किन्नौं धुंधला: औचित्य और तकनीक - जीवविज्ञान - 2025

Kinyoun धुंधला एक धुंधला दाग बैक्टीरिया के लिए इस्तेमाल किया तकनीक है और प्रतिरोधी एसिड शराब परजीवी। यह ज़ेहल-नीलसन रंगाई के संशोधन से पैदा हुआ था; दोनों तकनीकों की व्याख्या एक ही तरह से की जाती है लेकिन दो तत्वों में भिन्न होती है: मुख्य अभिकर्मक की तैयारी में और उस में किन्नौं तकनीक गर्मी का उपयोग नहीं करती है।

इस कारण इसे कोल्ड-मॉडिफाइड Ziehl-Neelsen या किन्यौन कोल्ड स्टेन के रूप में भी जाना जाता है। यह माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस, माइकोबैक्टीरियम लेप्राई, एटिपिकल मायकोबैक्टीरिया, नोकार्डियस एसपी, क्रिप्टोस्पोरिडियम परवम, क्रिप्टोस्पोरिडियम मेलेग्रिडिस, क्रिप्टोस्पोरिडियम फेलिस, क्रिप्टोस्पोरिडियम म्यूरिस और साइक्लिसिस के धुंधला होने का संकेत है।

क्रिप्टोस्पोरिडियम परवम, किन्नौं के दाग के साथ। विक्लोम कॉमन्स से पुनलॉप एनसोनोपेंपरम

यह ध्यान देने योग्य है कि नोकार्डिया इस तकनीक के साथ कमजोर रूप से दागते हैं क्योंकि वे आंशिक रूप से एसिड-अल्कोहल प्रतिरोधी हैं, इसलिए इस जीनस के लिए कार्यप्रणाली का एक संशोधन है।

बदले में, कोल्डिड तकनीक को क्रोडिडिया (क्रिप्टोस्पोरिडियम परवम और आइसोस्पोरा बेली) और माइक्रोस्पोरिडिया बीजाणु (एंटरोसाइटोजून बायनेसी और एन्सेफैलिटोजून आंतों) का पता लगाने के लिए डिडिएर द्वारा संशोधित ट्रिच्रोम तकनीक के साथ जोड़ा गया है।

आधार

मुख्य धुंधला अभिकर्मक कार्बोल्फ़ुचिन या कार्बोल फ़्यूचिन है, जिसमें माइकोबैक्टीरिया और निश्चित परजीवी के लिपिड-समृद्ध मोमी सेल की दीवार (मायकोलिक एसिड) के भीतर विद्यमान कार्बोलिक एसिड के साथ बंधन होता है।

यह बंधन एसिड ब्लीच द्वारा प्रतिसाद नहीं दिया गया है; इसलिए, सूक्ष्मजीवों को एसिड-फास्ट के रूप में परिभाषित किया गया है।

Ziehl-Neelsen तकनीक के विपरीत, जो डाई को गर्मी के माध्यम से ठीक करता है- किन्यौन तकनीक में, यह कदम आवश्यक नहीं है, क्योंकि इस तकनीक के लिए तैयार किए गए कार्बोलिक फ़्यूचिन समाधान में फिनोल की उच्च सांद्रता होती है।

फिनोल सेल की दीवार में लिपिड सामग्री को घोलता है, जिससे कार्बोल्फुचिन डाई में प्रवेश होता है। डाई के प्रवेश के बाद, यह एसिड अल्कोहल धोने के बावजूद निश्चित रहता है।

इस तरह, एसिड-फास्ट सूक्ष्मजीवों की विशेषता लाल रंग पर होती है, जबकि एसिड-फास्ट नहीं होने वाली हर चीज फीकी पड़ जाती है और नीला पड़ जाता है।

तकनीक

सामग्री

- संशोधित कार्बोल फुकसिन।

- अल्कोहल-एसिड।

- मेथिलीन ब्लू।

किन्नौं कार्बॉल फुकसिन की तैयारी

- बेसिक फ्यूचसीन: 4 जीआर।

- फिनोल: 8 मिली।

- शराब (95%): 20 मिली।

- आसुत जल: 100 मिली।

शराब में धीरे-धीरे मिश्रण करते हुए, मूल फ़ुचिन को धीरे-धीरे भंग किया जाना चाहिए। इसके बाद, क्रिस्टलीकृत फिनोल को 56 ° C पर पानी के स्नान में पिघलाया जाता है। एक बार भंग होने पर, 8 मिलीलीटर ऊपर तैयार किए गए फ्यूचिन समाधान में मिलाया जाता है।

एसिड-अल्कोहल की तैयारी

- सांद्र हाइड्रोक्लोरिक एसिड: 3 मिली।

- इथेनॉल (95%): 97 मिली।

इसे मापा, मिलाया और मिलाया जाना चाहिए।

मिथाइलीन ब्लू कंट्रास्ट डाई की तैयारी

- मिथाइलीन नीला: 0.3 ग्राम।

- आसुत जल: 100 मिली।

यह तौला और भंग किया जाता है।

किन्नौं धुंधला तकनीक

1 - नमूने से सीधे एक धब्बा तैयार करें, जो थूक, फेफड़े के तरल पदार्थ, मूत्र तलछट, मस्तिष्कमेरु द्रव या मल, दूसरों के बीच में हो सकता है; या प्राथमिक संस्कृति मीडिया में विकसित शुद्ध कालोनियों से प्राप्त सूक्ष्मजीवों के निलंबन से।

