ऑक्सीडेज टेस्ट: तर्क, प्रक्रिया और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

ऑक्सीकारक परीक्षण पर नैदानिक पद्धति है कि शो एंजाइम जटिल कहा जाता साइटोक्रोम ऑक्सीकारक ग की उपस्थिति। यह प्रणाली ऑक्सीडाइज़ किए गए साइटोक्रोम के परिवर्तन को प्रेरित करती है, क्योंकि यह ऑक्सीजन को पकड़ती है और यह श्वसन श्रृंखला में अंतिम इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता (H ⁺) के रूप में कार्य करती है।

ऑक्सीडेज शब्द एंजाइम साइटोक्रोम ऑक्सीडेज के संदर्भ में एक छोटा तरीका है, जिसे इंडोफेनॉल ऑक्सीडेज के रूप में भी जाना जाता है। प्राचीन समय में यह माना जाता था कि एंजाइम साइटोक्रोम ऑक्सीडेज और इंडोफेनॉल ऑक्सीडेज दो अलग-अलग एंजाइम थे, लेकिन आज उन्हें एक ही माना जाता है।

सकारात्मक और नकारात्मक ऑक्सीडेज परीक्षण। स्रोत: कोई मशीन-पठनीय लेखक प्रदान नहीं किया गया। Alpha.prim ~ commonswiki ग्रहण किया (कॉपीराइट दावों के आधार पर)।

उनके हिस्से के लिए, साइटोक्रोम हेमोप्रोटिंस होते हैं जिनमें लोहा होता है और साइटोक्रोम ऑक्सीडेज सिस्टम को पूरा करता है। साइकोक्रोम प्रजातियों से प्रजातियों में भिन्न हो सकते हैं।

साइटोक्रोमेस (साइटोक्रोमेस ए 1, ए 2, ए 3 और 0) की विभिन्न किस्में हैं। कुछ बैक्टीरिया केवल एक ही पैदा कर सकते हैं, लेकिन अन्य एक बार में दो या तीन तक। इस अर्थ में, साइटोक्रोम a और a3 की उपस्थिति को साइटोक्रोम ऑक्सीडेज c के रूप में जाना जाता है। यह साइटोक्रोम का प्रकार है जो ऑक्सीडेज परीक्षण का पता लगाता है।

जेना नीसेरिया और स्यूडोमोनास में साइटोक्रोम ऑक्सीडेज c होता है। ये जेनेरा पॉज़िटिव ऑक्सीडेज़ टेस्ट देते हैं, जिससे उन्हें क्रमशः एसिनोबोबैक्टीर और स्टेनोट्रोफ़ोमोनास जेनेरा से अलग करने में मदद मिलती है।

ऐसे अन्य जेनेरा भी हैं जो ऑक्सीडेज पॉजिटिव हैं।

आधार

साइटोक्रोम ऑक्सीडेज सी प्रणाली के लक्षण

साइटोक्रोम ऑक्सीडेज सी प्रणाली निम्नलिखित तरीके से काम करती है: ऑक्सीडेज पॉजिटिव सूक्ष्मजीव एरोबिक श्वसन के माध्यम से ऊर्जा उत्पन्न करने के लिए ऑक्सीजन का उपयोग करते हैं। यह प्रणाली इस मामले में ऑक्सीजन में दाता पदार्थों जैसे NADH ⁺ से रिसेप्टर पदार्थों तक इलेक्ट्रॉनों के परिवहन के लिए धन्यवाद का काम करती है ।

यह ऊर्जा (एटीपी) और पानी या हाइड्रोजन पेरोक्साइड के उत्पादन में परिणाम करता है, जो कि साइटोक्रोम ऑक्सीडेज सिस्टम पर निर्भर करता है जो कि सूक्ष्मजीव के पास है।

यही कारण है कि अधिकांश ऑक्सीडेज पॉजिटिव बैक्टीरिया भी सकारात्मक उत्प्रेरित होते हैं, जो उत्पादित हाइड्रोजन पेरोक्साइड को खत्म करने के लिए एक आवश्यक स्थिति है, क्योंकि यह पदार्थ बैक्टीरिया के लिए विषाक्त है।

