हो सकता है GRÜNWALD-GIEMSA दाग: औचित्य, तकनीक और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

मई Grünwald-Giemsa या Pappenheim दाग एक अंतर धुंधला तकनीक है कि घोला जा सकता है Giemsa और मई Grünwald अभिकर्मकों है। यह परिधीय रक्त और अस्थि मज्जा स्मीयरों में सामान्य और असामान्य रक्त कोशिकाओं के विभेदन के लिए और साथ ही हिस्टोलॉजिकल सेक्शन और साइटोलॉजिकल नमूनों के धुंधला होने के लिए उपयोग किया जाता है।

दोनों अभिकर्मक-गिइमेसा और मे ग्रुनवल्ड- रोमनोवस्की-टाइप धुंधला हो जाना, एक तकनीक है जो अम्लीय और मूल रंगों के संयोजन पर आधारित है।

स्मियर एक खंडित न्युट्रोफिल और क्रोनिक माइलॉयड ल्यूकेमिया के एक मामले में माइलोसाइट दिखाते हुए, मई ग्रैनवल्ड गिमेसा के दाग के साथ दाग दिया गया। डॉ। रेमन साइमन-लोपेज (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) Wikipedia.org के माध्यम से।

Giemsa ने ग्लिसरॉल के साथ ईओसिन, मिथाइलीन ब्लू और उनके डेरिवेटिव के मिश्रण को स्थिर करके तकनीक में सुधार किया। इसके बजाय, मई ग्रुनवल्ड सॉल्वेंट के रूप में मेथनॉल का उपयोग करते हुए, ईोसिन और मिथाइलीन नीले रंग का उपयोग करता है। इस रणनीतिक संयोजन ने उत्कृष्ट परिणाम प्राप्त किए हैं।

यद्यपि सेल आकृति विज्ञान के अवलोकन के संदर्भ में यह गिमेसा और राइट दाग के समान कार्य करता है, यह तकनीक मलेरिया, चगास रोग, लीशमैनियासिस और ट्राइकोमोनिएसिस का कारण बनने वाले परजीवियों के धुंधला को परिष्कृत करके पिछले वाले को बेहतर बनाती है।

इसके अतिरिक्त, यह शुक्राणु द्रव के साइटोलॉजिकल अध्ययन के लिए एक बहुत ही उपयोगी तकनीक साबित हुई है। यह न केवल शुक्राणु की रूपात्मक विशेषताओं को दिखा कर खड़ा हो गया है, बल्कि ल्यूकोसाइट्स, उपकला कोशिकाओं और शुक्राणुजनन कोशिकाओं को महान दक्षता के साथ अंतर करने की भी अनुमति देता है।

आधार

तकनीक रोमानोव्स्की दागों की नींव का अनुसरण करती है, जिसमें अम्लीय रंगों में बुनियादी सेलुलर घटकों के लिए चयनात्मक आत्मीयता होती है और अम्लीय घटक मूल दागों को आकर्षित करते हैं।

दूसरे तरीके से समझाया गया है, सेल संरचनाओं और रंजक दोनों में सकारात्मक या नकारात्मक विद्युत आवेश होते हैं; जैसे चार्ज रीपेल और विभिन्न चार्ज आकर्षित करते हैं।

उदाहरण के लिए, मेथिलीन ब्लू जैसे बुनियादी रंगों को सकारात्मक रूप से चार्ज किया जाता है और नकारात्मक चार्ज संरचनाओं के लिए आकर्षित किया जाता है। यही कारण है कि यह डाई डीएनए और आरएनए से समृद्ध नाभिक पर दाग लगाती है जिसमें फॉस्फेट समूह नकारात्मक रूप से चार्ज होते हैं।

खंडित बेसोफिल्स के कणिकाओं और आरएनए युक्त मोनोन्यूक्लियर सफेद रक्त कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म भी दागदार होते हैं।

इसी तरह, एसिड डाई एक नकारात्मक चार्ज करता है, यही वजह है कि यह एरिथ्रोसाइट्स और खंडों वाले ईोसिनोफिल्स के कणिकाओं जैसे सकारात्मक चार्ज संरचनाओं को बांधता है। खंडित न्यूट्रोफिल के कणिकाओं के लिए, ये दोनों रंगों को ठीक करते हैं।

रंगों की विविधता

इस तकनीक में ऑर्थोक्रोमैटिक और मेटाक्रोमैटिक डाइस सह-अस्तित्ववादियों के बीच प्रतिक्रियाओं का एक संयोजन है। ऑर्थोक्रोमैटिक्स (इओसिन और मेथिलीन ब्लू) कोशिका संरचना से जुड़ते हैं जिससे वे संबंधित होते हैं और एक स्थिर रंग प्रदान करते हैं जो भिन्न नहीं होते हैं।