2- धब्बा को गर्मी से ठीक करें।

3-स्मीयर को स्टेनिंग ब्रिज पर रखें और तैयार कीनॉउन कार्बो फुकसिन अभिकर्मक के साथ कवर करें। इसे 3 से 5 मिनट तक आराम दें।

4- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।

5- एसिडिक अल्कोहल से 3 मिनट तक ब्लीच करें और डिस्टिल्ड वॉटर से दोबारा धोएं।

6- 1 या 2 मिनट के लिए फिर से एसिड अल्कोहल के साथ ब्लीच करें जब तक कि कोई और कलरिंग ना हो जाए।

7- डिस्टिल्ड वाटर से धोएं और स्लाइड को एक वर्टिकल पोजिशन में रखते हुए ड्रेन करने दें।

8- मेथिलीन ब्लू के साथ तैयारी को कवर करें और 4 मिनट के लिए कार्य करने के लिए छोड़ दें।

9- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं और हवा को सूखने दें।

10- 40X पर और फिर 100X पर जांच करें।

एसिड-फास्ट सूक्ष्मजीवों के धुंधलापन को सुधारने और तेज करने के लिए, एक गीला एजेंट (जैसे टर्गिटॉल नंबर 7) की 1 बूंद 30 से 40 मिलीलीटर किन्नौं कार्बोल फुच्सिन में मिलाएं।

कुछ प्रयोगशाला मेथिलीन ब्लू कंट्रास्ट डाई को चमकीले हरे या पिक्रिक एसिड में बदल देती हैं; पहला बैकग्राउंड को एक हरा रंग देता है और दूसरा पीला रंग उत्पन्न करता है।

नोकार्डियास के लिए विशेष किन्नौं तकनीक

जीनस नोकार्डिया के बैक्टीरिया के धुंधलापन को सुधारने के लिए किन्नौं के दाग का संशोधन किया जाता है। तकनीक इस प्रकार है:

1- किन्नौं कार्बोल फुकसिन से धब्बा को 3 मिनट तक ढक कर रखें।

2- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।

3- एसिड अल्कोहल के साथ संक्षेप में डिस्कोलर 3% पर तैयार किया जाता है जब तक कि अधिक रंगाई न की जाए।

4- डिस्टिल्ड वॉटर से फिर धोएं।

5- मेथिलीन ब्लू के साथ तैयारी को कवर करें और इसे 30 सेकंड तक चलने दें।

6- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं और हवा को सूखने दें।

डिडिएर द्वारा संशोधित संयुक्त कार्बोलिक फ़्यूचिन और ट्राइक्रोम तकनीक

इस तकनीक को एक ही समय में coccidia और माइक्रोस्पोरिडियम बीजाणुओं के लिए मल के नमूनों के विश्लेषण के लिए अनुशंसित किया जाता है। पालन ​​करने की प्रक्रिया इस प्रकार है:

1- किन्नौं कार्बोल फुकसिन के साथ स्मीयर को 10 मिनट तक ढककर रखें।

2- कलरेंट निकालें और डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।

3- हाइड्रोक्लोरिक एसिड अल्कोहल के साथ 30 सेकंड के लिए ब्लीच।

4- डिस्टिल्ड वॉटर से फिर धोएं।

5- ट्राइक्रोम सॉल्यूशन के साथ स्मीयर को 37 ° C पर 30 मिनट तक ढक कर रखें।

6- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।

7- एसिटिक एसिड अल्कोहल के साथ 10 सेकंड के लिए ब्लीच।

8- 95% इथेनॉल का उपयोग करके 30 सेकंड के लिए धब्बा धो लें।

क्यूए

एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में, माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस उपभेदों के साथ स्मीयर तैयार किए जाते हैं और यह सुनिश्चित करने के लिए तैयार अभिकर्मकों के साथ दाग लगाया जाता है कि बैक्टीरिया उपयुक्त रंग (लाल-फुचिया) पर लेते हैं।

एसिड अल्कोहल फास्ट के अलावा किसी भी तनाव के साथ स्मीयर तैयार करके नकारात्मक नियंत्रण का भी उपयोग किया जा सकता है, इस प्रकार यह सत्यापित करते हुए कि पूरा नमूना विपरीत रंग पर ले जाता है।

Ziehl-Neelsen तकनीक की तुलना में किन्नौं तकनीक

किन्यन तकनीक सरल है क्योंकि यह हीटिंग कदम को समाप्त कर देता है, लेकिन इसका मुख्य लाभ यह है कि यह लंबे समय में वाष्प, अत्यधिक विषैले और कैंसर पैदा करने वाले उत्सर्जन से बचता है। इसलिए, स्टेनिंग कर्मियों के लिए किन्नौं का दाग ज्यादा सुरक्षित है।

यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि देखभाल की जानी चाहिए कि अभिकर्मक त्वचा के सीधे संपर्क में नहीं आते हैं, क्योंकि वे संक्षारक हैं और ब्लीच ज्वलनशील है।

नुकसान के लिए, एक नकारात्मक धब्बा जरूरी नहीं दर्शाता है कि जीव मौजूद नहीं है। इसके अलावा, सेलुलर मलबे की उपस्थिति झूठी सकारात्मकता पैदा कर सकती है, जिससे निदान में भ्रम हो सकता है।

संदर्भ

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