नकारात्मक धुंधला: औचित्य, तकनीक, फायदे और नुकसान - जीवविज्ञान - 2025

नकारात्मक धुंधला विशेष रंग की एक विधि कुछ सूक्ष्मजीवों में कैप्सूल की उपस्थिति को उजागर करना है, मुख्य रूप से स्ट्रैपटोकोकस निमोनिया, क्लेबसिएला निमोनिया और क्रिप्टोकोकस neoformans-, चिकित्सकीय नमूने या शुद्ध संस्कृतियों से।

नकारात्मक धुंधला लगाने के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला प्रत्यक्ष नमूना मस्तिष्कमेरु द्रव है। यह तकनीक मेनिन्जाइटिस के विशेष रूप से क्रिप्टोकोकस नवोफॉर्मन्स के अनुमानात्मक निदान के लिए एक तेजी से विकल्प का प्रतिनिधित्व करती है।

ए। डेंटल टैटार को भारत की स्याही के साथ दाग दिया गया, बी। क्रिप्टोकोकस नियोफोर्मन्स वर् गट्टी ने कमजोर रूप से एनकैप्सुलेट किया क्योंकि यह प्रकृति में निग्रोसिन का उपयोग करता है। सी। क्रिप्टोकोकस नियोफोरमन्स वर्टी एक गाढ़े कैप्सूल के साथ जैसा कि इसके परजीवी रूप में पाया जाता है, निग्रोसिन का उपयोग करते हुए। डी। क्रिप्टोकोकस neoformans थोड़ा पतला भारत स्याही के साथ। विकिमीडिया कॉमन्स / सीडीसी, विकिमीडिया कॉमन्स / फोटो क्रेडिट के माध्यम से गिसेल क्विंडे, सामग्री प्रदाता: सीडीसी / डॉ। लीनोर हेली, विकिमीडिया कॉमन्स के माध्यम से

इसी तरह, इस दाग को सामान्य रूप से थूक और बाँझ तरल पदार्थ पर लागू किया जा सकता है, साथ ही पुरानी संस्कृतियों से प्राप्त उपभेदों पर भी लगाया जा सकता है। यह तकनीक इसके निष्पादन के लिए नाइग्रोसिन या भारत स्याही का उपयोग करती है; इसलिए, यह लागू करने के लिए एक बहुत ही सरल और सस्ती पद्धति है जो थोड़े समय में महान नैदानिक ​​मूल्य की जानकारी प्रदान करता है।

इस अर्थ में, कोई भी प्रयोगशाला इस धुंधला प्रदर्शन करने में सक्षम है। बेशक, प्रयोगशाला में सक्षम कर्मियों को अलग-थलग या नवोदित क्रिप्टोकोकस नियोफोर्मंस खमीर को पहचानने और उन्हें ल्यूकोसाइट्स और कलाकृतियों से अलग करने में सक्षम होना चाहिए जो नमूना पेश कर सकते हैं।

आधार

निग्रोसिन और भारत स्याही एक समान तरीके से काम करते हैं; इसलिए, दोनों में से किसी भी एक पदार्थ का परस्पर उपयोग किया जा सकता है।

इस तकनीक को नकारात्मक धुंधला कहा जाता है क्योंकि यह धुंधला तकनीक के बाकी हिस्सों के विपरीत कार्य करता है। इसमें, जो कुछ भी नहीं बचा है वह वह संरचना है जिसे मांगा जा रहा है या जिसे कोई देखना चाहता है; वह है, सूक्ष्मजीव।

इसलिए, धुंधला हो जाना धब्बा के नीचे एक गहरे रंग को धुंधला करने पर आधारित है। इस परिदृश्य में, कैप्सूलेटेड संरचनाएँ हल्के या बेरंग रंग में होंगी।

सामान्य तौर पर, यीस्ट रिफ्रेंटेंट होते हैं, जो एक स्पष्ट प्रभामंडल से घिरा होता है जो कैप्सूल से मेल खाता है। यह इसलिए होता है क्योंकि भारत स्याही और निग्रोसिन ऐसे पदार्थ हैं जो पॉलीसैकराइड को भेदने में असमर्थ होते हैं जो जीवित सूक्ष्मजीवों का कैप्सूल बनाते हैं।

यह ध्यान देने योग्य है कि अन्य संरचनाएं जो प्रत्यक्ष नमूने में मौजूद हो सकती हैं, जैसे कि ल्यूकोसाइट्स या लाल रक्त कोशिकाएं, या तो घुसना नहीं करती हैं।

हालांकि, यदि सूक्ष्मजीव मृत हैं, तो डाई उनके अंदर घुस सकती है, ताकि सूक्ष्मजीवों की व्यवहार्यता का मूल्यांकन करने के लिए यह धुंधला भी उपयोगी हो।

तकनीक

सामग्री

Nigrosine

निगारोसिन के पास इसके काले रंग का नाम है। यह एक सिंथेटिक पदार्थ है जो कार्बनिक यौगिकों के मिश्रण को नाइट्रोबेनाज़िन, एनिलिन और एनिलिन हाइड्रोक्लोराइट के रूप में गर्म करके प्राप्त किया जाता है- जो कि एक प्रतिक्रिया में उत्प्रेरक (लोहा या तांबा) का उपयोग करता है।

चीनी स्याही

चीनी स्याही एक ऐसा पदार्थ है जिसका उपयोग मुख्य रूप से एशियाई लोग लिखने, कला के काम करने और मोनोक्रोमैटिक पेंटिंग के लिए करते हैं। यह चीनी संस्कृति में बहुत लोकप्रिय है।

यह निचली राल वाले पेड़ों के जलने के उत्पाद चूर्णित लकड़ी का कोयला के साथ मिश्रित स्क्वीड स्याही से प्राप्त किया जाता है।