साइटोक्रोम ऑक्सीडेज सी प्रणाली कुछ एरोबिक बैक्टीरिया, कुछ मुखर एनारोबेस, कुछ माइक्रोएरोफिलिक लोगों में मौजूद है, और कोई सख्त अवायवीय नहीं है। उत्तरार्द्ध समझ में आता है, क्योंकि सख्त अवायवीय ऑक्सीजन की उपस्थिति में नहीं रह सकते हैं, इसलिए उनमें साइटोक्रोम ऑक्सीडेज सिस्टम का अभाव है।

परीक्षण सिद्धांत

इस परीक्षण में यह उन पदार्थों का उपयोग करता है जो कृत्रिम इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में कार्य करते हैं, इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला के भीतर प्राकृतिक लोगों को प्रतिस्थापित करते हैं।

मुख्य रूप से, पैराफेनिलेंडीमाइन और इंडोफेनॉल जैसे रंगों का उपयोग किया जाता है, जो रिसेप्टर सब्सट्रेट और कृत्रिम इलेक्ट्रॉन दाताओं के रूप में कार्य करते हैं।

Paraphenylenediamine साइटोक्रोम ऑक्सीडेज c सिस्टम द्वारा ऑक्सीकृत होता है। इसके कम रूप में डाई बेरंग है, लेकिन इसके ऑक्सीडाइज्ड रूप में यह रंगीन है।

यह कैसे साइटोक्रोम ऑक्सीडेज सी प्रणाली की उपस्थिति का सबूत है; एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के बाद से इस्तेमाल किया अभिकर्मक के आधार पर एक लैवेंडर या नीले-बैंगनी रंग उत्पन्न करेगा।

दूसरी ओर, यदि श्वसन श्रृंखला में अंतिम इलेक्ट्रॉन स्वीकार करने वाला पदार्थ ऑक्सीजन से अलग है, तो ऑक्सीडेज परीक्षण नकारात्मक होगा (कोई रंग उत्पादन नहीं है); यह अवायवीय सूक्ष्मजीवों के मामले में है।

इसी तरह, अगर सूक्ष्मजीव द्वारा इस्तेमाल किया गया साइटोक्रोम साइटोक्रोम ऑक्सीडेज c से अलग है, तो यह नकारात्मक परीक्षण भी देगा।

प्रक्रिया

ऑक्सीडेस परीक्षण के लिए विभिन्न अभिकर्मकों और प्रोटोकॉल हैं, सभी एक ही उद्देश्य के लिए।

अभिकर्मकों

कोवाक्स अभिकर्मक, गॉर्डन और मैकलियोड अभिकर्मक, नाडी अभिकर्मक, बढ़ई, सुहरलैंड और मॉरिसन अभिकर्मक, और ऑक्सीडेज डिस्क का उपयोग करते हैं।

-कोवाक्स ऑक्सीडेज अभिकर्मक

यह 1% टेट्रामेथाइल-पी-फेनिलिडेनमाइन डाइहाइड्रोक्लोराइड से बना है।

कोवाक्स के अभिकर्मक को 50 मिलीलीटर आसुत जल में उपरोक्त पदार्थ के 1 ग्राम को भंग करके तैयार किया जाता है। यह पूरी तरह से भंग होने तक सूक्ष्मता से गरम किया जाता है। पर्याप्त क्षमता की एम्बर बोतल में स्थानांतरण करें और आसुत जल के साथ मात्रा को 100 मिलीलीटर तक करें। उपयोग करने से पहले कम से कम 15 मिनट तक प्रतीक्षा करें। प्रकाश से संरक्षित रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें।

