राइट का दाग: औचित्य, सामग्री, तकनीक और उपयोग - जीवविज्ञान - 2025

राइट दाग 1902 में अमेरिकी रोगविज्ञानी जेम्स होमर राइट द्वारा बनाई गई एक धुंधला तकनीक, Romanowsky दाग पर आधारित है। चूंकि रोमानोव्स्की का दाग अस्थिर था, राइट ने मेथनॉल को एक विलायक और जुड़नार के रूप में शामिल किया।

यह रंग पॉलीक्रोमैटिक है, जिसका अर्थ है कि यह डाई को अवशोषित करने वाली संरचना के आधार पर कई रंग उत्पन्न करता है। यह धुंधला तकनीक व्यापक रूप से अंतर श्वेत रक्त कोशिका की गणना करने और परिधीय रक्त और अस्थि मज्जा में लाल रक्त कोशिकाओं, प्लेटलेट्स और ल्यूकोसाइट्स के आकारिकी का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया गया है।

राइट के दाग के साथ विभिन्न परिधीय रक्त धब्बा। ए एरिथ्रोसाइट के भीतर तीव्र ल्यूकेमिया बी। प्लास्मोडियम विवैक्स। सी। प्लास्मोडियम फाल्सीपेरम, मैक्रोगामेटोसिट। डी। लिम्फोसाइट

इसका आवेदन बहुत महत्वपूर्ण है, क्योंकि असामान्यताओं को रक्त की विभिन्न कोशिका लाइनों में देखा जा सकता है, जिससे ल्यूकेमिया या बैक्टीरिया या परजीवी संक्रमण जैसे रोगों के निदान की सुविधा मिलती है।

शायद ये सबसे आम अनुप्रयोग हैं जिनमें इस तकनीक का उपयोग किया जाता है, हालांकि वे केवल यही नहीं हैं। यह रक्त और अस्थि मज्जा के अलावा अन्य नमूनों में भी उपयोगी है, जैसे कि नाक का स्त्राव, फेकल बलगम, थूक, त्वचा के नमूने, अन्य।

राइट के दाग के लिए तर्क

राइट दाग रोमनोवस्की दाग ​​से पैदा हुआ था, जिसमें एक एसिड डाई (ईओसिन वाई) और एक मूल डाई (मिथाइलीन नीला) और उनके ऑक्सीकरण उत्पादों के मिथाइल अल्कोहल समाधान होते हैं।

राइट के दाग में उपयोग किए जाने वाले रंगों के मिश्रण से रोमोस्की का प्रभाव ज्ञात होता है, अर्थात यह ल्यूकोसाइट्स और न्यूट्रोफिलिक ग्रैन्यूल के नाभिक को एक सुंदर बैंगनी रंग देता है, जबकि लाल रक्त कोशिकाएं गुलाबी रंग की हो जाती हैं।

राइट के दाग के विशिष्ट रंग सरगम ​​देने के लिए जिम्मेदार घटक नीले बी और ईओसिन वाई हैं। मनाया गया प्रभाव रासायनिक संरचनाओं के रंगों के बंधन और नीले बी और ईओसिन वाई के परस्पर संबंधों पर निर्भर करेगा।

न्यूक्लिक एसिड, परमाणु प्रोटीन और कुछ सेल प्रकारों के प्रतिक्रियाशील अपरिपक्व साइटोप्लाज्म जैसे अम्लीय संरचनाएं, नीले बी (मूल दाग) को ठीक करती हैं।

जबकि बुनियादी संरचनाएं जैसे कि हीमोग्लोबिन, अन्य कोशिकीय संरचनाओं के बीच खंडों वाले ईोसिनोफिल्स के कण, ईओसिन वाई (एसिड डाई) को बांधते हैं।

धुंधला परिणाम विभिन्न कारकों से प्रभावित हो सकता है, जैसे राइट डाई का पीएच, बफर और वॉश समाधान; साथ ही धुंधला और निर्धारण समय।

इसलिए, अभिकर्मकों की तैयारी में प्रत्येक कदम महत्वपूर्ण है और हर विवरण पर ध्यान देना चाहिए।

सामग्री

राइट का दाग। 100 एमएल के लिए यह आवश्यक है:

राइट के दाग का 0.3 ग्राम वजन, 97 मिलीलीटर मेथनॉल और 3 मिलीलीटर ग्लिसरॉल को मापें।

तैयारी

मोर्टार में, राइट के colorant की भारी मात्रा रखें और धीरे-धीरे ग्लिसरॉल को शामिल करें जब तक कि पाउडर पूरी तरह से भंग न हो जाए।

इसके बाद, मेथनॉल मिलाया जाता है, मिश्रित होता है और एक एम्बर बोतल में डाला जाता है।