यह एक प्रोटीन जिलेटिन के साथ हाइड्रोकार्बन (वनस्पति तेलों) के भस्म से कालिख से तैयार करना भी संभव है, जो कार्बन कणों की वर्षा से बचने के लिए इसे सही स्थिरता देता है।

नमूने के लिए विनिर्देशों

- इसमें उपवास की आवश्यकता नहीं है।

- सीएसएफ, थूक या बाँझ तरल नमूने में कम से कम 1 मिलीलीटर मात्रा होनी चाहिए और तुरंत कमरे के तापमान पर प्रयोगशाला में स्थानांतरित किया जाना चाहिए।

- सीएसएफ और बाँझ तरल पदार्थ के नमूनों को एक विशेष चिकित्सक द्वारा लिया जाना चाहिए।

- यह पूर्वोक्त रोगजनकों से जुड़े एक संदिग्ध तनाव की शुद्ध संस्कृति भी हो सकती है।

प्रत्यक्ष नमूनों के साथ तकनीक का निष्पादन

- नमूनों को सेंट्रीफ्यूग किया जाना चाहिए, फिर सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया जाता है और तलछट ली जाती है।

- सेंट्रीफ्यूगेड मैटेरियल (तलछट) की एक बूंद और भारत की स्याही या निग्रोसिन की एक बूंद को साफ स्लाइड पर रखा जाता है।

- इसे अच्छी तरह से मिलाया जाना चाहिए और एक कवरलाइन शीट के साथ कवर किया जाना चाहिए, जिससे किनारों पर जाने के बिना ड्रॉप एक पतली फिल्म के रूप में फैल सकती है।

- इसके बाद, तैयारी माइक्रोस्कोप पर मुहिम शुरू की है।

- यदि तैयारी बहुत अधिक अंधेरे है, तो इसे पानी से पतला किया जा सकता है।

संस्कृति से उपभेदों के साथ तकनीक का निष्पादन

- युवा संस्कृति का एक बहुत छोटा हिस्सा सीडिंग सुई के साथ लिया जाता है और एक स्वच्छ स्लाइड पर पहले से रखी गई भारत स्याही की एक बूंद में घुल जाता है।

- शीर्ष पर एक आवरण रखा गया है।

- यह माइक्रोस्कोप में 10X और फिर 40X पर देखा जाता है।

आप आसुत जल में कॉलोनी के एक हिस्से को भी भंग कर सकते हैं, और वहां से एक बूंद लें और इसे भारत की स्याही के साथ मिलाएं। इस तरह, तैयारी इतनी मोटी नहीं होगी, जिससे अलगाव में संरचनाओं का निरीक्षण करना संभव होगा; अगर भीड़ होती है, तो यह अच्छी तरह से मनाया नहीं जाएगा।

एक अन्य कार्यप्रणाली निम्नलिखित है:

- स्लाइड के एक छोर पर निलंबन संस्कृति की एक बूंद रखें।

- एक ही छोर पर निग्रोसिन की एक बूंद रखें और मिलाएं।

- एक अन्य स्लाइड की मदद से, नमूना फैलाएं जैसे कि एक हेमटोलॉजिकल स्मीयर बनाते हुए।

- खुर्दबीन के नीचे सूखने और निरीक्षण करने दें।

माइक्रोस्कोप अवलोकन

क्षेत्र के बारे में विस्तृत दृष्टिकोण रखने के लिए आपको पहले 10X उद्देश्य के साथ ध्यान केंद्रित करना होगा। इसके बाद, यदि रिक्त स्थान हैं, तो इसे मांगा जाना चाहिए; यदि हैं, तो विवरण देखने के लिए 40X पर ध्यान केंद्रित करें।

फायदा

- इसे निष्पादित करना आसान है।

- यह एक सस्ती तकनीक है।

- इस विधि की आवश्यकता नहीं है कि धब्बा गर्मी या रसायनों के साथ तय किया जाना चाहिए; इसलिए, सूक्ष्मजीव विकृतियों के बिना देखे जाते हैं।

- ताजा तैयारी को सूखने की आवश्यकता नहीं है, इसलिए इसे तुरंत मनाया जा सकता है, जिससे परिणाम जल्दी बन सकते हैं।

हानि

एक बार इकट्ठे होने के बाद, ताजा तैयारी तुरंत देखी जानी चाहिए; अगर उन्हें सूखने दिया जाता है तो उनका पालन करना संभव नहीं है और एक नया स्थापित किया जाना चाहिए।

भारत की स्याही से धुंधला हो जाना

एक अन्य कार्य जो भारत स्याही को पूरा कर सकता है वह पैथोलॉजी प्रयोगशालाओं में है। यह ट्यूमर के लकीर के मार्जिन को चिह्नित करने के लिए सर्जिकल रूप से निकाले गए ऊतक के नमूनों पर लागू किया जाता है।

चिह्नित ऊतक को एसिटिक एसिड के साथ छिड़का जाता है। यह एक मोर्डेंट के रूप में कार्य करता है और जब बायोप्सी की तैयारी के लिए ऊतक को नियमित प्रसंस्करण के अधीन किया जाता है तो स्याही को बाहर निकलने से रोकता है।

इस प्रक्रिया में अल्कोहल और ज़ाइलीन में ऊतक को स्नान किया जाता है, और फिर इसे पैराफिन वैक्स में भिगोया जाता है। यह अंकन ऊतक का अवलोकन करते समय पैथोलॉजिस्ट का मार्गदर्शन करता है, यह दर्शाता है कि सर्जिकल रिसेशन मार्जिन या अन्य रुचि बिंदु कहां है।

संदर्भ

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