इसे कोवाक्स ऑक्सीडेज अभिकर्मक के रूप में लेबल किया जाता है, इसे इंडोल टेस्ट को प्रकट करने के लिए उपयोग किए जाने वाले कोवाक्स अभिकर्मक से अलग करना है। यह अभिकर्मक सबसे संवेदनशील, कम विषैला लेकिन बाकी अभिकर्मकों की तुलना में अधिक महंगा है।

इस अभिकर्मक के साथ एक सकारात्मक प्रतिक्रिया का प्रमाण दिया जाएगा जिसमें कॉलोनी के रंग को लैवेंडर में बदल दिया जाएगा, जो तेजी से बैंगनी लगभग काला हो जाता है। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया स्पष्ट है क्योंकि कॉलोनी में कोई रंग परिवर्तन नहीं होता है या यह हल्के गुलाबी रंग में होता है। माध्यम भी गहरा सकता है, लेकिन इसका मतलब सकारात्मक प्रतिक्रिया नहीं है।

इस अभिकर्मक के साथ, प्रतिक्रिया समय महत्वपूर्ण है, एक रंग परिवर्तन जो 5 से 15 सेकंड के बीच होता है उसे एक सकारात्मक प्रतिक्रिया माना जाता है।

-गार्डन और मैकलोड अभिकर्मक

यह डाइमिथाइल-पी-फेनिलएडेनमाइन डाइहाइड्रोक्लोराइड से बना है, जिसे एन-डाइमिथाइल-पी-फेनिलिडेनमाइन या पी-एमिनोडिमेथाइलेनिलिन मोनोहाइड्रोक्लोराइड के रूप में भी जाना जाता है। यह कोवाक्स ऑक्सीडेज अभिकर्मक के लिए वर्णित के रूप में तैयार किया गया है, इसमें शामिल पदार्थ के लिए प्रतिस्थापन है।

यह अभिकर्मक कोवाक्स ऑक्सीडेज अभिकर्मक की तुलना में थोड़ा अधिक स्थिर है, हालांकि पी-फेनिलिडेनमाइन युक्त सभी अभिकर्मक अस्थिर हैं।

यह प्रतिक्रिया बाद में है, इसे 10 से 30 मिनट के भीतर नीले-बैंगनी रंग की उपस्थिति के साथ सकारात्मक रूप में व्याख्या किया गया है।

-नाडी अभिकर्मक

यह एथिल अल्कोहल (95% इथेनॉल) में 1% α-naphthol और 1% aminodimethylaniline से बना है। मिश्रण को समान भागों में तैयार किया जाता है और 100 मिलीलीटर के लिए पर्याप्त मात्रा में बनाने तक, एक मंदक के रूप में पूर्ण एथिल अल्कोहल का उपयोग किया जाता है।

-कारपेंटर, सुह्रलैंड और मॉरिसन अभिकर्मक

यह 1% p-aminodimethylalanine oxalate से बना है। कोवाक्स ऑक्सीडेज अभिकर्मक के लिए वर्णित उसी तरह से तैयार करें, जो संबंधित पदार्थ के लिए बदल रहा है।

तैयार समाधान के साथ, परीक्षण स्ट्रिप्स निम्नानुसार तैयार की जाती हैं: 6-8 सेमी व्हामन नंबर 1 फिल्टर पेपर स्ट्रिप्स 1% डाइमिथाइल-पी-फेनिलिडेनमाइन ऑक्सालेट अभिकर्मक के साथ गर्भवती हैं।

उन्हें धातु के संपर्क के बिना सूखने की अनुमति दी जाती है, desiccant के साथ पेंच-कैप जार में स्टोर करें और रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें। ये स्ट्रिप्स 6 महीने तक स्थिर होती हैं।

यह उन सभी का सबसे स्थिर अभिकर्मक है, और समाधान में 6 महीने तक रह सकता है। एक और प्लस पॉइंट यह है कि यह कॉलोनी के चारों ओर के माध्यम को रंग नहीं देता है, अगर इसका उपयोग सीधे प्लेट पर किया जाता है।

