साबूदाना अगार: नींव, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

अगर Sabouraud भी जाना जाता के रूप में Sabouraud अगर डेक्सट्रोज एक मध्यम ठोस, विशेष रूप से इस तरह के खमीर, फफूंद और त्वक्विकारीकवक रूप में, अलगाव और कवक के विकास के लिए समृद्ध है।

इसलिए, नैदानिक ​​या गैर-नैदानिक ​​नमूनों से रोगजनक या अवसरवादी कवक की उपस्थिति की जांच करने के लिए इस माध्यम की माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशाला में कमी नहीं हो सकती है। इसी तरह, यह स्ट्रेप्टोमी और नोकार्डियास जैसे फिलामेंटस बैक्टीरिया के विकास के लिए भी आदर्श है। इसका उपयोग बहुत व्यापक है, क्योंकि इसका उपयोग मानव, पशु, पौधे और औद्योगिक माइकोलॉजी में किया जा सकता है।

उ। अनकही सबाउरड अगार। B. साबूदाना अगर एक खमीर के साथ उगाया जाता है। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा ली गई तस्वीरें। मारिलेस गिल

यह माध्यम 1896 में प्रख्यात त्वचा विशेषज्ञ रायमंड सबाउड द्वारा बनाया गया था, जो मुख्य रूप से डर्माटोफाइट्स के कारण खोपड़ी के विकारों में विश्व प्रसिद्ध विशेषज्ञ बन गए थे।

इसका निर्माण इतना महत्वपूर्ण था कि इसका उपयोग आज से किया गया है और आज भी बना हुआ है, हालांकि कुछ संशोधनों के साथ।

यद्यपि यह कवक के लिए विशेष है, इस माध्यम में बैक्टीरिया विकसित हो सकते हैं, इसलिए, मिश्रित वनस्पतियों के साथ नमूनों के लिए, उनकी तैयारी में एंटीबायोटिक दवाओं को शामिल करने के लिए आवश्यक हो सकता है कि जीवाणु वनस्पतियों के विकास को बाधित किया जा सके।

एंटीबायोटिक का चुनाव सावधानी से करना चाहिए और कवक के प्रकार को ध्यान में रखना चाहिए, क्योंकि कुछ पदार्थों की उपस्थिति में कुछ को बाधित किया जाता है।

आधार

सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर एक ऐसा माध्यम है जो अपने मूल निर्माण में कमजोर रूप से चयनात्मक है, इसके 5.6 of 0.2 के अम्लीय पीएच के कारण, हालांकि, बैक्टीरिया अभी भी विकसित हो सकते हैं, मुख्य रूप से लंबे समय तक ऊष्मायन में।

माध्यम में कैसिइन पेप्टोन और पशु ऊतक के अग्नाशयी पाचन होते हैं, जो सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए कार्बन और नाइट्रोजन का स्रोत प्रदान करते हैं।

इसमें ग्लूकोज की एक उच्च सांद्रता भी होती है, जो ऊर्जा स्रोत के रूप में काम करती है, बैक्टीरिया पर कवक के विकास को बढ़ावा देती है। यह सब अगर-अगर, एक ऐसा घटक है जो इसे सही स्थिरता देता है।

दूसरी तरफ, एंटीबायोटिक दवाओं को जोड़ दिया जाए तो सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर चयनात्मक हो सकता है।

एंटीबायोटिक दवाओं के साथ यह घावों, खुले अल्सर या किसी भी नमूने में विशेष रूप से उपयोगी है जिसमें महान जीवाणु संदूषण का संदेह है।

एंटीबायोटिक दवाओं के साथ साबुद्रे डेक्सट्रोज अगर का सबसे अधिक इस्तेमाल किया संयोजन

-क्लोराइडफेनिकॉल के साथ साबुराड अगर: खमीर और फिलामेंटस कवक को ठीक करने के लिए आदर्श।

- जेंटामाइसिन और क्लोरैम्फेनिकॉल के साथ साबूदाना अगार: लगभग सभी फिलामेंटस कवक और खमीर इस माध्यम में विकसित होते हैं, और यह एंटरोबैक्टीरिया, स्यूडोमोनास और स्टैफिलोकोकस सहित बड़ी संख्या में बैक्टीरिया को रोकता है।

- साइक्लोहाइडसाइड के साथ साबूदाना अगार: यह विशेष रूप से त्वचा या श्वसन पथ के नमूनों के लिए उपयोगी है, जब तक कि संदेह डिमॉर्फिक कवक है।