उपयोग करने से पहले, समाधान को कोमल आंदोलनों के साथ हिलाया जाना चाहिए और फ़िल्टर किया जाना चाहिए।

बफर बफर समाधान

डिस्टिल्ड वॉटर के एक लीटर में, 3.76 ग्राम डिसोडियम हाइड्रोफॉस्फेट (Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0) और 2.1 ग्राम डाइहाइड्रोजेन पोटैशियम फॉस्फेट (KH ₂ PO ₄) मिलाया जाता है।

बहुत अच्छी तरह से मिलाएं जब तक कि सभी शामिल अभिकर्मकों को भंग नहीं किया जाता है। पीएच को 7.2 पर समायोजित करें। एक ग्लास जार में डालो और कमरे के तापमान पर रखें।

रंग प्रदर्शन करने के लिए आवश्यक अतिरिक्त सामग्री

इसके अतिरिक्त, अन्य सामग्रियों को रंग तकनीक को पूरा करने में सक्षम होना आवश्यक है, ये हैं: वस्तु स्लाइड या कवर, रंग पुल, धोने के लिए पानी या बफर के साथ टी-शर्ट, रंग समय और कुछ सुखाने की सामग्री रखने के लिए एक स्टॉपवॉच। (शोषक कागज, धुंध या कपास)।

राइट के दाग के घटक

मेथनॉल

अल्कोहल (मेथनॉल) स्लाइड को रक्त स्मीयर के एक जुड़नार के रूप में कार्य करता है।

यह मूल रूप से एक coagulant कम करने, निर्जलीकरण और अभिकर्मक फिक्सिंग है। इसलिए, इसका कार्य प्रोटीन को जमा देना और उन्हें अघुलनशील बनाना है, लेकिन वास्तव में उन्हें बदनाम किए बिना।

मेथनॉल सभी प्रयोगशालाओं में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला स्मीयर निर्धारण अभिकर्मक है, क्योंकि यह इथेनॉल की तुलना में बेहतर परिणाम प्रदान करता है। आदर्श एकाग्रता 99% है।

स्पंज

बफर (बफ़र्ड सॉल्यूशन) में डाई के पीएच को समायोजित करने या बनाए रखने का कार्य होता है, क्योंकि 7.2 के लिए समायोजित पीएच सेल संरचनाओं को ठीक से अवशोषित करने में सक्षम होने के लिए आवश्यक है।

दूसरी ओर, मेथनॉल निर्धारण कदम कोशिकाओं को निर्जलित करता है और बफर उन्हें फिर से सक्रिय करने में मदद करता है।

Eosin (Y)

इओसिन का निर्माण ब्लॉकों के लिए एक समानता है क्योंकि यह एक एसिड डाई है। दो प्रकार के इओसिन को एक-दूसरे के समान रूप से जाना जाता है, इतना ही कि दोनों में से किसी एक का उपयोग किया जा सकता है, एक ही परिणाम प्राप्त करता है।

एक को ईओसिन वाई, पीला ईोसिन, या टेट्राब्रोमोफ्लोरेसिन कहा जाता है, और दूसरे को ईओसिन बी, ब्लूिश एरिथ्रोसिन बी, या डिब्रोमोडिनिट्रोफ्लोरोसेन कहा जाता है। हालांकि, ईोसिन वाई सबसे अधिक उपयोग किया जाता है।

इस डाई की सबसे महत्वपूर्ण संपत्ति इसकी नकारात्मक ध्रुवीयता है, इससे यह सकारात्मक रूप से चार्ज सेल संरचनाओं के लिए आकर्षित होता है।

मेथिलीन ब्लू

यह मूल रंग है। इसकी मुख्य संपत्ति मेटाक्रोमैसिया है, अर्थात्, सभी संरचनाओं को एक ही रंग से दाग नहीं दिया जाएगा, यह संरचनाओं की रासायनिक संरचना पर निर्भर करता है जो रंगीन हो रहे हैं।

कुछ हल्के या गहरे नीले रंग में बदल जाएंगे, और कुछ गहरे बैंगनी या हल्के बकाइन को बदल देंगे।

तकनीक

1-नमूने के फैलाव को निष्पादित करें ताकि एक पतली फिल्म बनी रहे, या तो एक स्लाइड या coverslip पर।

2-इसे लगभग 2 घंटे तक हवा में सूखने दें।

3-सैंपल के फैलने के साथ धुंधला हो जाना या धुंधला हो जाने वाले ट्रे पर ड्राई स्मियर रखें।

4-पूरी सतह को ढंकने तक शीट को राइट स्टेन ड्रॉप के साथ कवर करें। 5 - 8 मिनट के लिए छोड़ दें।