लाल रंग की उपस्थिति की व्याख्या एक सकारात्मक परीक्षण के रूप में की जाती है।

-ऑक्सीडेज डिस्क

वे व्यावसायिक डिस्क हैं जो ऑक्सीडेज परीक्षण के लिए अभिकर्मक के साथ गर्भवती हैं। बाजार पर कई वाणिज्यिक ब्रांड हैं।

इसका उपयोग काफी व्यावहारिक है, क्योंकि यह ताजा अभिकर्मकों को तैयार करने के लिए आवश्यक नहीं है, जो काम को सुविधाजनक बनाता है। प्राप्त परिणाम विश्वसनीय हैं जब तक कि डिस्क ठीक से संरक्षित न हो।

प्रोटोकॉल

प्रत्यक्ष प्लेट विधि, कागज पर अप्रत्यक्ष विधि और ऑक्सीडेज अभिकर्मकों के साथ लगाए गए डिस्क का उपयोग।

-डायरेक्ट बोर्ड विधि

उपर्युक्त अभिकर्मकों में से किसी की 2 या 3 बूंदों को इस उद्देश्य के लिए सीधे कॉलोनी (ओं) में जोड़ा जाता है, जिसमें संस्कृति माध्यम की प्लेट में ग्लूकोज शामिल नहीं है।

उपनिवेशों के रंग का परिवर्तन या व्याख्या नहीं की गई है, न कि माध्यम की। मान्य प्रतिक्रिया समय का उपयोग अभिकर्मक पर निर्भर करता है।

कागज पर अप्रत्यक्ष विधि

6 सेंटीमीटर ^{2 के} आकार के फिल्टर पेपर (व्हामन नंबर 1) को काटें और इसे एक खाली पेट्री डिश के अंदर रखें।

कागज पर कोवाक्स ऑक्सीडेज अभिकर्मक की 2 या 3 बूंदें जोड़ें, कॉलोनी का हिस्सा प्लेटिनम हैंडल या लकड़ी के टूथपिक के साथ अध्ययन किया जाए और इसे अभिकर्मक संसेचन कागज पर एक सीधी रेखा में फैलाएं। 5 से 10 सेकंड के भीतर व्याख्या।

बढ़ई, सुहरलैंड और मॉरिसन अभिकर्मक के साथ तैयार स्ट्रिप्स के साथ, एक कॉलोनी सूखी पट्टी पर फैली हुई है। एक एकल पट्टी का उपयोग कई उपभेदों का परीक्षण करने के लिए किया जाता है। 10 सेकंड में व्याख्या।

-डिस्क (एम

उपजी आसुत जल के साथ वाणिज्यिक डिस्क को नम रूप से नम करें और अध्ययन किए जाने के लिए कॉलोनी पर सुपरइम्पोज करें। 35 डिग्री सेल्सियस पर प्लेटों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, अगर कमरे के तापमान या प्रशीतित प्लेटों पर प्लेटों का उपयोग किया जाता है, तो प्रतिक्रिया थोड़ी धीमी होती है। 10 से 20 सेकंड के बीच रंग परिवर्तन की व्याख्या करें।

रक्त या चॉकलेट अगर पर निहित कालोनियों का उपयोग किया जा सकता है।

-डिस्क (अप्रत्यक्ष विधि)

पहले बताए अनुसार डिस्क को गीला करें। इसे एक खाली पेट्री डिश में रखें। एक प्लैटिनम हैंडल या लकड़ी के टूथपिक और डिस्क पर जगह के साथ अध्ययन करने के लिए कॉलोनी की पर्याप्त मात्रा में लें। 10 से 20 सेकंड के बीच रंग परिवर्तन की व्याख्या करें।

उपयोग

जीनस नीसेरिया और एसिनोबोबैक्टर कभी-कभी बहुत समान रूप से मिलते-जुलते होते हैं क्योंकि भले ही जीनस एसीनेटोबेक्टर एक ग्राम-ऋणात्मक छड़ है, यह कभी-कभी एक कोकॉइड रूप ले सकता है और जोड़े में वितरित किया जा सकता है, जीनस नीसेरिया।

