VOGES-PROSKAUER परीक्षण: नींव, तैयारी और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

वोग्स-Proskauer परीक्षण एक जैव रासायनिक Enterobacteriaceae परिवार से संबंधित बैक्टीरिया की पहचान करने में सहायता करने के लिए इस्तेमाल किया परीक्षण है। यह विशेष रूप से क्लेबसिएला और एंटरोबैक्टर से एस्चेरिचिया कोलाई के उपभेदों को अलग करने के लिए उपयोगी है।

परीक्षण एक लिक्विड कल्चर माध्यम में किया जाता है, जिसे मिथाइल रेड - वोग्स प्रॉस्क्यूयर कहा जाता है, जिसे आरएम / वीपी के संक्षिप्त नाम से जाना जाता है। यह माध्यम बफर पॉलीपेप्टोन, ग्लूकोज, डिपोटेशियम फॉस्फेट और आसुत जल से बना है।

मिथाइल रेड-वोग्स प्रोस्कोर (आरएम / वीपी) वाणिज्यिक माध्यम / वीपी परीक्षण क्रमशः सकारात्मक और नकारात्मक। स्रोत: लेखक एमएससी द्वारा लिया गया फोटो। विकिमीडिया कॉमन्स से मैरीलेसा गिल / सुदीप्त.नोव 15

वर्तमान RM / VP माध्यम क्लार्क और Lubs माध्यम का एक संशोधन है, जिसमें मूल रूप से पेप्टोन और ग्लूकोज की कम सांद्रता शामिल थी। इस प्रकार, पॉजिटिव वोग्स-प्रोस्कोर की प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक हाइड्रोजन आयन का कम उत्पादन किया गया।

परीक्षण ब्यूटाइलीन-ग्लाइकोल मार्ग के माध्यम से ग्लूकोज का उपयोग करने के लिए सूक्ष्मजीव की क्षमता पर आधारित है, और ऑक्सीजन और एक क्षारीय पीएच की उपस्थिति में एसीटोन नामक एक तटस्थ अंतिम उत्पाद बनाता है।

आरएम / वीपी माध्यम में, वोग्स-प्रॉस्क्यूअर परीक्षण को प्रकट करने में सक्षम होने के अलावा, मिथाइल लाल परीक्षण भी प्रकट किया जा सकता है।

आधार

Voges-Proskauer परीक्षण आधार

माध्यम में मौजूद प्लूरीपेप्टोन बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक पोषण संबंधी आवश्यकताएं प्रदान करते हैं। इसके भाग के लिए, ग्लूकोज मुख्य यौगिक है। कई बैक्टीरिया ग्लूकोज को मेटाबोलाइज करने और पाइरुविक एसिड बनाने की क्षमता रखते हैं।

पाइरुविक एसिड ग्लूकोज चयापचय में एक मध्य बिंदु है और वहां से प्रत्येक सूक्ष्मजीव विभिन्न मार्गों को ले सकता है। कुछ मिश्रित एसिड्स बनाएंगे, जैसे लैक्टिक एसिड, एसिटिक एसिड, फॉर्मिक एसिड और स्यूसिनिक एसिड, और अन्य तटस्थ उत्पाद बनाएंगे जैसे 2,3-बुटानाडियोल।

वोग्स-प्रॉस्क्यूएर परीक्षण से एरोबिक स्थितियों के तहत 2,3-बुटानाडिओल के एक मध्यवर्ती उत्पाद एसिटाइल मिथाइल कारबिनोल (एसीटॉइन) के निर्माण के लिए सूक्ष्मजीव की क्षमता का पता चलता है।

एसीटोन कम हो जाता है और 2,3-ब्यूटेनियोल बनाता है, लेकिन यह प्रतिक्रिया प्रतिवर्ती होती है, इसलिए यदि 2,3-ब्यूटेनियोल ऑक्सीकरण होता है, तो एसिटोइन बनता है। इसलिए, ऑक्सीजन आवश्यक है।

डिपोटेशियम फॉस्फेट बफर है जो पीएच 6.9 is 0.2 पर मिश्रण को बफ़र करता है।

साक्ष्य प्रकटीकरण और व्याख्या का आधार

प्रतिक्रिया प्रदर्शित करने के लिए, वोग्स ए और वोग्स बी के रूप में जाना जाने वाले दो अभिकर्मकों (बैरिट अभिकर्मकों) का उपयोग करके एक विकास किया जाना चाहिए।

Voges A α-naphthol का 5% घोल है, और Voges B 40% पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड तैयारी है। यदि पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड उपलब्ध नहीं है, तो इसे 40% सोडियम हाइड्रॉक्साइड द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है।

Th-नेफथोल एक उत्प्रेरक है जो प्रतिक्रिया रंग की तीव्रता को बढ़ाएगा, जिससे परीक्षण अधिक संवेदनशील हो जाएगा। Α-naphthol को हमेशा ट्यूब को हिलाते हुए, पहले जोड़ा जाना चाहिए ताकि माध्यम ऑक्सीजन के संपर्क में आए। इस तरह से मौजूद एसीटोन को डायसेटाइल में ऑक्सीकृत किया जाता है, और 2,3-ब्यूटेनिओल को एसीटोन बनाने के लिए ऑक्सीकरण किया जाता है, जिससे यह डायसेटाइल में जाता है।

यह कैसे α-naphthol diacetyl के लिए बाध्य होगा, जो बदले में अमीनो एसिड आर्जिनिन में मौजूद गुआनिडाइन नाभिक में शामिल हो गया है, जो प्लुरिप्टोन से आने वाला है।

