कैटालसे परीक्षण: औचित्य, तकनीक और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

केटालेज़ परीक्षण जीवाणु प्रयोगशालाओं में इस्तेमाल उन बैक्टीरिया है कि यह अधिकारी में एंजाइम केटालेज़ की उपस्थिति प्रकट करने के लिए एक पद्धति है। ग्राम दाग के साथ मिलकर, वे मुख्य परीक्षण हैं जिन्हें नए पृथक सूक्ष्मजीवों पर किया जाना चाहिए। ये परीक्षण प्रश्न में सूक्ष्मजीव की निश्चित पहचान के लिए चरणों पर माइक्रोबायोलॉजिस्ट का मार्गदर्शन करते हैं।

सामान्य तौर पर, साइटोक्रोम वाले बैक्टीरिया में एंजाइम उत्प्रेरित होता है, जिसका अर्थ है कि संकाय एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया इसके पास हैं। हालांकि, ऐसे अपवाद हैं, जैसे कि स्ट्रेप्टोकोकस, जो कि फैले हुए एनारोबिक सूक्ष्मजीव होने के बावजूद, एंजाइम उत्प्रेरक के पास नहीं है।

एक सकारात्मक प्रतिक्रिया दिखाते हुए, कैटलस टेस्ट चला रहा था। स्रोत: कोई मशीन-पठनीय लेखक प्रदान नहीं किया गया। नसे मान लिया गया (कॉपीराइट दावों के आधार पर)।

यही कारण है कि स्ट्रेप्टोकोसेसी परिवार से स्टैप्टोसोकेसी और माइक्रोकॉकसी परिवार (दोनों उत्प्रेरित सकारात्मक) को अलग करने के लिए मुख्य रूप से उत्प्रेरित परीक्षण का उपयोग किया जाता है।

इसी तरह, जीनस बेसिलस (उत्प्रेरित धनात्मक) जीनस क्लोस्ट्रीडियम (उत्प्रेरक नकारात्मक) से अलग है, दूसरों के बीच में।

आधार

कैटलसे एक एंजाइम है जिसे हाइड्रोपरॉक्सिडेज़ के रूप में वर्गीकृत किया गया है, इसका मतलब है कि वे एक सब्सट्रेट के रूप में हाइड्रोजन पेरोक्साइड (एच ₂ ओ ₂) का उपयोग करते हैं ।

इसे ऑक्सीडाइरेक्टेस भी माना जाता है, क्योंकि प्रतिक्रिया में जहां यह भाग लेता है, वहां एक तत्व होता है जो इलेक्ट्रॉन दाता (पदार्थ को कम करने) और एक इलेक्ट्रॉन रिसेप्टर (ऑक्सीकरण पदार्थ) के रूप में कार्य करता है।

कैटलसे एक प्रोटीन है जिसमें चार ट्रिटेंट आयरन परमाणुओं (Fe ⁺⁺⁺) के साथ एक प्रोसेरिक समूह होता है, इसलिए यह एक होम्योपैथी है। फेरिक आयन प्रतिक्रिया के दौरान ऑक्सीकृत रहता है।

यह कहा जा सकता है कि उत्प्रेरित एक detoxifying एंजाइम है, क्योंकि इसका कार्य बैक्टीरिया के चयापचय के दौरान उत्पन्न होने वाले पदार्थों को समाप्त करना है जो बैक्टीरिया के लिए विषाक्त हैं। इन पदार्थों में हाइड्रोजन पेरोक्साइड है।

हाइड्रोजन पेरोक्साइड शर्करा के टूटने से एरोबिक रूप से बनता है। यह प्रक्रिया निम्नानुसार होती है:

सुपरऑक्साइड ऑक्साइड (O ₂ ^-) (फ्री रेडिकल) एरोबिक मार्ग से ग्लूकोज को आत्मसात करने के अंतिम उत्पाद के रूप में बनता है। यह विषाक्त है और एंजाइम सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस द्वारा इसे समाप्त कर दिया जाता है जो इसे गैसीय ऑक्सीजन और हाइड्रोजन पेरोक्साइड में बदल देता है।

हाइड्रोजन पेरोक्साइड भी बैक्टीरिया के लिए विषाक्त है और इसे हटाया जाना चाहिए। एंजाइम उत्प्रेरित हाइड्रोजन पेरोक्साइड को पानी और ऑक्सीजन में तोड़ देता है।

कैटलसे हाइड्रोजन पेरोक्साइड के अलावा सब्सट्रेट पर काम कर सकता है, जैसे कि अल्कोहल, एल्डीहाइड, एसिड, सुगंधित अमाइन और फिनोल। हालांकि, हाइड्रोजन पेरोक्साइड भी अन्य जहरीले यौगिकों जैसे मिथाइल और एथिल अल्कोहल के ऑक्सीकरण के लिए उत्प्रेरक द्वारा उपयोग किया जा सकता है।

