- आधार
- माध्यमिक रंग
- अभिकर्मकों
- प्राथमिक रंग
- विरंजन समाधान
- द्वितीयक डाई (प्रति-डाई)
- तकनीक
- एसिड-फास्ट स्टेनिंग प्रक्रिया
- एक जीवाणु धब्बा तैयार करें
- धब्बा सूखना
- नमूना गर्म करें
- दाग को कवर करें
- दाग को गरम करें
- दाग धो लें
- एसिड शराब के साथ स्मीयर को कवर करें
- दाग धो लें
- धब्बा को धब्बे से ढक दें
- दाग धो लें
- बहा देना
- माइक्रोस्कोप के तहत स्मीयर की जांच करें
- परिणामों की व्याख्या करें
- संदर्भ
Ziehl-नील्सन का एक रंग तकनीक सूक्ष्मजीवों प्रतिरोधी शराब एसिड (आरा) की पहचान। इस माइक्रोबायोलॉजी प्रक्रिया का नाम इसके लेखकों को संदर्भित करता है: जीवाणुविज्ञानी फ्रांज ज़ेहल और रोगविज्ञानी फ्रेडरिक नील्सन।
यह तकनीक एक प्रकार का अंतर धुंधला है, जिसमें संरचनाओं के बीच विपरीत बनाने के लिए अलग-अलग रंगों का उपयोग शामिल है जिन्हें आप निरीक्षण करना, अंतर करना और बाद में पहचानना चाहते हैं। Ziehl-Neelsen दाग का उपयोग कुछ प्रकार के सूक्ष्मजीवों की पहचान करने के लिए किया जाता है।
ज़िहल-नीलसेन का दाग
इन जीवों में से कुछ माइकोबैक्टीरिया (जैसे, माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस), नोकार्डिया (जैसे, नोकार्डिया एसपी), और कुछ एककोशिकीय परजीवी (जैसे, क्रिप्टोस्पोरिडिड परवुम) हैं। कई बैक्टीरिया को एक सामान्य तकनीक के माध्यम से वर्गीकृत किया जा सकता है जिसे ग्राम दाग कहा जाता है।
हालांकि, कुछ जीवाणु समूहों को उनकी पहचान करने में सक्षम होने के लिए अन्य तरीकों की आवश्यकता होती है। Ziehl-Neelsen दाग जैसी तकनीकों को सेल की दीवार पर पूर्व को ठीक करने के लिए गर्मी के साथ रंजक के संयोजन की आवश्यकता होती है।
फिर एक विरंजन प्रक्रिया आती है जो दो परिणामों की अनुमति देती है: एसिड और अल्कोहल द्वारा मलिनकिरण के लिए प्रतिरोध या संवेदनशीलता।
आधार
इस धुंधला तकनीक के लिए तर्क इन सूक्ष्मजीवों की कोशिका भित्ति के गुणों पर आधारित है। दीवार एक प्रकार के फैटी एसिड से बना है जिसे माइकोलिक एसिड कहा जाता है; ये बहुत लंबी श्रृंखलाएं होती हैं।
जब फैटी एसिड में बहुत लंबी संरचना होती है, तो वे रंगों को अधिक आसानी से बनाए रख सकते हैं। कोशिका की दीवार में माइकोलिक एसिड की उच्च सामग्री के कारण, कुछ बैक्टीरिया ग्राम दाग से दागना बहुत मुश्किल है।
Ziehl-Neelsen दाग फेनोलिक यौगिक कार्बोलिक फ़्यूचिन, एक मूल दाग का उपयोग करता है। यह सेल की दीवार के फैटी एसिड के साथ बातचीत करने की क्षमता है, जो कमरे के तापमान पर बनावट में मोमी है।
कार्बोलिक फ़्यूचिन धुंधला गर्मी की उपस्थिति में बढ़ाया जाता है, क्योंकि मोम पिघलता है और डाई अणु कोशिका की दीवार में अधिक तेजी से चलते हैं।
बाद में उपयोग किया जाने वाला एसिड उन कोशिकाओं को त्यागने का काम करता है जो दागदार नहीं थे क्योंकि उनकी दीवार डाई से पर्याप्त रूप से संबंधित नहीं थी; इसलिए, एसिड ब्लीच की ताकत एसिड डाई को हटाने में सक्षम है। इस मलिनकिरण का प्रतिरोध करने वाली कोशिकाओं को एसिड-फास्ट कहा जाता है।
माध्यमिक रंग
नमूने के डीकोलाइजेशन के बाद, यह दूसरे डाई के साथ विपरीत होता है जिसे द्वितीयक डाई कहा जाता है। आमतौर पर, मेथिलीन ब्लू या मैलाकाइट ग्रीन का उपयोग किया जाता है।
द्वितीयक डाई पृष्ठभूमि सामग्री पर दाग लगाती है और इसके परिणामस्वरूप पहले चरण में तैयार की गई संरचनाओं के विपरीत होती है। केवल फीकी पड़ी कोशिकाएं दूसरी डाई (प्रतिक्षेप) को अवशोषित करती हैं और अपने रंग को ग्रहण करती हैं, जबकि एसिड-फास्ट कोशिकाएं अपने लाल रंग को बरकरार रखती हैं।
इस प्रक्रिया का उपयोग अक्सर माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस और माइकोबैक्टीरियम लेप्राई की पहचान के लिए किया जाता है, जिसे एसिड-फास्ट बेसिली कहा जाता है।
अभिकर्मकों
प्राथमिक रंग