Cycloheximide का उपयोग सावधानी के साथ किया जाना चाहिए; यद्यपि इसका उपयोग गैर-रोगजनक या पर्यावरणीय कवक और खमीर के विकास को बाधित करने के लिए किया जाता है जो एक नमूने में संदूषक के रूप में मौजूद हो सकते हैं, लेकिन यह कुछ कवक के विकास को भी रोकता है जैसे कि क्रिप्टोकोकस नियोफोर्मंस, एस्परपेरिलस फ्यूमिगेटस, एलेस्सेरिया बॉयडी, पेनिसिलियम स्प और अन्य अवसरवादी कवक।

- क्लोरोफेनिकॉल प्लस साइक्लोहाइडसाइड के साथ साबूदाद अगार: इसका उपयोग मुख्य रूप से डर्माटोफाइट्स और डिमॉर्फिक कवक को अलग करने के लिए किया जाता है। इसका नुकसान यह है कि यह अवसरवादी कवक की कुछ प्रजातियों को रोकता है जैसे कि कैंडिडा नो एल्बीकैंस, एस्परगिलस, ज़ीगोमाइसेटेस या सी। नोफोरमन्स।

- क्लोरोफेनिकॉल, स्ट्रेप्टोमाइसिन, पेनिसिलिन जी और साइक्लोहाइडसाइड के साथ साबूदाद अगार: यह बैक्टीरिया और सैप्रोफाइटिक कवक के साथ बेहद दूषित नमूनों के लिए आदर्श है, लेकिन इसका नुकसान यह है कि यह उपर्युक्त अवसरवादी कवक के अलावा एक्टिनोमाइसेस और नोकार्डियास के विकास को रोकता है।

तैयारी

यदि आपके पास अलग से सामग्री है, तो इसे निम्नानुसार तैयार किया जा सकता है:

सबाउरद डेक्सट्रोज अगर

तौलना:

- 40 ग्राम डेक्सट्रोज

- पेप्टोन के 10 ग्राम

- 15 ग्राम अगर-अगर

- आसुत जल के 1000 मिलीलीटर को मापें

सभी अवयवों को मिश्रित किया जाता है, पीएच को 5.6 तक समायोजित किया जाता है। विलेय को उबलते हुए भंग कर दिया जाता है, मध्यम के 20 मिलीलीटर को 25 x 150 मिमी की ट्यूबों में रिम ​​के बिना और अधिमानतः एक कपास की टोपी के साथ वितरित किया जाता है।

कपास की टोपी के साथ ट्यूब। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया फोटो। मारिलेस गिल

उपलब्धता के आधार पर अन्य ट्यूब आकारों का भी उपयोग किया जा सकता है।

वे दबाव (१२१ डिग्री सेल्सियस) के वातावरण में १० मिनट के लिए स्वत: स्फूर्त होते हैं। आटोक्लेव करने का समय अधिक नहीं होना चाहिए। आटोक्लेव छोड़ते समय, ट्यूबों को एक समर्थन की मदद से झुकाया जाता है जब तक कि वे एक बांसुरी की चोंच में जम नहीं जाते।

एक अन्य तरीका यह है कि उबालने तक सामग्री को गर्म करके भंग कर दें। एक ही शीशी में 10 मिनट के लिए आटोक्लेव और फिर पेट्री डिश में 20 मिलीलीटर वितरित करें।

यदि आपके पास एक सबाउड्र डेक्सट्रोज अगर माध्यम है जिसमें पहले से ही सभी सामग्रियां हैं, तो एक लीटर पानी के लिए वाणिज्यिक कंपनी द्वारा निर्दिष्ट राशि का वजन करने के लिए आगे बढ़ें। बाकी चरण वही हैं जो ऊपर वर्णित हैं।

सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर (इमोंस मॉडिफिकेशन)

तौलना:

- डेक्सट्रोज के 20 जीआर

- पेप्टोन के 10 ग्राम

- 17 ग्राम अगर-अगर

- आसुत जल के 1000 मिलीलीटर को मापें

सभी अवयवों को मिश्रित किया जाता है, पीएच को 6.9 पर समायोजित किया जाता है। पिछले मामले की तरह ही आगे बढ़ें।