इसके भाग के लिए, सीओ ₂ को अवशोषित करने और पेप्टोन के साथ प्रतिक्रिया करने के लिए पोटेशियम या सोडियम हाइड्रोक्साइड जिम्मेदार है । यह प्रतिक्रिया एक सैल्मन-गुलाबी रंग के गठन का कारण बनती है, ट्यूब को बहुत अच्छी तरह से हिलाने के बाद स्पष्ट रूप से दिखाई देती है।

रंग के लिए डाइसेटाइल, पेप्टोन और α-naphthol की सही मात्रा को तुरंत मिलाया जाना चाहिए। यदि ऐसा नहीं होता है, तो ट्यूब को व्याख्या करने से पहले 15 मिनट तक आराम करने की अनुमति है।

परीक्षण आमतौर पर 2 से 5 मिनट के बाद सकारात्मक होता है, जब एक बेहोश गुलाबी रंग देखा जा सकता है। यदि 30 मिनट से 1 घंटे तक खड़े रहना छोड़ दिया जाए, तो रंग की तीव्रता अधिकतम (तीव्र लाल) होगी।

एक नकारात्मक परीक्षण दिखाई देगा जब शोरबा पीला हो जाता है। 1 घंटे के बाद, यदि परीक्षण नकारात्मक है, तो α-naphthol पर पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड की प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप एक तांबे का रंग बन सकता है।

तैयारी

मध्यम एमआर / वीपी

निर्जलित संस्कृति के माध्यम के 17 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। 5 मिनट के लिए खड़े हो जाओ। एक फोड़ा करने के लिए पूरी तरह से भंग करने के लिए गर्मी। ट्यूबों में 3 से 4 मिलीलीटर की सेवा करें और 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में बाँझ करें।

निर्जलित संस्कृति माध्यम रंग में बेज है और तैयार माध्यम रंग में हल्का एम्बर है।

माध्यम का अंतिम पीएच 6.9 pH 0.2 है।

वोग्स एक अभिकर्मक

Α-naphthol का 5 ग्राम वजन करें और एथिल अल्कोहल (पूर्ण) के 50 मिलीलीटर में भंग करें। तब तक एथिल अल्कोहल को जोड़ना जारी रखें जब तक कि यह 100 मिलीलीटर तक न पहुंच जाए।

वोग्स बी रीजेंट

पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड का 40 ग्राम वजन करें और एक बीकर में आसुत जल के 50 मिलीलीटर में भंग करें। तापमान को नियंत्रित करने के लिए ग्लास को ठंडे पानी के स्नान में रखा जाना चाहिए, क्योंकि जब तैयारी भंग हो जाती है, तो तापमान तेजी से बढ़ जाता है।

समाधान ठंडा होने के बाद, इसे एक वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित किया जाता है और आसुत जल के साथ 100 एमएल तक बनाया जाता है।

Voges-Proskauer परीक्षण प्रक्रिया

Voges-Proskauer परीक्षण करने के लिए, एक RM / VP शोरबा अध्ययन के तहत सूक्ष्मजीव के साथ inoculated है, एक शुद्ध संस्कृति से 18 से 24 घंटे के लिए।

इनोकुलम बहुत घना नहीं होना चाहिए। यह 24 से 48 घंटों के लिए 35-37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है, हालांकि कई दिनों तक ऊष्मायन कभी-कभी आवश्यक होता है। कोवान और स्टील की राय है कि एंटरोबैक्टीरियासी परिवार की सभी सकारात्मक वोग्स-प्रोस्कोर (वीपी) प्रजातियों का पता लगाने के लिए 5 दिनों का न्यूनतम ऊष्मायन समय आवश्यक है।

विकास का परीक्षण करें

एक ट्यूब में 1 एमएल विभाज्य को अलग करें और निम्नानुसार विकसित करें: वोग्स की 12 बूंदें (0.6 एमएल) एक अभिकर्मक और वोग्स बी की 4 बूंदें (0.2 एमएल) को मिलाएं। व्याख्या करने से पहले 5 से 10 मिनट के लिए। हालांकि, यदि परीक्षण अभी भी नकारात्मक है, तो उसे 30 मिनट से 1 घंटे के बाद ट्यूब बैठकर निरीक्षण करने दें।

गुलाबी-लाल रंग का दिखना इंगित करता है कि वोग्स-प्रोस्कोर की प्रतिक्रिया सकारात्मक है। यदि माध्यम पीला रहता है तो प्रतिक्रिया नकारात्मक होती है।

आदेश में डेवलपर्स को जोड़ा गया और संकेत दिया गया कि झूठी नकारात्मक से बचने के लिए आवश्यक है।

उपयोग

Voges-Proskauer परीक्षण ई। कोलाई के तनाव के बीच अंतर करने के लिए उपयोगी है, जो VP नकारात्मक हैं, जेनेरा क्लेबसिएला, एंटरोबैक्टीरिया, सेराटिया, दूसरों के बीच में, जो कि VP पॉजिटिव हैं।

स्रोत: कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल डायग्नोसिस। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एसए अर्जेंटीना।

क्यूए

नियंत्रण उपभेदों का उपयोग तैयार किए गए माध्यम की गुणवत्ता का परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है, जिसमें एस्चेरिचिया कोलाई एटीसीसी 25922, क्लेबसिएला निमोनिया एटीसीसी 700603, प्रोटीज मिराबिलिस एटीसीसी 43071, साल्मोनेला जिम्फ्यूरियम और एंटरोबैक्टर क्लोकेए एटीसीसी 13047 शामिल हैं।

अपेक्षित परिणाम केवल K. निमोनिया और ई। क्लोएके के लिए सकारात्मक वोगेस-प्रोस्कोर की प्रतिक्रियाएं हैं। बाकी नकारात्मक प्रतिक्रिया देते हैं।

संदर्भ

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