5-दाग को पूरी तरह से स्लाइड को कवर करना चाहिए, किनारों पर फैलने के बिना। यदि रंग भरने के समय में यह वाष्पित होने लगे, तो कुछ अतिरिक्त बूंदें डालें।

6-बाद में सदमे अवशोषक की एक समान मात्रा जोड़ें, थोड़ा सा झटका जब तक विशेषता धातु चमक दिखाई नहीं देती। समय 10 से 15 मिनट।

7-नल के पानी से धोएं, जब तक शीट गुलाबी न दिखे तब तक कोमल धारा रखें।

8-शराब में भिगोए गए धुंध के साथ, स्लाइड के पीछे की तरफ लगी डाई को हटा दें।

9-माइक्रोस्कोप के नीचे विसर्जन तेल को देखने से पहले धब्बा को अच्छी तरह से सूखने दें।

उपयोगिता

रुधिर

यह परिधीय रक्त स्मीयरों के धुंधला होने के लिए, मोटे रक्त स्मीयरों की जांच के लिए और अस्थि मज्जा के नमूनों से कोशिकाओं के अध्ययन के लिए आदर्श है।

रंजक के इस संयोजन के रासायनिक गुणों के कारण, सेल संरचनाओं को आसानी से पहचाना जा सकता है, और मौजूद विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं को प्रतिष्ठित किया जा सकता है।

बहती नाक

यह तकनीक एलर्जी रिनिटिस के निदान में नाक के स्त्राव (उपकला कोशिकाओं, खंडित इओसिनोफिल्स, पॉलीमोर्फोनॉक्लियर कोशिकाओं) की कोशिकाओं की पहचान करने के लिए बहुत उपयोगी है।

Parasitology

इस अर्थ में, यह त्वचा के अल्सर में चमड़े के नीचे सेलुलर ऊतक के हिस्टियोसाइट्स के भीतर लीशमैनिया सपा के अध्ययन के लिए उपयोगी रहा है। इसी तरह, इसका उपयोग मल के नमूनों (फेकल ल्यूकोग्राम) में ल्यूकोसाइट्स की पहचान करने के लिए किया जाता है।

इस मामले में, यह जानने के लिए चिकित्सक की दिलचस्पी है कि क्या मल में मौजूद ल्यूकोसाइटोसिस पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर या मोनोन्यूक्लियर है। फेकल ल्यूकोग्राम में यह पता लगाएगा कि क्या यह एक जीवाणु या वायरल संक्रमण है।

दूसरी ओर, रक्त में घूमने वाले परजीवी एरिथ्रोसाइट के भीतर या प्लाज्मा में मुक्त पाए जा सकते हैं। मांगे गए परजीवी प्लास्मोडियम एसपीपी, ट्रायपोनोसोमा क्रूज़ी और फाइलेरिया हैं, और पशु चिकित्सा में यह थाइलेरिया इक्वी और बेबेसिया कैबल्ली, बेज़ियोसिस के कारण एजेंटों के लिए खोज में उपयोगी है, विशेष रूप से घोड़ों में।

राइट का दाग और गिमेसा का दाग भी सामान्य कोशिकीय घटकों से हीमोपार्साइट को अलग करना संभव बनाता है। इसके लिए दो प्रकार के स्प्रेड का उपयोग किया जा सकता है:

फैला हुआ पतला

स्लाइड पर रक्त एक पतली फिल्म के रूप में फैलता है। यह नाभिक और साइटोप्लाज्म की विशेषताओं को प्रकट करते हुए राइट के दाग से सना हुआ है।

मोटी बूंद

इस पद्धति का उपयोग रक्त की एक बड़ी मात्रा में परजीवियों की उपस्थिति की जांच करने के लिए किया जाता है।

ऐसा करने के लिए, एक स्लाइड पर रक्त की एक बड़ी बूंद रखी जाती है। एक बार, इसे डिफाइब्रिलेटेड किया जाना चाहिए, एक और स्लाइड के किनारे का उपयोग करके, केंद्र से बाहर की ओर बड़े और बड़े सर्कल बनाते हैं।

अंत में, मोटी धब्बा में परजीवियों का निरीक्षण करने में सक्षम होने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स को पानी से सना हुआ होना चाहिए।

श्वासप्रणाली में संक्रमण

श्वसन स्तर पर, यह तकनीक उपयोगी भी है, क्योंकि थूक, ब्रोन्कियल लवेज या ब्रोन्कोएलेवोलर के नमूनों में मौजूद कोशिकाएं निदान स्थापित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं।

इसी तरह, पॉलीमॉर्फोन्यूक्लियर सेल और मोनोन्यूक्लियर सेल को यहां प्रतिष्ठित किया जा सकता है।