इसी तरह, फाइटोसिटिक कोशिकाओं में मौजूद है, यह हाइड्रोजन पेरोक्साइड की विषाक्त कार्रवाई से बचाता है।

कैटलन टेस्ट के लिए रूटीन तकनीक

-स्लाइड विधि

सामग्री

3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड (10 मात्रा)।

सूक्ष्मदर्शी की स्लाइड

डिस्पोजेबल प्लास्टिक संभाल या लकड़ी के टूथपिक।

प्रक्रिया

जिस कॉलोनी से यह आया था, उसे बिना छुए पढ़ाई करने के लिए कॉलोनी का पर्याप्त हिस्सा लें। कॉलोनी ताजा होनी चाहिए, यानी 18 से 24 घंटे की संस्कृति से।

कॉलोनी को सूखी स्लाइड पर रखें और उसमें 3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड की एक बूंद डालें (30% एच ₂ ओ ₂ भी इस्तेमाल किया जा सकता है)। बुलबुले तुरंत निकलते हैं या नहीं, इसका तुरंत निरीक्षण करें।

व्याख्या

सकारात्मक प्रतिक्रिया: गैसों का विकास, बुलबुले के गठन (मजबूत बुदबुदाहट) के कारण।

नकारात्मक प्रतिक्रिया: कोई बुलबुला गठन नहीं।

-पूरी संस्कृति में अप्रत्यक्ष तरीका

एक शुद्ध प्लेट या पच्चर संस्कृति पर 3% एच ₂ ओ ₂ का 1 मिलीलीटर रखें जिसमें रक्त नहीं होता है (अधिमानतः पोषक तत्व अगर)। निरीक्षण करें कि क्या बुलबुला गठन तुरंत है या नहीं। 30% H ₂ O ₂ का भी उपयोग किया जा सकता है ।

इसे पोर्ट ऑब्जेक्ट ऑब्जेक्ट के समान समझा जाता है।

केशिका ट्यूब या फंग और पेट्रीस्को के साथ मेथोड

केशिका द्वारा 3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ 20 मिमी की ऊंचाई तक 67 मिमी केशिका ट्यूब भरें।

3% एच ₂ ओ ₂ से भरे केशिका के साथ अध्ययन किए जाने के लिए पृथक कॉलोनी को स्पर्श करें _। निरीक्षण करें कि केशिका लगभग 10 सेकंड में बुलबुले से भर जाती है। यह विधि क्रॉस में प्रतिक्रिया की अर्ध-मात्रा का ठहराव करने की अनुमति देती है:

क्रॉस के बिना कोई बुलबुले (नकारात्मक प्रतिक्रिया) नहीं हैं।

+ ---- कुछ बुलबुले (कमजोर या विलंबित प्रतिक्रिया)।

++ --– प्रचुर मात्रा में बुलबुले (मध्यम प्रतिक्रिया)।

+++ - बुलबुले विपरीत छोर (मजबूत प्रतिक्रिया) तक पहुंचते हैं।

उत्प्रेरक परीक्षण के लिए टेलर और अचंजर विधि जो संदिग्ध देते हैं

एक साफ, सूखी स्लाइड पर एक अलग कॉलोनी रखें, फिर 0.5% एच ₂ ओ ₂ की एक बूंद रखें और एक आवरण के साथ कवर करें। निरीक्षण करें कि फंसे हुए बुलबुले का गठन है या नहीं।

व्याख्या: बुलबुले की उपस्थिति एक सकारात्मक प्रतिक्रिया को इंगित करती है। कोई बुलबुले नहीं, इसे एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के रूप में व्याख्या की जाती है।

माइकोबैक्टीरियम प्रजातियों के लिए कैटेलसी परीक्षण

इस तकनीक को पीएच और तापमान को नियंत्रित करके किया जाना चाहिए। यह एक लामिना का प्रवाह हुड के नीचे किया जाना चाहिए, क्योंकि विभिन्न माइकोबैक्टीरियम प्रजातियों का हेरफेर खतरनाक है।

-सामग्री

हाइड्रोजन पेरोक्साइड 30% या 110 मात्रा (सुपरऑक्साइड)।

फॉस्फेट बफर पीएच 7

10% ट्विन 80

3 से 4 सप्ताह के लिए माइकोबैक्टीरियम वेज कल्चर

-Preparation

फॉस्फेट बफर पीएच 7

तौलना:

1.361 ग्राम निर्जल मोनोपोटेशियम फॉस्फेट (केएच ₂ पीओ ₄)।

1.420 ग्राम निर्जल डिसोडियम (Na2HPO3) फॉस्फेट।

दोनों नमक को थोड़े से बाँझ आसुत जल में घोलें और पानी के साथ 1000 मिलीलीटर तक बनायें।