इस मामले में ऑक्सीडेज परीक्षण वास्तव में उपयोगी है। Neisseria जीनस सकारात्मक है और Acinetobacter नकारात्मक।

हालांकि, जीनस मोरेक्सेला जीनस नीसेरिया के समान है और दोनों एक सकारात्मक प्रतिक्रिया देते हैं; यही कारण है कि कार्बोहाइड्रेट किण्वन परीक्षण हमेशा निश्चित पहचान के लिए किया जाना चाहिए।

दूसरी ओर, ऑक्सीडेज परीक्षण अन्य किण्वक जैसे कि जीनस पेस्टुरेला, एरोमोनस, प्लेसेमोनोनास (ऑक्सीडेज पॉजिटिव) से एंटरोबैक्टीरियासी परिवार (सभी ऑक्सीडेज नकारात्मक) से संबंधित एक जीवाणु को अलग करने के लिए उपयोगी है।

जीनस विब्रियो और हेलिकोबैक्टर भी ऑक्सीडेज पॉजिटिव हैं।

क्यूए

एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में एस्चेरिचिया कोलाई के ज्ञात उपभेदों का उपयोग करें और सकारात्मक नियंत्रण के रूप में स्यूडोमोनास एरुगिनोसा के उपभेदों।

सीमाएं

- अभिकर्मकों को नए सिरे से तैयार किया जाना चाहिए, कमरे के तापमान पर समाधान में उनका शेल्फ जीवन कम है क्योंकि वे बहुत अस्थिर हैं। प्रशीतित वे 5 दिनों से 2 सप्ताह के बीच रह सकते हैं।

- अभिकर्मक रंगहीन होते हैं, यदि वे रंग बदलते हैं तो उन्हें त्याग दिया जाना चाहिए। क्षतिग्रस्त डिस्क दिखाते हैं क्योंकि वे समय के साथ अंधेरा करते हैं।

15-60 सेकंड के बीच कोवाक्स ऑक्सीडेज अभिकर्मक के साथ एक सकारात्मक प्रतिक्रिया को विलंबित प्रतिक्रिया माना जाता है और 60 सेकंड के बाद इसे नकारात्मक माना जाना चाहिए।

-हैमोफाइलस इन्फ्लुएंजा एक नकारात्मक ऑक्सीडेज प्रतिक्रिया देता है यदि डिमेथिल-पी-फेनिलएडिनमाइन के साथ किसी भी अभिकर्मक का उपयोग किया जाता है, लेकिन पॉजिटिव ऑक्सीडेंट (टेट्रामेथाइल-पी-फेनिलिडेनमाइन) का उपयोग करने पर सकारात्मक है।

-मेडियम युक्त ग्लूकोज परीक्षण के साथ हस्तक्षेप करते हैं, झूठी नकारात्मक देते हैं।

-Bordetella pertussis उपभेदों एक झूठी सकारात्मक प्रतिक्रिया दे सकते हैं अगर वे अत्यधिक केंद्रित रक्त अगर प्लेटों से आते हैं।

-धातु (लोहे) के हैंडल का उपयोग झूठी सकारात्मक प्रतिक्रिया देता है।

सिफारिशें

-क्योंकि अभिकर्मक बहुत अस्थिर होते हैं और आत्म-ऑक्सीकरण करते हैं, यह 1 से 2 मिलीलीटर के विभाज्य को फ्रीज करने और आवश्यकतानुसार निकालने की सिफारिश की जाती है।

अभिकर्मक के ऑटो-ऑक्सीकरण में देरी करने का एक आसान तरीका अभिकर्मकों को तैयार करते समय 0.1% एस्कॉर्बिक एसिड जोड़ना है।

-जैसे कि अभिकर्मक अस्थिर होते हैं, एक साप्ताहिक गुणवत्ता नियंत्रण की सिफारिश की जाती है।

-गुणवत्ता नियंत्रण की परीक्षा पास नहीं करने वाले अभ्यर्थियों का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए।

संदर्भ

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