ऐसे वाणिज्यिक घर हैं जो सभी अवयवों के साथ मध्यम की पेशकश करते हैं। इस मामले में, सम्मिलित करने पर वर्णित के रूप में तौलना और तैयार करना।

क्लोरोफेनिकॉल के साथ सबौरड डेक्सट्रोज एगर (इमोंस संशोधन)

क्लोरैमफेनिकॉल स्टॉक समाधान

- 500 मिलीग्राम क्लोरैम्फेनिकॉल बेस का वजन

- 100% 95% इथेनॉल के उपाय

- मिक्स

Sabouraud dextrose agar माध्यम (Emmons) पहले से वर्णित के रूप में तैयार किया गया है और इसके अलावा माध्यम के प्रत्येक लीटर के लिए autoclaving से पहले chloramphenicol स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर जोड़ें।

साइक्लौहाइडसाइड के साथ सबाउड्र इमोंस डेक्सट्रोज एगर

Cycloheximide स्टॉक समाधान

- साइक्लोहाइडसाइड के 5 ग्राम वजन

- एसीटोन की 100 मिली

- मिक्स

Sabouraud dextrose agar माध्यम (Emmons) पहले से ही वर्णित के रूप में तैयार किया गया है और इसके अलावा माध्यम के प्रत्येक लीटर के लिए autoclaving से पहले cycloheximide स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर जोड़ें।

क्लोरोफेनिकॉल और साइक्लोहिमसाइड के साथ सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर (एममन्स)

Sabouraud dextrose agar माध्यम (Emmons) पहले वर्णित के रूप में तैयार किया जाता है और इसके अलावा माध्यम के प्रत्येक लीटर के लिए क्लोरोफेनिकॉल स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर और साइक्लोहेमेसाइड स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर को ऑटोकैवलिंग से पहले जोड़ें।

अन्य एंटीबायोटिक दवाओं को जोड़ा जा सकता है

मध्यम प्रति लीटर पेनिसिलिन की 20,000 से 60,000 इकाइयाँ।

माध्यम की प्रति लीटर स्ट्रेप्टोमाइसिन की 30 मिलीग्राम।

माध्यम को आटोक्लेव करने के बाद, थोड़ा ठंडा (50-55 डिग्री सेल्सियस) होने के बाद दोनों को शामिल किया जाना चाहिए।

माध्यम की प्रति लीटर नियोमाइसिन 0.04 ग्राम।

माध्यम के प्रति लीटर जेंटामाइसिन की 0.04 ग्राम।

विशेष ध्यान

सुरक्षा के लिए, पत्ती के आकार के बजाय वेज के आकार के ट्यूबों (बांसुरी की चोंच में झुका हुआ) में साबूदाने के डेक्सट्रोज अगर को बोना पसंद किया जाता है, ताकि फैलाव और बीजाणुओं से बचा जा सके।

यह महत्वपूर्ण है कि साबूदाना अगर ट्यूबों को कपास से ढंका जाता है, न कि एक स्क्रू कैप के साथ, क्योंकि अर्ध-अवायवीय स्थितियों को कुछ उपभेदों में बीजाणु के गठन को रोकने के लिए दिखाया गया है, उदाहरण के लिए कोकाइडिओड्स इमिटिस। इसके अलावा, अधिकांश कवक एरोबिक हैं।

स्क्रू कैप का उपयोग करने के मामले में, hermetically बंद न करें।

क्यूए

तैयार मीडिया को अपने उचित कामकाज को सत्यापित करने के लिए गुणवत्ता नियंत्रण से गुजरना होगा। इसके लिए, कुछ नियंत्रण उपभेदों को बोया जाता है।

क्लोरोफेनिकॉल के साथ सबरॉड डेक्सट्रोज अगर के लिए, कैंडिडा अल्बिकन्स के एटीसीसी उपभेदों का उपयोग किया जा सकता है, जिसमें उत्कृष्ट वृद्धि होनी चाहिए। एक और प्लेट एस्चेरिचिया कोलाई उपभेदों के साथ टीका लगाई गई है, जिसे पूरी तरह से रोकना चाहिए।