दूसरी ओर, मेटाक्रोमैटिक्स (मिथाइलीन नीला अज़ुरे और अज़ूर बी का व्युत्पन्न), विशिष्ट संरचना से जुड़े होने के बाद उनके मूल रंग में भिन्नता है, और यहां तक ​​कि विभिन्न प्रकार के शेड भी हो सकते हैं।

अंत में, मई ग्रुनवल्ड समाधान के कदम को पानी की उपस्थिति की आवश्यकता होती है, क्योंकि इसके बिना डाई संरचनाओं में प्रवेश करेगी, लेकिन ठीक नहीं होगी। ऐसा होने के लिए, डाई को ध्रुवीय या आयनीकृत होना चाहिए, और इस प्रकार संबंधित संरचनाओं को बनाने और बांधने में सक्षम होना चाहिए।

तकनीक

सामग्री

- स्लाइड स्लाइड

- रंग के पुल।

- मई-ग्रेनवल्ड समाधान।

- गिमेसा दाग।

- आसुत जल।

Grünwald डाई केंद्रित समाधान हो सकता है

ईोसिन-मेथिलीन नीला (मई ग्रुनवल्ड के अनुसार दाग) का 0.25 ग्राम वजन और 100 मिलीलीटर मेथनॉल में भंग होना चाहिए। फिर तैयारी को 1 घंटे के लिए मिलाया जाता है और 24 घंटे आराम करने के लिए छोड़ दिया जाता है। समय के अंत में, इसे फ़िल्टर्ड किया जाता है।

तकनीक को लागू करने के लिए, मई ग्रुनवल्ड डाई को निम्न प्रकार से पतला किया जाना चाहिए: 200 मिलीलीटर पतला डाई के लिए, केंद्रित समाधान के 30 मिलीलीटर को मापें, 20 मिलीलीटर बफर समाधान और 150 मिलीलीटर आसुत जल को पीएच 7.2-7.3 में समायोजित करें । बाद में इसे मिश्रित और फ़िल्टर किया जाता है।

गिम्सा दाग ध्यान केंद्रित

एज़्योर-एओसिन-मेथिलीन ब्लू (गिम्स के अनुसार दाग) का 0.5 ग्राम वजन किया जाना चाहिए, 50 मिलीलीटर मेथनॉल में भंग और 50 मिलीलीटर ग्लिसरीन को मिश्रण में जोड़ा जाता है।

तकनीक को निष्पादित करने के लिए, बफर समाधान के साथ 1:10 पतला करें और इसे 10 मिनट के लिए आराम दें। यदि आवश्यक हो तो इसे फ़िल्टर किया जा सकता है।

पीएच 7.2 पर बफर समाधान की तैयारी

उन्हें तौला जाना चाहिए:

- 40 मिलीग्राम पोटेशियम डि-हाइड्रोजन फॉस्फेट (KH2PO4)।

- 151 मिलीग्राम डी-सोडियम हाइड्रोजन फॉस्फेट 12-हाइड्रेट (Na2HPO4)।

दोनों यौगिकों को 100 मिलीलीटर पानी में भंग कर दिया जाता है।

रक्त या अस्थि मज्जा धब्बा धुंधला प्रक्रिया

दो मोड हैं: एक क्लासिक और एक तेज़।

क्लासिक मोड

1. 2 से 3 मिनट के लिए पतला मई-ग्रैनवल्ड समाधान के साथ कवर करें।
2. पिछले समाधान को हटाने के लिए बफ़र्ड डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।
3. समान बफ़र्ड वॉश सॉल्यूशन के साथ कवर करें और 1 मिनट के लिए छोड़ दें। यह विचार है कि पिछली डाई संरचनाओं के लिए तय है और एक ही समय में, कोशिकाओं को हाइड्रेटेड किया जाता है।
4. बफर किए गए पानी में पतला गिमेसा टिंचर की 12 बूंदें मिलाएं और मिश्रण और होमोजेनीज़ को उड़ा दें। इसे 15 से 20 मिनट तक आराम दें।
5. बफ़र्ड डिस्टिल्ड वॉटर और एयर ड्राई जगह पर स्मियर धोएं।
6. 40X उद्देश्य का उपयोग करके एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत सना हुआ रक्त कोशिकाओं को ध्यान केंद्रित करें और देखें। यदि आवश्यक हो, तो 100X का उपयोग किया जा सकता है।