10% ट्विन 80

व्यावसायिक रूप से केंद्रित Tween 80 के लिए 1:10 कमजोर पड़ने को इस प्रकार आगे बढ़ाएं:

टिवेन 80 का 1 मिलीलीटर लें और इसे थोड़ा आसुत जल में रखें, घोलें और फिर पानी के साथ इसकी मात्रा 10 मिलीलीटर करें।

अंतिम अभिकर्मक

फॉस्फेट बफर की एक मात्रा 10% ट्विन 80 (बराबर भागों) की मात्रा के साथ मिलाएं। प्रयोगशाला में परिभाषित करें कि आप कितना तैयार करना चाहते हैं।

-Process

फॉस्फेट बफर के 5 मिलीलीटर एक बाँझ पेंच-कैप्ड टेस्ट ट्यूब (बेकेलाइट) में रखें।

एक इनोक्यूलेशन लूप के साथ, एक Mycobacterium विकास की पर्याप्त कॉलोनी को बीजों में बोया जाता है और फॉस्फेट बफर में घुल जाता है।

धागे को अधिक कसने के बिना ट्यूब को कैप करें। 68 डिग्री सेल्सियस पर 20 से 30 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखें। बाहर निकालें और 22-25 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा होने दें

अंतिम अभिकर्मक (मिश्रण) के 0.5 मिलीलीटर को मापें और इसे ठंडे समाधान के साथ ट्यूब में जोड़ें। बुलबुले के गठन या नहीं का निरीक्षण करें।

इसकी व्याख्या पिछली तकनीकों की तरह ही की जाती है।

उपयोग

जब समृद्ध मीडिया में कॉलोनी का विकास होता है, तो प्राप्त किए गए कॉलोनियों पर एक ग्राम दाग और एक उत्प्रेरक परीक्षण किया जाना चाहिए। यह निश्चित पहचान के लिए प्रक्रियाओं पर माइक्रोबायोलॉजिस्ट का मार्गदर्शन करेगा।

स्रोत: लेखक द्वारा तैयार एमएससी। मारीलासा गिल

क्यूए

हाइड्रोजन पेरोक्साइड अभिकर्मक के अच्छे प्रदर्शन का मूल्यांकन करने के लिए ताजे सुसंस्कृत नियंत्रण उपभेदों का उपयोग करें, जैसे कि स्टैफिलोकोकस ऑरियस एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में और स्ट्रेप्टोकोकस सपा उपभेदों को एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में।

एक अन्य विकल्प जो एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है, वह है कि रक्त अगर पर हाइड्रोजन पेरोक्साइड की एक बूंद डालना है, एरिथ्रोसाइट्स उत्प्रेरित है, इसलिए, अभिकर्मक अच्छी स्थिति में होने पर बुदबुदाती होगी।

एक चॉकलेट अगर को एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, यहां एरिथ्रोसाइट्स पहले से ही लाइस हैं और परीक्षण नकारात्मक है।

सीमाएं

-परीक्षण के लिए पुरानी संस्कृतियों का उपयोग न करें, क्योंकि इससे गलत नकारात्मक प्रभाव पड़ सकता है।

-अगर ब्लड आगर पर संस्कृतियों से उपनिवेश ले रहे हैं, अगर आप सावधान हैं कि अगर आप को छूने के लिए नहीं; यह प्रक्रिया झूठी सकारात्मकता का कारण बन सकती है, क्योंकि लाल रक्त कोशिकाओं में कैटेलेज होता है।

-यदि आप कॉलोनी को प्लैटिनम हैंडल से लेते हैं, तो प्रक्रिया के क्रम को उल्टा न करें क्योंकि इससे झूठी सकारात्मकता उत्पन्न हो सकती है। ऐसा इसलिए है क्योंकि प्लैटिनम हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ प्रतिक्रिया करने में सक्षम है, जिससे बुदबुदाती है।

-अगर हाइड्रोजन पेरोक्साइड अभिकर्मक का उपयोग न करें यदि यह बहुत पुराना है, क्योंकि अभिकर्मक बहुत अस्थिर है और समय के साथ टूट जाता है।

- हाइड्रोजन पेरोक्साइड अभिकर्मक को प्रकाश से संरक्षित करें और क्षति को रोकने के लिए प्रशीतित करें।

-प्रत्येक बार इसका उपयोग करने पर हाइड्रोजन पेरोक्साइड अभिकर्मक की गुणवत्ता नियंत्रण को बेहतर बनाएं।

ध्यान रखें कि यदि 30% एच ₂ ओ ₂ का उपयोग किया जाता है, तो प्रतिक्रियाएं 3% एच ₂ ओ _{2 के} साथ किए गए लोगों की तुलना में अधिक मजबूत होती हैं ।

संदर्भ

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