एक असंक्रमित प्लेट भी ऊष्मायन होता है जिसमें कोई सूक्ष्मजीव नहीं उगने चाहिए।

क्लोरोफेनिकॉल और साइक्लोहेसेमाइड के साथ सबाउड्र डेक्सट्रोज अगर के लिए, ट्राइकोफाइटन मेन्ताग्रोफाइट्स के उपभेदों का उपयोग किया जा सकता है, और उन्हें अच्छी तरह से विकसित करना चाहिए। एक और प्लेट एस्परगिलस फ्लेवस के एक तनाव के साथ टीका लगाया जाता है, जिसमें बहुत कम या कोई वृद्धि नहीं होनी चाहिए। इसके अतिरिक्त, एक बाँझ प्लेट को अपनी बाँझपन प्रदर्शित करने के लिए ऊष्मायन किया जाता है।

साइक्लोहाइडसाइड के साथ सबाउड्र डेक्सट्रोज अगर के लिए, कैंडिडा अल्बिकैंस, ट्राइकोफाइटन रूब्रम या माइक्रोस्पोरम कैनिस के उपभेदों का उपयोग किया जाता है, जो अच्छी वृद्धि दिखाते हैं।

इसी तरह, एस्परगिलस फ्लैवस का एक तनाव शामिल है, जिसमें बहुत कम या कोई वृद्धि नहीं है। अंत में, बाँझपन को नियंत्रित करने के लिए एक असंक्रमित प्लेट सेते हैं।

अनुप्रयोग

प्राथमिक संस्कृति

क्लासिक सबाउरड डेक्सट्रोज अगर में 4 ग्राम डेक्सट्रोज होता है और यह प्राथमिक अलगाव माध्यम के रूप में उत्कृष्ट है, क्योंकि यह प्रत्येक कवक की विशेषता आकृति विज्ञान को दर्शाता है।

यह वर्णक उत्पादन का प्रदर्शन करने के लिए भी उत्कृष्ट है। हालांकि, यह स्पोरुलेशन देखने का सबसे अच्छा साधन नहीं है।

यह ब्लास्टोमाइसेस डर्माटिटिडिस की खेती के लिए भी अनुशंसित नहीं है, जो मौजूद ग्लूकोज की उच्च एकाग्रता से बाधित है।

दूसरी ओर, खेती के लिए कुछ खास बातों पर ध्यान देना चाहिए।

कुछ कवक कमरे के तापमान पर सबसे अच्छे रूप से विकसित होते हैं, जैसे कि नए नए साँचे, अन्य 37 डिग्री सेल्सियस पर सफलतापूर्वक बढ़ते हैं, जैसे कि कुछ खमीर, और अन्य दोनों तापमानों पर विकसित हो सकते हैं (डिमोर्फिक कवक)।

इस कारण से, कभी-कभी एक ही नमूने के लिए कई सबाउडर अगर प्लेटों का उपयोग करना आवश्यक होता है, क्योंकि डुप्लिकेट सीडिंग को अक्सर एक प्लेट को कमरे के तापमान पर और दूसरे को 37 ° C पर सेते हैं।

उदाहरण के लिए, Sporothrix schenckii को दो प्लेटों में बोया जाता है; एक को ढालना चरण प्राप्त करने के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है और दूसरे को खमीर चरण प्राप्त करने के लिए 37 ° C पर ऊष्मायन किया जाता है, लेकिन बाद में मध्यम में 5% रक्त जोड़ना आवश्यक है।

अन्य मामलों में, जैसे माइकोटोमा के नमूने, दो सबाउड्र अगार प्लेटें सीड की जाती हैं, एक क्लोरमफेनिकॉल के साथ और दूसरी साइक्लोहाइडसाइड के साथ। पहला फंगल उत्पत्ति के मायकोटोमा प्रेरक एजेंटों (यूमाइसेटोमा) और दूसरा एक्टिनोमाइसेटोमा जैसे बैक्टीरिया मूल के माइकोटोमा के प्रेरक एजेंटों की वृद्धि की अनुमति देगा।

sporulation

एमोन्स संशोधित सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर में 2 ग्राम डेक्सट्रोज होता है और इसका उपयोग न केवल अलगाव के लिए किया जाता है, बल्कि कवक के संरक्षण और संरक्षण के लिए भी किया जाता है।

इस माध्यम में, ब्लास्टोमाइसेस डर्माटिटिडिस के उपभेदों को पुनर्प्राप्त किया जा सकता है।

संरक्षण

मशरूम संस्कृतियों को संरक्षित करने के लिए, उन्हें एक रेफ्रिजरेटर (2-8 डिग्री सेल्सियस) में संग्रहीत किया जा सकता है। संरक्षण का समय 2 से 8 सप्ताह के बीच भिन्न हो सकता है। इस समय के बाद उन्हें प्रक्रिया को दोहराने के लिए उपसंस्कृत होना चाहिए।