0.3% कार्बोलिक फ़्यूचिन (फ़िल्टर्ड) का उपयोग किया जाता है। यह डाई अल्कोहल के मिश्रण से तैयार की जाती है: इथेनॉल में फिनोल (90%) या मेथनॉल (95%), और इस मिश्रण में 3 ग्राम मूल फुकसिन को भंग किया जाता है।
विरंजन समाधान
इस चरण में, 3% अल्कोहलिक एसिड या 25% सल्फ्यूरिक एसिड के समाधान का उपयोग किया जा सकता है।
द्वितीयक डाई (प्रति-डाई)
नमूनों के विपरीत डाई का सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाता है, जो आमतौर पर 0.3% मेथिलीन नीला होता है। हालांकि, दूसरों को भी इस्तेमाल किया जा सकता है, जैसे कि 0.5% मैलाकाइट ग्रीन।
तकनीक
एसिड-फास्ट स्टेनिंग प्रक्रिया
एक जीवाणु धब्बा तैयार करें
यह तैयारी एक साफ, सूखी स्लाइड पर की जाती है, जो बाँझपन की सावधानियों का पालन करती है।
धब्बा सूखना
स्मीयर को कमरे के तापमान पर सूखने दें।
नमूना गर्म करें
नीचे की स्लाइड में आग लगाकर नमूने को गर्म किया जाना चाहिए। शराब का निर्धारण तब किया जा सकता है जब स्मीयर को थूक (इसे सफेद करने के लिए सोडियम हाइपोक्लोराइट के साथ इलाज) के साथ तैयार नहीं किया गया है और अगर यह तुरंत दाग नहीं जा रहा है।
एम। तपेदिक को ब्लीच के साथ और धुंधला होने की प्रक्रिया के दौरान हटा दिया जाता है। अनुपचारित थूक के हीट फिक्सेशन से एम। ट्यूबरकुलोसिस नहीं होगा, जबकि अल्कोहल फिक्सेशन जीवाणुनाशक है।
दाग को कवर करें
दाग कार्बोच फ्यूसीन समाधान (प्राथमिक मूल दाग) के साथ कवर किया गया है।
दाग को गरम करें
यह 5 मिनट के लिए किया जाता है। आपको भाप के विकास (लगभग 60 डिग्री सेल्सियस) पर ध्यान देना चाहिए। यह महत्वपूर्ण है कि नमूना को ज़्यादा गरम न करें और जलने से बचें।
दाग को गर्म करने के संबंध में, कार्बोलिक फुकसिन को गर्म करते समय बहुत सावधानी बरतनी चाहिए, खासकर अगर धुंधला हो जाने पर ट्रे या अन्य कंटेनर में ले जाया जाता है जिसमें पिछले धुंधला से अत्यधिक ज्वलनशील रसायन एकत्र किए गए हैं।
एसिडिक अल्कोहल, मेथनॉल या 70% इथेनॉल की कुछ बूंदों के साथ सिक्त पहले से जले हुए स्वाब का उपयोग करके स्लाइड के तहत केवल एक छोटी सी लौ को लगाया जाना चाहिए। इथेनॉल में भिगोए हुए एक बड़े झाड़ू के उपयोग से बचें क्योंकि यह आग का खतरा है।
दाग धो लें
यह वॉश साफ पानी से किया जाना चाहिए। यदि नल का पानी साफ नहीं है, तो फिल्टर या आसुत पानी से धब्बा धो लें, अधिमानतः।
एसिड शराब के साथ स्मीयर को कवर करें
यह एसिड अल्कोहल 3% पर होना चाहिए। कवरेज को 5 मिनट के लिए किया जाता है या जब तक स्मीयर पर्याप्त रूप से फीका नहीं हो जाता है, अर्थात् रंग में पीला गुलाबी।
यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि अम्लीय शराब ज्वलनशील है; इसलिए, इसे बहुत सावधानी से इस्तेमाल किया जाना चाहिए। इग्निशन के स्रोतों के पास होने से बचें।
दाग धो लें
धुलाई साफ, आसुत पानी के साथ होनी चाहिए।
धब्बा को धब्बे से ढक दें
यह 1 या 2 मिनट के लिए मैलाकाइट ग्रीन स्टेन (0.5%) या मेथिलीन ब्लू (0.3%) हो सकता है, अगर स्मीयर पतला है, तो अधिक समय का उपयोग करें।
दाग धो लें
फिर से साफ (आसुत) पानी का उपयोग किया जाना चाहिए।
बहा देना
स्लाइड के पीछे को साफ किया जाना चाहिए और एक नाली रैक पर हवा को सूखा करने के लिए रखा गया दाग (सुखाने के लिए शोषक कागज का उपयोग न करें)।
माइक्रोस्कोप के तहत स्मीयर की जांच करें
100X उद्देश्य और विसर्जन तेल का उपयोग किया जाना चाहिए। स्मीयर को व्यवस्थित रूप से स्कैन करें और उचित टिप्पणियों को रिकॉर्ड करें।
परिणामों की व्याख्या करें
सैद्धांतिक रूप से, एक लाल रंग के दाग वाले सूक्ष्मजीवों को एसिड-फास्ट पॉजिटिव (एएआर +) माना जाता है।
इसके विपरीत, यदि सूक्ष्मजीव नीले या हरे रंग का दाग लगाते हैं, तो काउंटर-डाई के रूप में उपयोग की जाने वाली डाई के आधार पर, उन्हें एसिड-फास्ट नकारात्मक (AAR-) माना जाता है।
संदर्भ
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