जीवाणुतत्व

बैक्टीरियोलॉजी में इस तकनीक का उपयोग सीमित है, क्योंकि यह बैक्टीरिया को धुंधला करने के लिए अच्छा नहीं है, यही कारण है कि उनके धुंधला होने के लिए अन्य विशेष धुंधला तकनीक का उपयोग किया जाता है।

हालांकि, इसका उपयोग क्लैमाइडिया ट्रैकोमैटिस के साथ उपकला कोशिकाओं को मूत्रमार्ग या एंडोकेरिकल म्यूकोसा स्मीयरों में शामिल करने के लिए किया जाता है, हालांकि यह माना जाना चाहिए कि यह इसके लिए सबसे अच्छा तरीका नहीं है।

संक्रमित रोगियों में लाल रक्त कोशिकाओं के बीच बोरेलिया बरगदोर्फी जैसे सर्पिल जैसे बैक्टीरिया का निरीक्षण करना संभव है, साथ ही साथ रक्त में लिम्फोसाइट्स, मोनोसाइट्स, या न्यूट्रोफिल के साइटोप्लाज्म में इथ्रेलिया के मोरुला या समावेश शरीर शामिल हैं।

कवक विज्ञान

हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलटम एक रोगजनक कवक है जिसे अक्सर विभिन्न ऊतक नमूनों के सूक्ष्म अवलोकन द्वारा निदान किया जाता है, जो राइट के दाग के साथ दाग होता है।

राइट के दाग के साथ रक्त के नमूने की संरचना कैसे देखी जाती है?

स्रोत: रीटामेल्स ई, माजो वी। इंस्टीट्यूट ऑफ पब्लिक हेल्थ, चिली सरकार। रक्त के धुंधला होने के लिए सिफारिशें हेमोग्राम पढ़ने के लिए स्मीयर करती हैं।

अच्छे धुंधला के लिए सिफारिशें

ब्लड सैंपल स्लाइड को अनायास हवा सुखा देना चाहिए। स्मीयर डाई के बेहतर निर्धारण को प्राप्त करने के लिए जितना संभव हो उतना पतला होना चाहिए और अति-धुंधला होने से बचना चाहिए।

उच्च गुणवत्ता वाले धुंधला होने के लिए, स्मीयर तैयारी के दो घंटे के भीतर दाग लगाने की सलाह दी जाती है। दूसरी ओर, आदर्श नमूना केशिका रक्त है, बिना थक्कारोधी।

हालांकि, अगर शिरापरक रक्त का उपयोग किया जाता है, तो इसे एक एंटीकोआगुलेंट ईडीटीए के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए और हेपरिन नहीं, क्योंकि बाद में कोशिका संरचनाओं को विकृत कर सकते हैं।

तैयार किए गए colorant की गिरावट से बचने के लिए, इसे सूखे स्थानों में संग्रहीत किया जाना चाहिए।

धोने की प्रक्रिया के दौरान तटस्थ पीएच में समायोजित पानी के उपयोग की सिफारिश की जाती है।

अंत में, समय-समय पर प्रयोगशाला में उपयोग किए जाने वाले धुंधला तरीकों का परीक्षण करना उचित है।

यह गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में नमूने या विस्तारित पैटर्न को धुंधला करके किया जाता है। यह कदम महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह सुनिश्चित करता है कि धुंधला ठीक से तैयार है और धुंधला समय अच्छी तरह से मानकीकृत है।

यदि पैटर्न शीट खराब रंग की है, तो ऐसी समस्याएं हैं जिन्हें हल किया जाना चाहिए।

राइट धुंधला में आम गलतियाँ

बहुत पीला धुंधला

बहुत हल्के स्मीयर आमतौर पर बहुत कम धुंधला समय या अत्यधिक धोने के कारण होते हैं। यह डाई के साथ संपर्क समय को लंबा करने या धोने के समय को कम करके सही किया जाता है।

Colorant precipitates

स्मीयर में डाई के अवक्षेप की उपस्थिति के कई कारण हो सकते हैं, हालांकि, सबसे अधिक लगातार कारण हैं: अनफ़िल्टर्ड डाई का उपयोग, असमान धुंधला पुलों पर धुंधला हो जाना, धूल या तेल से गंदी चादर का उपयोग करना, अच्छी तरह से धोना नहीं। पूरा धुंधला हो जाना।

अत्यधिक लाल या नीला धब्बा

डाई के पीएच के लिए बफर जिम्मेदार है। संकेतित (अम्लीय) नीचे एक पीएच के साथ रंजक बहुत लाल धब्बा में परिणाम देगा।

यदि डाई का पीएच ऊपर है (क्षारीय) तो एक अत्यधिक नीले धब्बा प्राप्त किया जाएगा।

भंडारण मोड

अभिकर्मक को कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जाना चाहिए।

संदर्भ

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