कुछ कवक कमरे के तापमान पर सबसे अच्छा रखते हैं, जैसे कि एपिडर्मोफाइटन फोसकोसम, ट्राइकोफाइटन स्कोएंलेनिनी, टी। वायलेसम, और माइक्रोस्पोरम ऑडाउनी।

अगर प्लेक्स्रोज को पूरी तरह से अगरर से हटा दिया जाए और अगर सूखने से बचने के लिए माध्यम में अगर की मात्रा कम कर दी जाए तो तनाव के रखरखाव को लंबा किया जा सकता है।

Microcultures

कुछ फिलामेंटस कवक की पहचान के लिए, यौन और अलैंगिक प्रजनन की संरचनाओं का निरीक्षण करने के लिए सबाउरड अगर या अन्य विशेष साधनों का उपयोग करके माइक्रोकल्चर करना आवश्यक है।

मानव माइकोलॉजी में

इसका उपयोग मुख्य रूप से कवक रोगों के निदान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से वे जो त्वचा और इसके संलग्नक (बाल और नाखून) को प्रभावित करते हैं।

नमूने स्राव, exudates, त्वचा, बाल, नाखून, थूक, CSF या मूत्र हो सकते हैं। सामान्य रूप से पृथक रोगजनकों में डर्माटोफाइट्स, कवक हैं जो चमड़े के नीचे और प्रणालीगत मायकोसेस का कारण बनते हैं।

पशु की माइकोलॉजी

जानवरों को अक्सर फंगल संक्रमण से प्रभावित किया जाता है, इसलिए साबूदाना अगार जानवरों की माइकोलॉजी में उतना ही उपयोगी है जितना कि यह मनुष्यों में है।

उदाहरण के लिए, डर्माटोफाइट्स अक्सर जानवरों को प्रभावित कर सकते हैं। ऐसा ही माइक्रोस्पोरम कैनिस वर् डिस्टोर्टम के साथ होता है, जो अक्सर कुत्तों, बिल्लियों, घोड़ों, सूअरों और बंदरों को संक्रमित करता है। इसी तरह, माइक्रोस्पोरम जिप्सम कुत्तों, बिल्लियों और पशुओं को संक्रमित करता है।

पक्षी जैसे मुर्गियां, मुर्गा और मुर्गी माइक्रोस्पोरम गैलिना से प्रभावित होते हैं।

अन्य फफूंद, जैसे कि ज़ीमोनमा फ़ाइकिमिनोसम, पशुओं में बीमारी का कारण भी है, मुख्यतः घोड़े, खच्चर और गधे, लसीका वाहिकाओं में महत्वपूर्ण सूजन पैदा करते हैं।

Sporothrix schenkii और Histoplasma capsulatum घरेलू पशुओं और मनुष्यों को प्रभावित करते हैं।

पर्यावरण संबंधी माइकोलॉजी

कई रोगजनक या अवसरवादी कवक किसी दिए गए वातावरण में किसी भी समय ध्यान केंद्रित कर सकते हैं, विशेष रूप से क्लीनिक और अस्पतालों के ऑपरेटिंग कमरे और गहन चिकित्सा इकाइयों (आईसीयू) में। इसलिए इन पर नियंत्रण करना आवश्यक है।

अन्य कमजोर स्थान पुस्तकालय और पुरानी इमारतें हैं, जो पर्यावरणीय कवक की एकाग्रता से प्रभावित हो सकते हैं।

पर्यावरण अध्ययनों में, कवक के अलगाव के लिए सबाउड्र डेक्सट्रोज अगर का उपयोग किया जाता है।

औद्योगिक माइकोलॉजी

सौंदर्य प्रसाधन, खाद्य, पेय पदार्थ, चमड़ा, वस्त्र, के उत्पादन में कवक को दूषित करने के अध्ययन के लिए साबूदाना डेक्सट्रोज एगर अनुपस्थित नहीं हो सकता है।

पौधा माइकोलॉजी

पौधे कवक के कारण होने वाली बीमारियों से भी प्रभावित होते हैं, जो पौधे के विभिन्न हिस्सों को प्रभावित करते हैं, जिससे फसल भी खत्म हो सकती है, जिससे कृषि को बहुत नुकसान होता है।

संदर्भ

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