त्वरित मोड

1. 1 मिनट के लिए पतला Grünwald दाग के साथ स्मीयर को कवर करें।
2. बफ़र्ड डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।
3. बफ़र्ड पानी के साथ कवर करें और इसे 1 मिनट के लिए आराम दें।
4. पतला गिमेसा दाग जोड़ें और 5 मिनट के लिए छोड़ दें।
5. बफ़र्ड डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं और हवा को सूखने दें।

यहां वर्णित तकनीकें एक दिशानिर्देश हैं, लेकिन यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि अभिकर्मकों को वितरित करने वाली वाणिज्यिक कंपनी के अनुसार प्रक्रिया और धुंधला समय भिन्न होता है। प्रत्येक वाणिज्यिक घर द्वारा सख्ती से इंगित किए गए चरणों का पालन करना उचित है।

शुक्राणु द्रव के स्मीयरों को रंगने की तकनीक

1- स्मीयर को 4 मिनट के लिए मई ग्रुनवल्ड समाधान की एक पतली परत के साथ कवर करें।

2- कलरेंट निकालें और डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।

3- आसुत जल में 15 मिनट के लिए पतला गिमेसा (1:10) की एक परत रखें।

4- डाई निकालें और डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं।

5- खुर्दबीन के नीचे सूखने और निरीक्षण करने दें।

मई ग्रुनवल्ड गिमेसा दाग के साथ अपेक्षित रंग

महत्वपूर्ण विनिर्देश

तकनीक की आवश्यकता है कि अभिकर्मकों और धुलाई समाधानों का पीएच 7.2 से -7.3 तक समायोजित किया गया है, ताकि सेलुलर संरचनाओं के लिए रंजक की विकृतियां विकृत न हों और अपेक्षित अंतिम रंग भिन्न न हो।

अनुप्रयोग

इस तकनीक का उपयोग नैदानिक ​​प्रयोगशालाओं द्वारा परिधीय रक्त और अस्थि मज्जा स्मीयरों, ऊतक वर्गों और साइटोलॉजी को दागने के लिए किया जाता है।

हीमेटोलॉजिकल क्षेत्र में, आकार, आकार और संख्या के संदर्भ में कोशिकाओं की असामान्यताओं के अध्ययन में इस तकनीक का महत्वपूर्ण महत्व है। यह कुछ बीमारियों के निदान के लिए एक बहुत ही मूल्यवान उपकरण है, जैसे कि ल्यूकेमिया और एनीमिया।

इसके अलावा, यह हेमेटोलॉजिकल (प्लास्मोडियम एसपी और ट्रिपैनोसोमा क्रेजी) या हिस्टोलॉजिकल (लीशमैनिया एसपी) क्षेत्रों में परजीवियों की तलाश में उत्कृष्ट उपयोगिता है।

योनि कोशिका विज्ञान

योनि कोशिका विज्ञान के संबंध में, यह तकनीक विशेष रूप से त्रिचोमोनास योनि के निरीक्षण के लिए फायदेमंद है। यह एक महत्वपूर्ण खोज है, क्योंकि इसकी उपस्थिति स्वस्थानी चित्रों में कार्सिनोमा का अनुकरण करती है जो बाद में परजीवी को समाप्त करने पर गायब हो जाती है।

शुक्राणु का नमूना

यह शुक्राणु के नमूनों के अध्ययन के लिए एक आदर्श उपकरण है, क्योंकि यह शुक्राणु की गुणवत्ता पर बहुमूल्य जानकारी प्रदान करता है।

यह जो डेटा प्रदान करता है वह मुख्य रूप से संख्या और आकृति विज्ञान के साथ-साथ सहवर्ती कोशिकाओं के साथ होता है जो मौजूद हो सकते हैं और जो कि महत्वपूर्ण हैं, जैसे रोगाणु कोशिकाएं, ल्यूकोसाइट्स और उपकला कोशिकाएं।

इस विश्लेषण के साथ शुक्राणु में सिर, गर्दन, मिडपीस और मुख्य टुकड़े में देखी गई असामान्यताओं का वर्णन करना संभव है।

इसके अलावा, वे हेमोस्पर्मिया (वीर्य में लाल रक्त कोशिकाओं की उपस्थिति) और ल्यूकोस्पर्मिया या पियोस्पर्मिया (वीर्य में ल्यूकोसाइट्स की संख्या में वृद्धि) के मामलों को दिखाने में भी मदद कर सकते हैं।

संदर्भ

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