न समय पर प्राप्त डीएनए की शुद्धता की तुलना में, और निष्कर्ष निकाला कि एक लंबे समय तक ऊष्मायन (24 h तक) डीएनए की गुणवत्ता में काफी सुधार करता है।
हालांकि, अलग-अलग प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किए गए प्रोटीनएज़ के एंजाइम की एकाग्रता के संबंध में, यह कहा जा सकता है कि यह बहुत विविध है।
इसका उपयोग बहुत कम सांद्रता (5 tog / ml) से 500 /g / ml की सांद्रता में किया जा सकता है। लेकिन सबसे आम कामकाजी सांद्रता 50-100μg / ml से होती है, विशेष रूप से प्रोटीन पाचन और न्यूक्लीज निष्क्रियता के लिए। हालांकि ऊतकों के उपचार के लिए 2 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता की आवश्यकता होती है।
अनुप्रयोग
इसके आवेदन बहुत व्यापक हैं और इन्हें निम्नानुसार संक्षेपित किया जा सकता है:
-इसका उपयोग विभिन्न तरीकों से प्रोटीन और डीएनए निष्कर्षण के पाचन में किया जाता है जैसे: सल्टिंग-आउट, पीके-एसडीएस, सेटिल-ट्राइमेथाइल अमोनियम ब्रोमाइड (सीटीएबी), संशोधित पोटेशियम एसीटेट और सोडियम आयोडाइड से निष्कर्षण।
-न्यूक्लियेशन (RNases and DNases) का निष्क्रिय होना।
-सुंदर संकरण तकनीक (HIS) में, अवांछनीय प्रोटीन को खत्म करने के अलावा, न्यूक्लिक एसिड की रिहाई में सहायता करने के लिए।
-प्रोटीन का प्रोटीन।
-विभिन्न अध्ययनों में शोध स्तर।
प्रोटीनएज़ के लाभ
डीएनए निष्कर्षण तकनीकों के बीच कई तुलनात्मक अध्ययन किए गए हैं जो प्रोटीन K का उपयोग करते हैं, दूसरों के साथ जो इसका उपयोग नहीं करते हैं और सभी निष्कर्ष निकालते हैं कि एंजाइम का उपयोग करते समय अधिक लाभ होते हैं। लाभ में निम्नलिखित शामिल हैं:
-अधिक आणविक भार, उच्च गुणवत्ता और शुद्धता का DNA प्राप्त किया जाता है।
निकाला गया डीएनए 3 महीने तक स्थिर रहता है।
निकाले गए डीएनए का उपयोग निम्नलिखित तकनीकों में किया जा सकता है: दक्षिणी धब्बा, पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर), वैद्युतकणसंचलन, अन्य।
प्रोटीन K प्रतिरोधी प्रोटीन
विभिन्न जांचों से यह निष्कर्ष निकला है कि प्रोटीन (K) की क्रिया के प्रतिरोधी होने से Prions (असामान्य विषाक्त PrPSc प्रोटीन) PrPC (मूल) प्रोटीन से भिन्न होते हैं, जबकि PrPC अपनी कार्रवाई के प्रति संवेदनशील होते हैं।
अन्य लेखकों ने वर्णन किया है कि PrPSc की संरचना में संवेदनशील भाग हैं और अन्य प्रोटीज K के लिए प्रतिरोधी हैं। हालांकि, दोनों हिस्से समान रूप से विषाक्त और संक्रामक हैं।
दूसरी ओर, बैस्टियन एट अल। 1987 में स्पिरोप्लाज्मा मिरम की एक प्रजाति से 28, 30, 66 और 76 केडीए के 4 प्रोटीन को अलग किया। सभी को प्रोटीनएज़ K की कार्रवाई के लिए प्रतिरोधी पाया गया था और कुछ prions के साथ एक क्रॉस-प्रतिक्रिया भी हुई थी।
यह ज्ञात है कि यह प्रजाति मोतियाबिंद और महत्वपूर्ण न्यूरोलॉजिकल क्षति का कारण बन सकती है और बास्टियन के वैज्ञानिक निष्कर्षों के कारण, अन्य जांचों के बीच, इस सूक्ष्मजीव को पारगम्य स्पॉन्जिफॉर्म एन्सेफैलोपैथी के साथ जोड़ने का प्रयास किया गया है।
हालाँकि, इस अपक्षयी न्यूरोलॉजिकल पैथोलॉजी के एटियलजि को आज के समय में प्रियन के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है।
इस अर्थ में, बटलर एट अल। 1991 में माइकोप्लाज्मा हायोरहिनिस के दो उपभेदों से 40 केडीए के प्रोटीनएएस के प्रतिरोधी प्रोटीन की एक श्रेणी की पहचान और विशेषता की गई थी। यह रोगज़नक़ सूअरों को प्रभावित करता है, उनके ऊतकों को संक्रमित करता है, लेकिन इस मामले में परीक्षण किए गए prions के साथ कोई क्रॉस-रिएक्शन नहीं हुआ।
इस संबंध में कई अज्ञात लोगों को समझाने के लिए और अधिक शोध की आवश्यकता है।
संदर्भ
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